慢性乙肝病毒感染者乙肝病毒血清标志物与HBV DNA的相关性分析
作者：李新建 马金春 汪宏良
单位：李新建 马金春(湖北省黄石市冶钢集团公司医院传染科，黄石 435000)；汪宏良(湖北省黄石市传染病医院，黄石 435000)
关键词：
咸宁医学院学报990422 本文对204例慢性乙肝患者与病毒感染携带者的乙肝病毒血清标志物(HBVM)，应用聚合酶链反应(PCR)技术检测了HBV DNA。并根据检测结果结合临床分析了HBVM与HBV DNA之间的关系。
1 临床资料
1.1 一般资料
观察病例按病毒性肝炎诊断标准选定[1]。慢性乙型肝炎106例，男性65例，女性41例。年龄23～65岁，病程在6个月以上。其中CAH 58例，CPH 48例，病毒感染携带者98例，男性71例，女性27例；年龄21～58岁。
, 百拇医药
1.2 方法
(1)血清HBVM检测采用ELISA法，试剂由上海科华生物技术有限公司提供。
(2)ALT的检测采用酶动力学法，试剂由上海长征医学科学有限公司提供。
(3)PCR HBV DBA的检测：①引物设计：根据国外资料中HBV DNA 全基因序列确定，由中国科学院上海细胞生物学研究所合成，扩增长度为321bp。②检测方法：取10μl待测血清，加10μl血清处理试剂和40μl蒸馏水。置室温10分钟，95～100℃15分钟，1000rpm离心5分钟，上清液备用。取0.5ml塑料离心管，加入20μl基础试剂和2.5μTaq DNA聚合酶及10μl血清处理上清液，充分混匀，加上50μl液体石蜡、封盖。5000rpm离心30秒钟，置94℃4分钟，然后以58℃30秒，72℃1分钟，94℃30秒循环30次，最后一次于58℃置5分钟。扩增完毕后取15μl下层液体加3μl电泳加样缓冲液，混合匀在2%琼脂糖凝胶(含0.5μg/ml EB)上电泳，5V/cm，15分钟，避光在紫外灯下观察，如出现与阳性对照同样大小的荧光区带，则判为HBV DNA 阳性，反之为阴性。
, 百拇医药
2 结果
204例慢性乙型肝炎病毒感染者HBVM与HBV DNA的检测结果见表1。
表1 慢性乙肝病毒感染者HBVM与HBV DNA的检出结果 HBV M
PCR HBV DNA
HBsAg
抗HBs
HBeAg
抗HBe
抗HBc
例数
阳性例数
, http://www.100md.com
%
+
-
+
-
+
95
94
98.9
+
-
-
+
+
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28
17
60.7
+
-
-
-
+
21
9
42.9
-
+
-
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+
+
9
2
11.1
-
+
-
-
+
5
1
20.0
-
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-
-
+
+
25
4
16.0
-
-
-
-
+
15
3
, 百拇医药
20.0
-
-
-
+
-
6
1
16.7
合 计
204
131
64.2
106例慢性乙肝患者中85例DNA为阳性，检出率为80.2%。其中CAH58例，DNA阳性51例，检出率为87.9%；CPH48例，DNA阳性34例，检出率70.8%；病毒携带者98例中48例DNA阳性，检出率45.9%。从慢性乙肝及携带者的单项抗HBe或抗HBs，抗HBc两项阳性的血清中，也可检出DNA阳性，详见表2和表3。表2 慢性乙肝和病毒感染携带者HBVM与HBV DNA的检出结果 HBVM
, 百拇医药
例 数
PCR HBV DNA
HBsAg
抗HBs
HBeAg
抗HBe
抗HBc
慢性乙肝
病毒携带
阳性例数(%)
慢性乙肝
病毒携带
+
, http://www.100md.com
-
+
-
+
67
28
67(100)
27(96.4)
+
-
-
+
+
18
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10
11(60.0)
6(60.0)
+
-
-
-
+
13
8
5(37.5)
4(50.0)
-
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+
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+
+
9
2((22.2)
-
+
-
-
+
5
1(20.0)
-
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-
-
+
+
4
21
1(25.0)
3(14.2)
-
-
-
-
+
4
, http://www.100md.com
11
1(25.0)
2(18.2)
-
-
-
+
-
6
1(16.7)
合 计
106
98
, 百拇医药
85(80.2)
46(46.9)
表3 慢性乙肝患者HBVM与HBV DNA检出结果 HBVM
例 数
PCR HBV DNA
HBsAg
抗HBs
HBeAg
抗HBe
抗HBc
CAH
CPH
, http://www.100md.com
阳性例数(%)
CAH
CPH
+
-
+
-
+
45
22
45(100)
22(100)
+
, http://www.100md.com
-
-
+
+
5
13
3(60.0)
8(53.3)
+
-
-
-
+
8
, http://www.100md.com
5
3(37.5)
2(40.0)
-
-
-
+
+
4
1(25.0)
-
-
-
-
, 百拇医药
+
4
1(25.0)
合 计
58
48
51(87.9)
34(70.8)
3 讨论
本组DNA阳性检出率为64.2%。其中慢性乙肝DNA阳性率为80.2%，病毒感染携带者DNA阳性率为46.9%，两者间有显著差异(P<0.01)。尤其是HBeAg阳性者DNA的阳性率最高。而HBeAg阴性的血清中，DNA也可检出阳性，甚至于有抗HBs的血清，DNA仍可检出为阳性。因此，不能仅将HBeAg的存在与否作为确定病毒复制的指标，而应结合HBV DNA的结果，才有助于临床判定病原学诊断和病变活动状态。
, 百拇医药
58例CAH患者DNA阳性检出率为87.9%，其病毒的复制与肝组织的病变活动有一定的相关性。而48例CPH患者DNA阳性检出率为70.8%，与前者间无明显差异。后者虽然病人病情稳定，但病毒的复制率也很高，说明其复制程度与肝组织损害无直接关联。这就提示我们对CPH患者的治疗仍不能轻视。
尽管病毒感染携带者血清的DNA阳性率低于慢性乙肝病人，但高于国内资料对HBV携带者HBV DNA34%的阳性检出率[2]。这类病毒携带者多年来无肝病症状，并可从事正常工作，或者已经过抗病毒治疗后HBsAg转阴者，而在他们当中仍有部份人存在着复制状态。值得重视的是在抗HBs出现后也有可能DNA为阳性。
因此，我们认为慢性乙肝病毒感染携带者血清标志物与DNA的相关性，需要进一步研究，这对重新评价抗病毒治疗的效果、疫苗接种、筛选献血员的方法和标准等都有着很大意义。 参考文献
1 病毒性肝炎防治方案(试行).中华内科杂志，1995；34(10)：562
2 张永新.多聚酶链反应检测抗HBs阳性血清HBV DNA的意义.中华医学检验杂志，1992；15(1)：40
1999-07-12收稿, 百拇医药
单位：李新建 马金春(湖北省黄石市冶钢集团公司医院传染科，黄石 435000)；汪宏良(湖北省黄石市传染病医院，黄石 435000)
关键词：
咸宁医学院学报990422 本文对204例慢性乙肝患者与病毒感染携带者的乙肝病毒血清标志物(HBVM)，应用聚合酶链反应(PCR)技术检测了HBV DNA。并根据检测结果结合临床分析了HBVM与HBV DNA之间的关系。
1 临床资料
1.1 一般资料
观察病例按病毒性肝炎诊断标准选定[1]。慢性乙型肝炎106例，男性65例，女性41例。年龄23～65岁，病程在6个月以上。其中CAH 58例，CPH 48例，病毒感染携带者98例，男性71例，女性27例；年龄21～58岁。
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1.2 方法
(1)血清HBVM检测采用ELISA法，试剂由上海科华生物技术有限公司提供。
(2)ALT的检测采用酶动力学法，试剂由上海长征医学科学有限公司提供。
(3)PCR HBV DBA的检测：①引物设计：根据国外资料中HBV DNA 全基因序列确定，由中国科学院上海细胞生物学研究所合成，扩增长度为321bp。②检测方法：取10μl待测血清，加10μl血清处理试剂和40μl蒸馏水。置室温10分钟，95～100℃15分钟，1000rpm离心5分钟，上清液备用。取0.5ml塑料离心管，加入20μl基础试剂和2.5μTaq DNA聚合酶及10μl血清处理上清液，充分混匀，加上50μl液体石蜡、封盖。5000rpm离心30秒钟，置94℃4分钟，然后以58℃30秒，72℃1分钟，94℃30秒循环30次，最后一次于58℃置5分钟。扩增完毕后取15μl下层液体加3μl电泳加样缓冲液，混合匀在2%琼脂糖凝胶(含0.5μg/ml EB)上电泳，5V/cm，15分钟，避光在紫外灯下观察，如出现与阳性对照同样大小的荧光区带，则判为HBV DNA 阳性，反之为阴性。
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2 结果
204例慢性乙型肝炎病毒感染者HBVM与HBV DNA的检测结果见表1。
表1 慢性乙肝病毒感染者HBVM与HBV DNA的检出结果 HBV M
PCR HBV DNA
HBsAg
抗HBs
HBeAg
抗HBe
抗HBc
例数
阳性例数
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%
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204
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106例慢性乙肝患者中85例DNA为阳性，检出率为80.2%。其中CAH58例，DNA阳性51例，检出率为87.9%；CPH48例，DNA阳性34例，检出率70.8%；病毒携带者98例中48例DNA阳性，检出率45.9%。从慢性乙肝及携带者的单项抗HBe或抗HBs，抗HBc两项阳性的血清中，也可检出DNA阳性，详见表2和表3。表2 慢性乙肝和病毒感染携带者HBVM与HBV DNA的检出结果 HBVM
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例 数
PCR HBV DNA
HBsAg
抗HBs
HBeAg
抗HBe
抗HBc
慢性乙肝
病毒携带
阳性例数(%)
慢性乙肝
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表3 慢性乙肝患者HBVM与HBV DNA检出结果 HBVM
例 数
PCR HBV DNA
HBsAg
抗HBs
HBeAg
抗HBe
抗HBc
CAH
CPH
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阳性例数(%)
CAH
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合 计
58
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51(87.9)
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3 讨论
本组DNA阳性检出率为64.2%。其中慢性乙肝DNA阳性率为80.2%，病毒感染携带者DNA阳性率为46.9%，两者间有显著差异(P<0.01)。尤其是HBeAg阳性者DNA的阳性率最高。而HBeAg阴性的血清中，DNA也可检出阳性，甚至于有抗HBs的血清，DNA仍可检出为阳性。因此，不能仅将HBeAg的存在与否作为确定病毒复制的指标，而应结合HBV DNA的结果，才有助于临床判定病原学诊断和病变活动状态。
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58例CAH患者DNA阳性检出率为87.9%，其病毒的复制与肝组织的病变活动有一定的相关性。而48例CPH患者DNA阳性检出率为70.8%，与前者间无明显差异。后者虽然病人病情稳定，但病毒的复制率也很高，说明其复制程度与肝组织损害无直接关联。这就提示我们对CPH患者的治疗仍不能轻视。
尽管病毒感染携带者血清的DNA阳性率低于慢性乙肝病人，但高于国内资料对HBV携带者HBV DNA34%的阳性检出率[2]。这类病毒携带者多年来无肝病症状，并可从事正常工作，或者已经过抗病毒治疗后HBsAg转阴者，而在他们当中仍有部份人存在着复制状态。值得重视的是在抗HBs出现后也有可能DNA为阳性。
因此，我们认为慢性乙肝病毒感染携带者血清标志物与DNA的相关性，需要进一步研究，这对重新评价抗病毒治疗的效果、疫苗接种、筛选献血员的方法和标准等都有着很大意义。 参考文献
1 病毒性肝炎防治方案(试行).中华内科杂志，1995；34(10)：562
2 张永新.多聚酶链反应检测抗HBs阳性血清HBV DNA的意义.中华医学检验杂志，1992；15(1)：40
1999-07-12收稿, 百拇医药