骨疏灵对D-半乳糖所致亚急性衰老模型的影响
作者：方朝晖 吴劲松 陈晓雯 陶 文 刘建新 杨 黎
单位：方朝晖 吴劲松 陈晓雯 陶 文(安徽中医学院附属医院 合肥 230031)；刘建新 杨 黎(安徽省宁国市人民医院 宁国 242300)
关键词：
中国中医基础医学杂志990408 以“益气温阳活血”为法组方的骨疏灵胶囊对老年性骨质疏松症具有显著的治疗作用[1、2]。为进一步观察其对动物衰老模型的影响，我们选用目前国内外公认的以D-半乳糖小鼠腹腔注射造成实验动物的亚急性衰老模型进行相关实验研究，以阐明骨疏灵作用的部分机理。
一般材料
1 动物与分组
选用8月龄小白鼠30只(由本院经络研究所动物房提供)，随机均分3组。(1)空白对照组：每日灌服生理盐水0.5ml/100g体重；(2)D-半乳糖模型组：每日腹腔注射50%D-半乳糖溶液一次，剂量为0.25g/100g体重；(3)骨疏灵治疗组：每日腹腔注射等量D-半乳糖，同时以骨疏灵药液灌骨，剂量为0.18g/100g体重，三组小鼠均连续给药30天，并直至全部动物晶状体出现混浊为止。
, 百拇医药
2 试剂
其中D-半乳糖为上海生化试剂厂出品，还原型谷胱甘肽过氧化物酶由中科院上海生化研究所提供，ATP为Sigma公司产品，其他试剂均为国产分析纯。
观察项目及测定方法
1 晶状体的检查与分级
计算实验30天后每组动物晶状体出现完全混浊的只数及出现完全混浊的天数。
2 对体重的影响
实验开始后，每隔10天记录体重一次。
3 对脾脏和胸腺重量的影响
处死动物后，取出脾脏和胸腺，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精确称取重量，以g/100g体重表示。
, 百拇医药
4 耐缺氧和抗疲劳实验
在处死动物前2小时各组给予生理盐水或药物一次，每组各取4只，分别进行实验。
4.1 耐缺氧实验
在室温25℃条件下，将小鼠放入广口玻璃瓶中，并密封瓶口，记录小鼠窒息死亡的时间。
4.2 抗疲劳实验
将小鼠放入深46cm，表面积1500cm2，水温25℃的水池中，实验前称重，按体重的15%让小鼠负重，记录小鼠开始游泳到沉入水底不再向上抗争的时间。
5 血脂、血糖的测定
血糖测定采用邻甲苯胺法测定全血中血糖含量；血脂测定采用高氯酸铁法测定血清中血脂含量，以胆固醇作标准。
, 百拇医药
6 对自由基代谢的影响
分别测定血清过氧化脂质(LPO)含量，红细胞超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及全血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力。
结果
1 对小鼠D-半乳糖性白内障的延缓作用
结果发现，空白对照组无一例出现白内障，晶状体呈透明清亮；D-半乳糖模型组在30天时，有8只小鼠出现了完全浑浊，至35天时，另2只也出现了完全浑浊；骨疏灵组在30天时，有6只小鼠出现完全浑浊，35天时为4只小鼠眼晶状体浑浊，可见SXB显著延缓了小鼠D-半乳糖性白内障的发生。
2 对体重的影响(见表1)
表1 对体重的影响(
±s) 组别
, 百拇医药
n
体重(g)
空白对照组
10
38.16±6.43
D-半乳糖模型组
10
22.20±6.17**
骨疏灵组
10
28.12±6.08Δ
注：与空白对照组比较：*P<0.05；**P<0.01；与D-半乳糖模型组比较：ΔP<0.05；ΔΔP<0.01，下同。
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由表1可知，造模前各组小鼠体重无统计学差异(P>0.05)，造模后，小鼠体重明显减轻，经骨疏灵治疗后，体重明显增加(P<0.01)，但未达到空白对照组的水平(P<0.05)。
3 对脾脏和胸腺重量的影响(见表2)
由表2可知，D-半乳糖模型组脾脏重量减轻，而空白对照组和骨疏灵组无明显变化；D-半乳糖模型组胸腺明显萎缩，重量减轻，而骨疏灵组有促进胸腺恢复和增重作用(P<0.05)，且重量接近空白对照组。
4 对耐缺氧和抗疲劳能力的影响(见表3)
表2 对脾脏和胸腺重量的影响(±s) 组别
n
, 百拇医药
脾重
(g/100g体重)
胸腺重
(g/100g体重)
空白对照组
10
0.61±0.16
0.20±0.030
D-半乳糖模型组
10
0.44±0.18*
0.14±0.034
, 百拇医药
骨疏灵组
10
0.57±0.12Δ
0.18±0.033
由表3可知，骨疏灵与模型组比较，能明显延长小鼠窒息死亡时间，且其作用比空白对照组为优，表明骨疏灵具有明显的耐缺氧能力；骨疏灵组持续游泳时间比模型组及空白对照组均明显增加(P<0.05)，表明骨疏灵具有良好的抗疲劳作用。
表3 对耐缺氧和抗疲劳作用的影响(±s) 组别
n
耐缺氧能力
, 百拇医药
n
抗疲劳作用
持续时间(min)
持续时间(min)
空白对照组
5
18.21±1.84
5
5.12±1.12
D-半乳糖模型组
5
11.73±1.46**
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5
3.84±1.79*
骨疏灵组
5
17.43±2.03ΔΔ
5
4.89±1.38Δ
5 对血糖、血脂的影响(见表4)
表4 对血糖、血脂的影响(±s) 组别
n
, 百拇医药
血糖(mmol/L)
TG(mmol/L)
空白对照组
10
5.44±1.63
4.71±0.88
D-半乳糖模型组
10
7.18±1.81**
8.71±1.73**
骨疏灵组
10
, 百拇医药
5.27±1.94ΔΔ
5.26±1.02ΔΔ
由表4可知，D-半乳糖模型组与空白对照组相比，血糖、血脂明显升高(P<0.05)，骨疏灵与半乳糖模型组相比，可显著降低小鼠的血糖、血脂值(P<0.01)，与空白对照组相比，无显著性差异(P>0.0)。
6 对自由基代谢的影响(见表5)
由表5可知，D-半乳糖模型组与空白对照组相比，血清LPO含量明显升高(P<0.01)，红细胞、SOD、CAT及全血GSH-PX活力均显著降低(P<0.05～0.01)，骨疏灵组与D-半乳糖模型组相比，血清LPO含量明显降低(P<0.05)，红细胞SOD、全血GSH-PX活力明显升高(P<0.01)，红细胞CAT活力增加不明显(P>0.05)，与空白对照组相比，红细胞CAT活力降低(P<0.05)，其余指标均无显著性差异(P>0.05)。
, 百拇医药
表5 对自由基代谢的影响(±s) 组别
n
LPO
(mmol/ml)
SOD
(u/g.Hb)
CAT
(ml/min)
GSH-PX
(u/g.Hb)
空白对照组
, 百拇医药
10
6.01±1.05
219.03±63.24
48.4±4.8
110.47±46.5
D-半乳糖模型组
10
7.81±1.34**
176.10±0.012*
40.6±5.1*
75.13±40.6**
, 百拇医药
骨疏灵组
10
6.58±1.52Δ
202.14±58.16Δ
47.6±6.9Δ
103.4±47.0ΔΔ
讨论
D-半乳糖亚急性衰老模型的建立是根据衰老的代谢学说，即认为新陈代谢是生命的本质，同时也是生命活动的基础。衰老是机体代谢退行性障碍的结果。在三大物质代谢中，碳水化合物是能量转换和贮存的主要来源，糖代谢障碍、紊乱和长期失调，必然导致这些组织细胞的代谢异常，加速衰老进程。近年来，国内外学者分别用家兔、豚鼠、大鼠、小鼠等哺乳动物制造D-半乳糖性代谢紊乱，不仅可导致动物白内障形成，而且使多种组织胞出现类似衰老时的退行性变化，这种衰老的病理模型能较好地反映自然衰老进程的病理特征，并以此用作抗衰老药物的筛选[3、4]。故我们用D-半乳糖来建立哺乳动物亚急性衰老病理模型，并观测对机体的糖、脂代谢，耐缺氧能力、抗疲劳能力及白内障形成的影响。结果发现，D-半乳糖模型小鼠全部出现了眼白内障，耐缺氧能力、抗疲劳能力均明显降低(P<0.05～0.01)，糖、脂代谢紊乱，说明此实验动物模型较好地反映了与自然衰老相似的病理特征。
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骨疏灵可明显增加实验小鼠脾脏和胸腺的重量，提高小鼠耐缺氧能力和抗疲劳能力(P<0.05～0.01)，并可通过降低血糖、调节血脂、增强抗氧化、清除自由基能力(P<0.05～0.01)等途径，增强免疫功能，延缓或改善衰老时的退行性改变，从而达到延缓衰老、提高生存质量的目的。
参考文献
[1] 方朝晖，张国
，陈晓雯，等.骨疏灵对大鼠骨质疏松症模型的实验研究.安徽中医临床杂志 1997；(5)：274
[2] 方朝晖，陶文，殷
，等.骨疏灵治疗老年性骨质疏松症56例.河北中医 1998；(2)：38
[3] 密鹤鸣，等.刺人参抗衰老作用的实验研究.中草药 1987；18(8)：25
[4] 陈依军，等.D-半乳糖实验性白内障与亚急性衰老模型研究.第一届全国抗衰老会议论文集 1983；2：17, http://www.100md.com
单位：方朝晖 吴劲松 陈晓雯 陶 文(安徽中医学院附属医院 合肥 230031)；刘建新 杨 黎(安徽省宁国市人民医院 宁国 242300)
关键词：
中国中医基础医学杂志990408 以“益气温阳活血”为法组方的骨疏灵胶囊对老年性骨质疏松症具有显著的治疗作用[1、2]。为进一步观察其对动物衰老模型的影响，我们选用目前国内外公认的以D-半乳糖小鼠腹腔注射造成实验动物的亚急性衰老模型进行相关实验研究，以阐明骨疏灵作用的部分机理。
一般材料
1 动物与分组
选用8月龄小白鼠30只(由本院经络研究所动物房提供)，随机均分3组。(1)空白对照组：每日灌服生理盐水0.5ml/100g体重；(2)D-半乳糖模型组：每日腹腔注射50%D-半乳糖溶液一次，剂量为0.25g/100g体重；(3)骨疏灵治疗组：每日腹腔注射等量D-半乳糖，同时以骨疏灵药液灌骨，剂量为0.18g/100g体重，三组小鼠均连续给药30天，并直至全部动物晶状体出现混浊为止。
, 百拇医药
2 试剂
其中D-半乳糖为上海生化试剂厂出品，还原型谷胱甘肽过氧化物酶由中科院上海生化研究所提供，ATP为Sigma公司产品，其他试剂均为国产分析纯。
观察项目及测定方法
1 晶状体的检查与分级
计算实验30天后每组动物晶状体出现完全混浊的只数及出现完全混浊的天数。
2 对体重的影响
实验开始后，每隔10天记录体重一次。
3 对脾脏和胸腺重量的影响
处死动物后，取出脾脏和胸腺，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精确称取重量，以g/100g体重表示。
, 百拇医药
4 耐缺氧和抗疲劳实验
在处死动物前2小时各组给予生理盐水或药物一次，每组各取4只，分别进行实验。
4.1 耐缺氧实验
在室温25℃条件下，将小鼠放入广口玻璃瓶中，并密封瓶口，记录小鼠窒息死亡的时间。
4.2 抗疲劳实验
将小鼠放入深46cm，表面积1500cm2，水温25℃的水池中，实验前称重，按体重的15%让小鼠负重，记录小鼠开始游泳到沉入水底不再向上抗争的时间。
5 血脂、血糖的测定
血糖测定采用邻甲苯胺法测定全血中血糖含量；血脂测定采用高氯酸铁法测定血清中血脂含量，以胆固醇作标准。
, 百拇医药
6 对自由基代谢的影响
分别测定血清过氧化脂质(LPO)含量，红细胞超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及全血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力。
结果
1 对小鼠D-半乳糖性白内障的延缓作用
结果发现，空白对照组无一例出现白内障，晶状体呈透明清亮；D-半乳糖模型组在30天时，有8只小鼠出现了完全浑浊，至35天时，另2只也出现了完全浑浊；骨疏灵组在30天时，有6只小鼠出现完全浑浊，35天时为4只小鼠眼晶状体浑浊，可见SXB显著延缓了小鼠D-半乳糖性白内障的发生。
2 对体重的影响(见表1)
表1 对体重的影响(
±s) 组别, 百拇医药
n
体重(g)
空白对照组
10
38.16±6.43
D-半乳糖模型组
10
22.20±6.17**
骨疏灵组
10
28.12±6.08Δ
注：与空白对照组比较：*P<0.05；**P<0.01；与D-半乳糖模型组比较：ΔP<0.05；ΔΔP<0.01，下同。
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由表1可知，造模前各组小鼠体重无统计学差异(P>0.05)，造模后，小鼠体重明显减轻，经骨疏灵治疗后，体重明显增加(P<0.01)，但未达到空白对照组的水平(P<0.05)。
3 对脾脏和胸腺重量的影响(见表2)
由表2可知，D-半乳糖模型组脾脏重量减轻，而空白对照组和骨疏灵组无明显变化；D-半乳糖模型组胸腺明显萎缩，重量减轻，而骨疏灵组有促进胸腺恢复和增重作用(P<0.05)，且重量接近空白对照组。
4 对耐缺氧和抗疲劳能力的影响(见表3)
表2 对脾脏和胸腺重量的影响(
±s) 组别n
, 百拇医药
脾重
(g/100g体重)
胸腺重
(g/100g体重)
空白对照组
10
0.61±0.16
0.20±0.030
D-半乳糖模型组
10
0.44±0.18*
0.14±0.034
, 百拇医药
骨疏灵组
10
0.57±0.12Δ
0.18±0.033
由表3可知，骨疏灵与模型组比较，能明显延长小鼠窒息死亡时间，且其作用比空白对照组为优，表明骨疏灵具有明显的耐缺氧能力；骨疏灵组持续游泳时间比模型组及空白对照组均明显增加(P<0.05)，表明骨疏灵具有良好的抗疲劳作用。
表3 对耐缺氧和抗疲劳作用的影响(
±s) 组别n
耐缺氧能力
, 百拇医药
n
抗疲劳作用
持续时间(min)
持续时间(min)
空白对照组
5
18.21±1.84
5
5.12±1.12
D-半乳糖模型组
5
11.73±1.46**
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5
3.84±1.79*
骨疏灵组
5
17.43±2.03ΔΔ
5
4.89±1.38Δ
5 对血糖、血脂的影响(见表4)
表4 对血糖、血脂的影响(
±s) 组别n
, 百拇医药
血糖(mmol/L)
TG(mmol/L)
空白对照组
10
5.44±1.63
4.71±0.88
D-半乳糖模型组
10
7.18±1.81**
8.71±1.73**
骨疏灵组
10
, 百拇医药
5.27±1.94ΔΔ
5.26±1.02ΔΔ
由表4可知，D-半乳糖模型组与空白对照组相比，血糖、血脂明显升高(P<0.05)，骨疏灵与半乳糖模型组相比，可显著降低小鼠的血糖、血脂值(P<0.01)，与空白对照组相比，无显著性差异(P>0.0)。
6 对自由基代谢的影响(见表5)
由表5可知，D-半乳糖模型组与空白对照组相比，血清LPO含量明显升高(P<0.01)，红细胞、SOD、CAT及全血GSH-PX活力均显著降低(P<0.05～0.01)，骨疏灵组与D-半乳糖模型组相比，血清LPO含量明显降低(P<0.05)，红细胞SOD、全血GSH-PX活力明显升高(P<0.01)，红细胞CAT活力增加不明显(P>0.05)，与空白对照组相比，红细胞CAT活力降低(P<0.05)，其余指标均无显著性差异(P>0.05)。
, 百拇医药
表5 对自由基代谢的影响(
±s) 组别n
LPO
(mmol/ml)
SOD
(u/g.Hb)
CAT
(ml/min)
GSH-PX
(u/g.Hb)
空白对照组
, 百拇医药
10
6.01±1.05
219.03±63.24
48.4±4.8
110.47±46.5
D-半乳糖模型组
10
7.81±1.34**
176.10±0.012*
40.6±5.1*
75.13±40.6**
, 百拇医药
骨疏灵组
10
6.58±1.52Δ
202.14±58.16Δ
47.6±6.9Δ
103.4±47.0ΔΔ
讨论
D-半乳糖亚急性衰老模型的建立是根据衰老的代谢学说，即认为新陈代谢是生命的本质，同时也是生命活动的基础。衰老是机体代谢退行性障碍的结果。在三大物质代谢中，碳水化合物是能量转换和贮存的主要来源，糖代谢障碍、紊乱和长期失调，必然导致这些组织细胞的代谢异常，加速衰老进程。近年来，国内外学者分别用家兔、豚鼠、大鼠、小鼠等哺乳动物制造D-半乳糖性代谢紊乱，不仅可导致动物白内障形成，而且使多种组织胞出现类似衰老时的退行性变化，这种衰老的病理模型能较好地反映自然衰老进程的病理特征，并以此用作抗衰老药物的筛选[3、4]。故我们用D-半乳糖来建立哺乳动物亚急性衰老病理模型，并观测对机体的糖、脂代谢，耐缺氧能力、抗疲劳能力及白内障形成的影响。结果发现，D-半乳糖模型小鼠全部出现了眼白内障，耐缺氧能力、抗疲劳能力均明显降低(P<0.05～0.01)，糖、脂代谢紊乱，说明此实验动物模型较好地反映了与自然衰老相似的病理特征。
, http://www.100md.com
骨疏灵可明显增加实验小鼠脾脏和胸腺的重量，提高小鼠耐缺氧能力和抗疲劳能力(P<0.05～0.01)，并可通过降低血糖、调节血脂、增强抗氧化、清除自由基能力(P<0.05～0.01)等途径，增强免疫功能，延缓或改善衰老时的退行性改变，从而达到延缓衰老、提高生存质量的目的。
参考文献
[1] 方朝晖，张国
，陈晓雯，等.骨疏灵对大鼠骨质疏松症模型的实验研究.安徽中医临床杂志 1997；(5)：274[2] 方朝晖，陶文，殷
，等.骨疏灵治疗老年性骨质疏松症56例.河北中医 1998；(2)：38[3] 密鹤鸣，等.刺人参抗衰老作用的实验研究.中草药 1987；18(8)：25
[4] 陈依军，等.D-半乳糖实验性白内障与亚急性衰老模型研究.第一届全国抗衰老会议论文集 1983；2：17, http://www.100md.com