云芝多糖对冠心病患者血清OxLDL和NO含量的影响
作者：黄敏珍 郭志刚 崔玉民 陈 瑗 周 玫
单位：黄敏珍 陈 瑗 周 玫 第一军医大学1分子生物学研究所自由基医学研究室；郭志刚 南方医院心血管内科；崔玉民 南方医院输血科，广州，510515
关键词：氧化修饰低密度脂蛋白；一氧化氮；云芝多糖；冠心病
第一军医大学学报990517 摘要：为探讨云芝多糖对动脉粥样硬化(AS)的治疗作用，我们用氧化修饰低密度脂蛋白(OxLDL)单克隆抗体检测和硝酸还原酶法观察了冠心病患者血清OxLDL和NO含量的变化以及云芝多糖对这些变化的影响，结果显示：(1)冠心病组血清OxLDL含量显著高于正常对照组(P<0.01)，NO含量显著低于正常对照组(P<0.01)；(2)口服云芝多糖30 d后冠心病患者血清OxLDL含量明显下降(P<0.01)而NO含量显著升高(P<0.01)。提示云芝多糖对冠心病具有一定的治疗作用。
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中图分类号：R969.1
The effect of protein bound polysaccharide (PSK) on the contents of serum OxLDL and NO in patients with coronary heart disease
Huang Minzhen1, Guo Zhigang2, Cui Yumin3, Chen Yuan1, Zhou Mei1
1Research Laboratory of Free Radical Medicine, 2Department of Cardiology and 3 Blood Transfusion , Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou, 510515
, 百拇医药
Abstract: To explore the regression effect of protein bound polysaccharide (PSK) on atherosclerosis, using monoclone antibody against oxidatively modefied low density lipoprotein (OxLDL) and nitrate reductase, the contents of OxLDL and NO in serum of patients with coronary heart disease and the effect of PSK on the contents were investigated. The results were: (1) compared with healthy subjects, the content of OxLDL was increased significantly (P<0.01) and that of NO was lowered markedly in serum of patients with coronary heart disease, (2) the content of OxLDL was decreased significantly (P<0.01) and that of NO was markedly higher (P<0.01) in serum of patients with coronary heart disease after administration of PSK for 30 days.
, 百拇医药
Key words: OxLDL; NO; protein bound polysaccharide; coronary heart disease
自从1973年在动脉粥样硬化(AS)斑块内检测到脂质过氧化物(lipoperoxide，LPO)增多，关于AS发病的脂质过氧化学说开始受到重视和不断得到实验证明。氧化修饰低密度脂蛋白(oxidatively modified low density lipoprotein，OxLDL) 作为血清脂质过氧化物(LPO) 的主要载体，有关其致AS作用的研究不断增多，近年来的研究[1]表明，OxLDL与AS的发生发展密切相关[1]。
泡沫细胞形成是AS发生过程中早期的病理变化之一。泡沫细胞是AS脂肪条纹和斑块中主要的细胞成份。我们先前的研究说明OxLDL致的巨噬细胞脂质过氧化损伤是泡沫细胞形成的主要原因；云芝多糖(PSK)体内注射能增强巨噬细胞抗氧化酶活性，减轻OxLDL引起的巨噬细胞泡沫样变[2]，以及能预防实验性AS家兔的斑块形成[3]。同时发现PSK能增加巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达以及减轻OxLDL对巨噬细胞iNOS抑制。为了进一步说明PSK对AS患者的防治作用，我们观察了PSK对冠心病(CHD)患者血清OxLDL，NO和血脂含量的影响。
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 对象和分组 研究分2批进行：(1) 冠心病患者血清OxLDL，NO和血脂含量的变化。冠心病组为WHO诊断标准确诊的冠心病患者，共33名，其中男性21名，女性12名，年龄范围54~77岁，平均年龄(64.8 ± 9.6)岁；对照组为排除冠心病及其它与血脂异常有关的疾病的健康体检者，共35名，其中男性22名, 女性13名，年龄范围53~75岁，平均年龄(65.7 ± 11.3)岁，年龄性别及生活背景与冠心病组相匹配。清晨空腹采取静脉血制备血清备用；(2) PSK对冠心病患者血清OxLDL，NO和血脂含量变化的影响。确诊冠心病患者22名，其中男性20名，女性2名，年龄范围65~81岁，平均年龄(71.3± 4.1)岁。观察服用PSK前后各指标的变化。PSK为我室提取的云芝子实体提取物。每天每人500 mg，分二次服用，共30 d。第一次用药前1天和最后一次用药后1天，分别制备清晨空腹血清备用。
1.2 血清OxLDL测定 用我室制备的抗人OxLDL单克隆抗体(McAb)HOL5和抗人丙二醛修饰LDL(MDA-LDL)McAb，HML[4]，以HML包被酶联反应板的双单抗夹心ELISA检测法。
, 百拇医药
1.3 血清NO含量测定 按Bones PN等的硝酸还原酶法(Bories PN and Bories C 1995)。
1.4 血脂测定 血清总胆固醇(TC)，低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)，高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)，极低密度脂蛋白胆固醇(VLDLC)以及甘油三脂(TG)均按1995年中华医学检验学会推荐的方法测定。
1.5 统计方法 用样本均数比较的t检验。
2 结果
2.1 冠心病患者血脂含量的变化 血脂测定结果(表1)说明，冠心病组血清TC和TG显著高于正常对照组(P<0.01)，HDL-C显著低于正常对照组(P<0.05)；与对照组相比，冠心病组LDLC只有轻微增加，但不显著(P<0.05)。
表1 冠心病患者血脂含量的变化
, 百拇医药
Tab.1 Changes of serum lipid of patients with CHD (Mean± SD ，mol/L)
Group
n
TC
HDLC
LDLC
TG
Control
35
4.62 ± 0.71
1.05 ± 0.25
, http://www.100md.com
3.32 ± 0.73
1.44 ± 0.73
CHD
33
5.20 ± 1.08**
0.91 ± 0.24*
3.39 ± 0.91
2.14 ± 1.05**
* P<0.05, ** P<0.01 vs the control group
2.2冠心病患者血清OxLDL和NO含量的变化 由表2 可见，与正常对照组相比，CHD组患者OxLDL含量明显增加(P<0.01)，NO含量明显降低(P<0.01)。
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表2 冠心病患者血清OxLDL和NO含量的变化
Tab.2 Changes in levels of OxLDL and NO in serum of patients with CHD (Mean ± SD)
Group
n
OxLDL(g/L)
NO(umol/L)
Control
35
0.62 ± 0.31
38.78 ± 7.8
, 百拇医药
CHD
32
0.76 ± 0.05**
29.92± 9.31**
** P<0.01 vs the control group
2.3 PSK对冠心病患者血脂含量的影响 给药前后血清血脂含量都无明显的变化(表3)。
表3 PSK对冠心病患者血脂含量的影响
Tab.3 Effects of PSK on levels of serum lipid of patients with CHD (Mean± SD, mol/L, n = 22)
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Tretmemt
TC
HDLC
LDLC
VDLC
TG
Pre-administration
5.17 ± 2.13
1.29 ± 0.88
3.51 ± 2.43
0.71± 0.28
1.64± 0.97
, 百拇医药
Post-administration
5.20 ± 3.05
1.39 ± 0.72
3.53 ± 1.98
0.77 ± 0.29
1.47± 0.79
2.4 PSK对冠心病患者OxLDL和NO含量的影响 与服药前相比，服用PSK一个月后血清OxLDL含量明显降低(P<0.01)，NO含量明显增加(P<0.01)(表4)。
表4 PSK对冠心病患者血清OxLDL和NO含量的影响
Tab.4 Effects of PSK on levels of OxLDL and NO in serum of patients with CHD (Mean± SD, n = 22)
, 百拇医药
Tretment
OxLDL(g/L)
NO(umol/L)
Pre-administration
0.77 ± 0.34
28.28 ± 7.32
Post-administration
0.67± 0.25**
31.52 ± 7.93**
** P<0.01 vs pre-administration
, 百拇医药
3 讨论
与健康者相比，冠心病患者血脂TC和TG含量明显增加，HDLC含量明显降低，而LDLC含量稍有增加，但无统计学意义(表1)，血清OxLDL含量明显增加，NO含量明显降低(表2)，所得结果与文献资料相一致[5，6]。
PSK对冠心病患者血脂各成份含量无明显影响(表3).我们先前对实验性AS家兔治疗研究中观察到在给PSK后2个月(疗程为3个月)，TC含量开始明显较对照为低(P<0.05)(待发表资料).本研究TC含量在给药前后无显著改变可能与给药时间较短(仅1个月)有关。PSK能使冠心病患者血清OxLDL含量明显降低(表4)；这与我们动物实验的结果相类似，AS家兔在服用PSK一个月后血清OxLDL含量即开始明显降低(P<0.05)。同时，还观察到三个月治疗后主动脉平均斑块面积百分数较对照组降低46.5%，OxLDL含量与斑块面积百分数呈正相关(相关系数0.751，P<0.01)，说明OxLDL含量反映主动脉损伤程度以及PSK对家兔主动脉已形成的斑块有明显的缓解作用[7]。因此在本研究中OxLDL含量减低，预示着PSK对CHD的治疗作用。
, 百拇医药
Stemberg D[1] 提出，胆固醇含量低者的患者可发生心肌梗塞，胆固醇含量高的遗传性高胆固醇血症患者能活到70多岁而无明显临床CHD症状；相同程度的高胆固醇血症患者可以有不同的临床过程，相反的，LDL浓度不同的患者的病变程度(心导管术检查)可以相同，认为这些矛盾在一定程度上都可以LDL的氧化速率或以OxLDL含量来解释。本研究揭示，PSK能使CHD患者NO含量增加(P<0.01)(表4)。我们先前的工作说明PSK能减轻OxLDL对巨噬细胞iNOS基因表达抑制[8]；PSK能诱导巨噬细胞iNOS基因表达，抑制巨噬细胞对LDL氧化。因为NO能与脂氢过氧化物的均裂产物-脂氧基和脂过氧基-反应，生成相应的加成物而终止脂质过氧化链式反应[9]。这可能是PSK减轻冠心病患者血清OxLDL含量的机制之一。
注：国家自然科学基金资助项目
作者简介：黄敏珍，女，1966年出生；1999年毕业于第一军医大学；硕士；电话85141908
, 百拇医药
参考文献
1 Stemberg D. Oxidative modification of LDL and atherogenesis. Circulation, 1997,5(4):1062
2 Chen Y, Zhou M, Liu ShX et al. PSK prevents macrophage from lipoperoxide accumulation and foam cell formation by OxLDL. Atherosclerosis ,1996,124(2):171
3 Chen Y, Zhou M, Lou N et al .The polysaccharide krestin prevents plaque formation in experimentally atherosclerotic rabbits. Med Sci Res, 1997,25(5):297
, 百拇医药
4 Zhou M, Chen Y，Yan DG et al. Preparation and characterization of two monoclonal antibodies against oxidatively modified low density lipoprotein(OxLDL) and detection of OxLDL in serum in patients with coronary heart desease. Med Sci Res ,1997,25(7):445
5 Holvoet P, Pcrez G, Zhao Z et al. Malondialdehyde modified low density lipoprotein on patients with atherosclertic disease. J Clin Invest, 1995, 95(16): 2611
6 郭志刚，沈剑刚，翁昌鸿等. 冠心病高血压病人血清丙二醛，一氧化氮，组织型纤溶酶原激活剂及其抑制物的变化. 中国循环杂志,1996, 11(7): 435
, 百拇医药
7 欧阳谦，周 玫，陈 瑗等. 云芝多糖对实验性动脉粥样硬化家兔血浆氧化型低密度脂蛋白含量的影响. 中国动脉硬化杂志,1996, 4(3): 172
8 Liu ShX, Chen Y, Zhou M et al. Protective effect of PSK on the inhibition of lipopolysaccharide-induced nitric oxide production in macropheges caused by oxidized low density lipoprotein. Med Sci Res, 1997,25(8):507
9 Rubbo h, Radi R, Tryjillo M et al. Nitric oxide regulation of superoxide and peroxynitrite-dependent lipid peroxidation, formation of noval nitrogen containing oxidized lipid derivatives. J Biol Chem, 1994, 249:26066
(收稿日期：1998-11-28), 百拇医药
单位：黄敏珍 陈 瑗 周 玫 第一军医大学1分子生物学研究所自由基医学研究室；郭志刚 南方医院心血管内科；崔玉民 南方医院输血科，广州，510515
关键词：氧化修饰低密度脂蛋白；一氧化氮；云芝多糖；冠心病
第一军医大学学报990517 摘要：为探讨云芝多糖对动脉粥样硬化(AS)的治疗作用，我们用氧化修饰低密度脂蛋白(OxLDL)单克隆抗体检测和硝酸还原酶法观察了冠心病患者血清OxLDL和NO含量的变化以及云芝多糖对这些变化的影响，结果显示：(1)冠心病组血清OxLDL含量显著高于正常对照组(P<0.01)，NO含量显著低于正常对照组(P<0.01)；(2)口服云芝多糖30 d后冠心病患者血清OxLDL含量明显下降(P<0.01)而NO含量显著升高(P<0.01)。提示云芝多糖对冠心病具有一定的治疗作用。
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中图分类号：R969.1
The effect of protein bound polysaccharide (PSK) on the contents of serum OxLDL and NO in patients with coronary heart disease
Huang Minzhen1, Guo Zhigang2, Cui Yumin3, Chen Yuan1, Zhou Mei1
1Research Laboratory of Free Radical Medicine, 2Department of Cardiology and 3 Blood Transfusion , Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou, 510515
, 百拇医药
Abstract: To explore the regression effect of protein bound polysaccharide (PSK) on atherosclerosis, using monoclone antibody against oxidatively modefied low density lipoprotein (OxLDL) and nitrate reductase, the contents of OxLDL and NO in serum of patients with coronary heart disease and the effect of PSK on the contents were investigated. The results were: (1) compared with healthy subjects, the content of OxLDL was increased significantly (P<0.01) and that of NO was lowered markedly in serum of patients with coronary heart disease, (2) the content of OxLDL was decreased significantly (P<0.01) and that of NO was markedly higher (P<0.01) in serum of patients with coronary heart disease after administration of PSK for 30 days.
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Key words: OxLDL; NO; protein bound polysaccharide; coronary heart disease
自从1973年在动脉粥样硬化(AS)斑块内检测到脂质过氧化物(lipoperoxide，LPO)增多，关于AS发病的脂质过氧化学说开始受到重视和不断得到实验证明。氧化修饰低密度脂蛋白(oxidatively modified low density lipoprotein，OxLDL) 作为血清脂质过氧化物(LPO) 的主要载体，有关其致AS作用的研究不断增多，近年来的研究[1]表明，OxLDL与AS的发生发展密切相关[1]。
泡沫细胞形成是AS发生过程中早期的病理变化之一。泡沫细胞是AS脂肪条纹和斑块中主要的细胞成份。我们先前的研究说明OxLDL致的巨噬细胞脂质过氧化损伤是泡沫细胞形成的主要原因；云芝多糖(PSK)体内注射能增强巨噬细胞抗氧化酶活性，减轻OxLDL引起的巨噬细胞泡沫样变[2]，以及能预防实验性AS家兔的斑块形成[3]。同时发现PSK能增加巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达以及减轻OxLDL对巨噬细胞iNOS抑制。为了进一步说明PSK对AS患者的防治作用，我们观察了PSK对冠心病(CHD)患者血清OxLDL，NO和血脂含量的影响。
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1 对象和方法
1.1 对象和分组 研究分2批进行：(1) 冠心病患者血清OxLDL，NO和血脂含量的变化。冠心病组为WHO诊断标准确诊的冠心病患者，共33名，其中男性21名，女性12名，年龄范围54~77岁，平均年龄(64.8 ± 9.6)岁；对照组为排除冠心病及其它与血脂异常有关的疾病的健康体检者，共35名，其中男性22名, 女性13名，年龄范围53~75岁，平均年龄(65.7 ± 11.3)岁，年龄性别及生活背景与冠心病组相匹配。清晨空腹采取静脉血制备血清备用；(2) PSK对冠心病患者血清OxLDL，NO和血脂含量变化的影响。确诊冠心病患者22名，其中男性20名，女性2名，年龄范围65~81岁，平均年龄(71.3± 4.1)岁。观察服用PSK前后各指标的变化。PSK为我室提取的云芝子实体提取物。每天每人500 mg，分二次服用，共30 d。第一次用药前1天和最后一次用药后1天，分别制备清晨空腹血清备用。
1.2 血清OxLDL测定 用我室制备的抗人OxLDL单克隆抗体(McAb)HOL5和抗人丙二醛修饰LDL(MDA-LDL)McAb，HML[4]，以HML包被酶联反应板的双单抗夹心ELISA检测法。
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1.3 血清NO含量测定 按Bones PN等的硝酸还原酶法(Bories PN and Bories C 1995)。
1.4 血脂测定 血清总胆固醇(TC)，低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)，高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)，极低密度脂蛋白胆固醇(VLDLC)以及甘油三脂(TG)均按1995年中华医学检验学会推荐的方法测定。
1.5 统计方法 用样本均数比较的t检验。
2 结果
2.1 冠心病患者血脂含量的变化 血脂测定结果(表1)说明，冠心病组血清TC和TG显著高于正常对照组(P<0.01)，HDL-C显著低于正常对照组(P<0.05)；与对照组相比，冠心病组LDLC只有轻微增加，但不显著(P<0.05)。
表1 冠心病患者血脂含量的变化
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Tab.1 Changes of serum lipid of patients with CHD (Mean± SD ，mol/L)
Group
n
TC
HDLC
LDLC
TG
Control
35
4.62 ± 0.71
1.05 ± 0.25
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3.32 ± 0.73
1.44 ± 0.73
CHD
33
5.20 ± 1.08**
0.91 ± 0.24*
3.39 ± 0.91
2.14 ± 1.05**
* P<0.05, ** P<0.01 vs the control group
2.2冠心病患者血清OxLDL和NO含量的变化 由表2 可见，与正常对照组相比，CHD组患者OxLDL含量明显增加(P<0.01)，NO含量明显降低(P<0.01)。
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表2 冠心病患者血清OxLDL和NO含量的变化
Tab.2 Changes in levels of OxLDL and NO in serum of patients with CHD (Mean ± SD)
Group
n
OxLDL(g/L)
NO(umol/L)
Control
35
0.62 ± 0.31
38.78 ± 7.8
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CHD
32
0.76 ± 0.05**
29.92± 9.31**
** P<0.01 vs the control group
2.3 PSK对冠心病患者血脂含量的影响 给药前后血清血脂含量都无明显的变化(表3)。
表3 PSK对冠心病患者血脂含量的影响
Tab.3 Effects of PSK on levels of serum lipid of patients with CHD (Mean± SD, mol/L, n = 22)
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Tretmemt
TC
HDLC
LDLC
VDLC
TG
Pre-administration
5.17 ± 2.13
1.29 ± 0.88
3.51 ± 2.43
0.71± 0.28
1.64± 0.97
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Post-administration
5.20 ± 3.05
1.39 ± 0.72
3.53 ± 1.98
0.77 ± 0.29
1.47± 0.79
2.4 PSK对冠心病患者OxLDL和NO含量的影响 与服药前相比，服用PSK一个月后血清OxLDL含量明显降低(P<0.01)，NO含量明显增加(P<0.01)(表4)。
表4 PSK对冠心病患者血清OxLDL和NO含量的影响
Tab.4 Effects of PSK on levels of OxLDL and NO in serum of patients with CHD (Mean± SD, n = 22)
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Tretment
OxLDL(g/L)
NO(umol/L)
Pre-administration
0.77 ± 0.34
28.28 ± 7.32
Post-administration
0.67± 0.25**
31.52 ± 7.93**
** P<0.01 vs pre-administration
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3 讨论
与健康者相比，冠心病患者血脂TC和TG含量明显增加，HDLC含量明显降低，而LDLC含量稍有增加，但无统计学意义(表1)，血清OxLDL含量明显增加，NO含量明显降低(表2)，所得结果与文献资料相一致[5，6]。
PSK对冠心病患者血脂各成份含量无明显影响(表3).我们先前对实验性AS家兔治疗研究中观察到在给PSK后2个月(疗程为3个月)，TC含量开始明显较对照为低(P<0.05)(待发表资料).本研究TC含量在给药前后无显著改变可能与给药时间较短(仅1个月)有关。PSK能使冠心病患者血清OxLDL含量明显降低(表4)；这与我们动物实验的结果相类似，AS家兔在服用PSK一个月后血清OxLDL含量即开始明显降低(P<0.05)。同时，还观察到三个月治疗后主动脉平均斑块面积百分数较对照组降低46.5%，OxLDL含量与斑块面积百分数呈正相关(相关系数0.751，P<0.01)，说明OxLDL含量反映主动脉损伤程度以及PSK对家兔主动脉已形成的斑块有明显的缓解作用[7]。因此在本研究中OxLDL含量减低，预示着PSK对CHD的治疗作用。
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Stemberg D[1] 提出，胆固醇含量低者的患者可发生心肌梗塞，胆固醇含量高的遗传性高胆固醇血症患者能活到70多岁而无明显临床CHD症状；相同程度的高胆固醇血症患者可以有不同的临床过程，相反的，LDL浓度不同的患者的病变程度(心导管术检查)可以相同，认为这些矛盾在一定程度上都可以LDL的氧化速率或以OxLDL含量来解释。本研究揭示，PSK能使CHD患者NO含量增加(P<0.01)(表4)。我们先前的工作说明PSK能减轻OxLDL对巨噬细胞iNOS基因表达抑制[8]；PSK能诱导巨噬细胞iNOS基因表达，抑制巨噬细胞对LDL氧化。因为NO能与脂氢过氧化物的均裂产物-脂氧基和脂过氧基-反应，生成相应的加成物而终止脂质过氧化链式反应[9]。这可能是PSK减轻冠心病患者血清OxLDL含量的机制之一。
注：国家自然科学基金资助项目
作者简介：黄敏珍，女，1966年出生；1999年毕业于第一军医大学；硕士；电话85141908
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参考文献
1 Stemberg D. Oxidative modification of LDL and atherogenesis. Circulation, 1997,5(4):1062
2 Chen Y, Zhou M, Liu ShX et al. PSK prevents macrophage from lipoperoxide accumulation and foam cell formation by OxLDL. Atherosclerosis ,1996,124(2):171
3 Chen Y, Zhou M, Lou N et al .The polysaccharide krestin prevents plaque formation in experimentally atherosclerotic rabbits. Med Sci Res, 1997,25(5):297
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4 Zhou M, Chen Y，Yan DG et al. Preparation and characterization of two monoclonal antibodies against oxidatively modified low density lipoprotein(OxLDL) and detection of OxLDL in serum in patients with coronary heart desease. Med Sci Res ,1997,25(7):445
5 Holvoet P, Pcrez G, Zhao Z et al. Malondialdehyde modified low density lipoprotein on patients with atherosclertic disease. J Clin Invest, 1995, 95(16): 2611
6 郭志刚，沈剑刚，翁昌鸿等. 冠心病高血压病人血清丙二醛，一氧化氮，组织型纤溶酶原激活剂及其抑制物的变化. 中国循环杂志,1996, 11(7): 435
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7 欧阳谦，周 玫，陈 瑗等. 云芝多糖对实验性动脉粥样硬化家兔血浆氧化型低密度脂蛋白含量的影响. 中国动脉硬化杂志,1996, 4(3): 172
8 Liu ShX, Chen Y, Zhou M et al. Protective effect of PSK on the inhibition of lipopolysaccharide-induced nitric oxide production in macropheges caused by oxidized low density lipoprotein. Med Sci Res, 1997,25(8):507
9 Rubbo h, Radi R, Tryjillo M et al. Nitric oxide regulation of superoxide and peroxynitrite-dependent lipid peroxidation, formation of noval nitrogen containing oxidized lipid derivatives. J Biol Chem, 1994, 249:26066
(收稿日期：1998-11-28), 百拇医药