对慢性淋巴细胞白血病的早期干细胞移植: 可治愈的机会?
作者：祁明芳(译) 郁知非(校)
单位：广州暨南大学医学院第一附属医院
关键词：
德国医学000104Early stem cell transplantation for chronic lymphocytic leukaemia:a chance for cure?
P.Dreger, N.von Neuhoff, R.Kuse, R.Sonnen, B.Giass, L.Uharek, R.Schoch, H.Löffler, N.Schmltz
(Second Department of Medicine, University of Kiel, Kiel, Germany)
, http://www.100md.com
慢性B细胞淋巴细胞白血病(CLL)用常规化疗不能治愈。虽然其常呈慢性过程，但对那些白细胞计数高、骨髓广泛浸润、淋巴细胞倍增时短和晚期患者，生存时间明显缩短。故很有必要寻找出能使其长期缓解或根治的治疗措施。初步研究结果提示，去髓性放疗和化疗后自体骨髓移植(ABMT)有可能将其治愈。但因自体骨髓中常有大量的白血病细胞污染，需体外净化，以减少复发的可能性；加上CLL患者常为老年人，去髓性放疗和化疗后骨髓移植，特别是净化处理后的自体骨髓移植患者，骨髓抑制时间延长，移植相关并发症和危险性相对增加，使得移植难度特别大。外周血干细胞(PBSCs)与骨髓相比，特别是行体外净化处理的情况下，可显著缩短移植后骨髓抑制时间，故其应更适合CLL患者。
CLL在ABMT后易复发，对移植前肿瘤负荷大的患者，更是如此。提示与其它血液肿瘤一样，为获得良好疗效，就必须在自体移植前，使患者肿瘤细胞尽量清除干净。因此，对CLL患者，建议早期应用大剂量化疗和移植前细胞减量(cytoreductive)化疗，尽量降低白血病负荷。
, 百拇医药
对移植后早期临床缓解的CLL患者，用临床标准或血液学方法还不能对疾病是否已根治进行评估，意味着还需用免疫或分子标记的敏感技术监测其微小残留病变(MRD)的情况。对CLL患者，可用IgH 基因作为其特异性的分子标记。因在B细胞成熟过程中, IgH3个不同的胚系基因片段V、D、J发生特异性重排。在此过程中产生的CDR Ⅲ基因片段，对每个B细胞克隆来说，都是独一无二的。应用与CDR Ⅲ基因上VJ区的保守序列特异结合的通用引物，可用PCR的方法将其扩增。用此种技术，可从102～104细胞中，检测出1个克隆性B系白血病细胞。
因此，对CLL患者，应采用PBSCT而非BMT，应早期或缓解后即行移植，且在移植后需采用更敏感的检测MRD的方法。基于以上考虑，我们设计了包括用Dexa-BEAM方案(地塞米松、氯化亚硝脲、足叶乙甙、阿糖胞苷、马法兰)行干细胞动员和诱导治疗、大剂量放化疗后干细胞回输及移植后CDR Ⅲ PCR 分子水平监测的序贯治疗方案。初步研究结果表明，此方案不但安全可行，而且可使CLL患者获得长期临床和分子水平缓解。
, 百拇医药
病例和方法
病例资料 1993年3月～1996年5月共18例CLL患者，其中男5例，女13例，中位年龄为49岁(29～61岁)，所有患者都符合Kiel 或REAL CLL诊断标准。Binet分期如下：研究开始时，A期6例，B期9例，C期3例；病程中最大分期为A期3例，B期11例，C期4例。16例患者都存在预后不佳的因素(骨髓广泛浸润或淋巴细胞计数>50×109/l)。
疗效判断和治疗方案 完全缓解(CR)：体格检查、胸腹和盆腔CT扫描病灶消失，骨髓活检正常，外周血淋巴细胞计数<1×109/l；部分缓解(PR)：病灶减少超过50%，至少8周无新的病灶出现，骨髓浸润减少，小于骨小粱间隙的20%。达到MRD的标准为：CR或PR时外周血B淋巴细胞计数<1×109/l和肿块直径<2cm 。疗效未达PR者为难治性CLL。
在明确分期后，对进入本研究的患者首先行Dexa-BEAM一个疗程，疗程结束后采集PBSC。进入本研究时未达CR患者，再用Dexa-BEAM治疗1个疗程(对第一次疗程前肿瘤负荷大者，在此次化疗后才采集PBSC)，然后再行临床分期，如果达到了MRD，则进入大剂量治疗。自体干细胞移植(ASCT)后第3、第6和第12个月行骨髓活检、骨髓及外周血PCR检查，之后，以上检查每隔12个月重复一次。
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化疗方案的实施和祖细胞采集 Dexa-BEAM方案包括：地塞米松 8mg，3次/天，第1～10天，氯化亚硝脲60mg/m2 第2天，足叶乙甙75～250mg/m2第4～7天，阿糖胞苷100mg/m2 1次/12h第4～7天，马法兰20mg/m2第3天。在疗程开始后的第8天至PBSC采集的最后1天，每天皮下注射G-CSF(filgrastin) 5～10μg/kg 。每天一次，连续采集PBSC，中位采集次数为2(1～4次)。在MaxSep分选系统上，用CD19、CD20、CD23和CD37单抗免疫磁法去除B细胞和在Isolex 300系统上用CD34+细胞免疫磁正选法，对富含PBSC的机分产物和骨髓进行净化。
大剂量化疗和祖细胞回输 预处理方案为：分次全身放疗(TBI)：总剂量为2Gy×6次 ，第1～3天，环磷酰胺 60mg/kg 第4～5天。所有患者移植后每天都用G-CSF(filgrastin) 5～10μg/kg。中性粒细胞的恢复：首次出现连续3天WBC计数>0.5×109/l；血小板恢复：在未输血小板的情况下，首日血小板计数>20×109/l。
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免疫表型分析 用流式细胞术分析免疫表型。
PCR 用两步法半巢式PCR检测IgH CDR Ⅲ重排。FR3IgH 区域引物为FR3A：5'-ACACGGC(C/T)(G/C)GTATTACTGT-3', JH外侧区引物为LJH：5'-TGAGGAGACGGTGACC-3'，JH内侧区引物为VLJH：5'-GTGACCAGGGTNCCTTGGCCCCAG-3'。每次实验时，包括阴性和阳性对照。扩增产物在非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳和银染显带。用连续稀释法发现，此CPR方法约能在103～104正常细胞中，检测出1个肿瘤细胞的存在。
结 果
Dexa-BEAM的疗效 在1～2个疗程化疗后, 88%(16/18)例获得了CR或非常好的PR(相当于MRD)，其中2例在化疗前已是MRD。1例难治，1例只在肿瘤大小上达到PR。所有18例外周血B淋巴细胞都降至 1×109/l和骨髓浸润减少到20%骨小粱间隙以下。对化疗前未达MRD的14例患者，总有效率为93%。
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干细胞动员 大多数患者PBSC动员效果良好。中位采集次数为2(1～4次)，所采集到的中位CD34+细胞总数为11×106/kg(0.2～54.1)。单次机分产物中CD34+细胞百分率为3.2 %(0.1%～19.4%)。有2例所采集到的CD34+细胞数未达到2×106/kg。在所有PBSC采集产物中，都存在CD19+CD5+B细胞(中位数2.4×106/kg, 0.2～707)，且均检测到克隆性CDR Ⅲ重排。用免疫磁法对11例PBSC采集物进行了体外净化处理。其中9例净化后，用FACS已检测不到肿瘤细胞的存在，但仅有3例PCR结果阴性；4例因CD34+细胞太低或B细胞过高而不适合作净化处理；开始3例因以上体外净化技术还未建立，故未能对PBSC采集物作净化处理，对这3例患者，采用了去B细胞的ABMT，并将所采集到的PBSC冻存备用。
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大剂量治疗和造血重建 共有13例成功采集到了足量的干细胞和大剂量治疗前获得MRD的患者接受了自体干细胞移植(ASCT)。3例接受净化处理过的骨髓的患者植活延迟(移植后20～31天中性粒细胞>0.5×109/l, 46～165天血小板>20×109/l)，而接受PBSC移植的患者，植活迅速和持久，移植10天(9～13天)后中性粒细胞>0.5×109/l，11d(9～214d)后血小板>20×109/l，移植后3个月血小板计数为149×109/l(16～265×109/l)。在接受PBSC和BMT的患者中，各有1例其所回输的CD34+细胞数<1×106/kg, 出现了红系和巨核系植活延迟，输注红细胞和血小板时间超过半年。
预后和分子水平随访 随访中位时间为19月(12～48个月)，13例自体移植的患者都还存活。在对其CDR Ⅲ重排行PCR分子水平前瞻行随访检测中发现，除1例外，其余患者移植后3个月内存在克隆性CDR Ⅲ重排。在以后随访中，患者外周血和骨髓表现为多克隆CDR Ⅲ重排。但有2例患者，在移植后25个月和45个月再次出现克隆性改变。前者在移植后37个月，在外周血流式细胞术检测到了CLL样的免疫表型(CD19+CD5+)的克隆性细胞，认为此患者已临床复发。按照严格的临床标准，其余患者都还无病生存。
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5例患者因对Dexa-BEAM治疗不敏感，或因干细胞动员失败，或移植物中肿瘤细胞污染明显而未能行自体移植。其中1例接受异基因骨髓移植患者，在移植后13个月死于卡氏肺包虫病，但此患者死时仍处于分子水平缓解。1例患者在Dexa-BEAM治疗26个月死于白血病恶化。其它3例患者虽然在常规治疗下病情恶化，但目前都存活。
讨 论
尽管ASCT已广泛用于恶性肿瘤的治疗，但有关它治疗CLL的报道还不多。出现上述情形的可能原因有：CLL患者年龄常偏大，全身肿瘤负荷常较重，骨髓和外周血存在大量白血病细胞，加上CLL自然病程较为缓慢，对ASCT的疗效难以评估。因此，CLL患者大剂量治疗方案必须满足以下要求：①该方案应该安全和耐受性好；②应有能有效降低全身肿瘤负荷和对净化自体移植物的措施；③必须有检测移植后MRD和监测复发的敏感方法。在本研究中，不但用PBSC作为最主要移植物和在疾病早期即行移植，移植前强化疗使患者病变尽量缩小，而且采用免疫磁法净化PBSC和移植后在分子水平前瞻性监测和随访，已基本上满足了以上条件。
, 百拇医药
本研究结果表明，即使用净化处理过的PBSC，也能显著缩短细胞缺乏时间，输血、感染等相关并发症应将减少。本研究的所有患者都持久植活，无移植相关死亡出现。最近随访，已有10例患者重新回到了工作岗位，表明移植相关长期并发症是较轻微的。加上我们对50例低度恶性淋巴瘤大剂量序贯治疗而未出现方案相关死亡病例。因此，Dexa-BEAM化疗后接着行APBSCT的病死率应该与常规治疗类似。
我们认为Dexa-BEAM是治疗CLL的有效安全方案。在我们的研究中，即使对白血病细胞负荷重的CLL患者，此方案也能使其患者外周血B淋巴细胞降至1×109/l和骨髓浸润也减少至20%骨小粱间隙以下，使大多数患者获得了MRD。此方案的另一优点是，干细胞动员效果极佳。另外，因大多数采集的PBSC样本中，B细胞明显降低，表明此方案对白血病细胞有净化作用。因此，对已获MRD的患者，当考虑行自体移植时，也选用它作为干细胞动员的方案。
未净化处理的自体移植物中，常有大量白血病表型的异常细胞存在，它们很可能是复发之源。因此，CLL患者自体移植时，行体外净化处理是必要的。与骨髓相比，PBSC经免疫方法净化后，其植活能力未受影响或仅轻微降低。在本研究过程中，因技术不成熟，未对前3例患者行净化处理，以后的15例患者中，有11例成功地进行了干细胞负选和正选体外净化，其中9例用FACS方法已检测不到白血病细胞的存在。
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按照临床标准，在13例移植患者中，至今仅有1例复发。虽然随访时间还短，但我们采用CDRⅢ基因通用引物PCR和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术在分子水平对移植后白血病细胞的根除状况进行评估。在移植后的数月，大多数患者表现出单克隆性，但在较长随访过程中消失。以上情况可能用存在无克隆形成能力的白血病细胞或移植后寡克隆性B细胞的重建得以解释。只有1例患者在移植后14个月，PCR检测未阴转，但患者仍处于临床缓解。在较长的随访中，其他患者都表现为多克隆性的特点。有2例患者，在移植后25个月和45个月检测到弱的克隆性信号，用肿瘤特异性探针斑点印迹法证实其来自白血病细胞，前者在12个月后复发。另有1例一直处于多克隆状态的患者，用肿瘤特异性探针仍可检测出白血病细胞DNA，提示有些患者的白血病细胞对本研究所用方案耐受。以上现象促使我们采用另外的标准来选择那些处于增殖状态和对治疗敏感的肿瘤细胞的高危CLL患者进入本序贯性大剂量治疗方案。新的标准中包括血清胸腺嘧啶和β2微球蛋白升高或细胞遗传学异常等预后不良的因素。
总之，早期 Dexa-BEAM和自体干细胞移植序贯治疗不失为一种高效治疗CLL患者的方法。但是，现有资料只是初步的，还需对更多患者进行更长时间的研究随访，以证实此方法确实可改善CLL患者的预后。, 百拇医药
单位：广州暨南大学医学院第一附属医院
关键词：
德国医学000104Early stem cell transplantation for chronic lymphocytic leukaemia:a chance for cure?
P.Dreger, N.von Neuhoff, R.Kuse, R.Sonnen, B.Giass, L.Uharek, R.Schoch, H.Löffler, N.Schmltz
(Second Department of Medicine, University of Kiel, Kiel, Germany)
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慢性B细胞淋巴细胞白血病(CLL)用常规化疗不能治愈。虽然其常呈慢性过程，但对那些白细胞计数高、骨髓广泛浸润、淋巴细胞倍增时短和晚期患者，生存时间明显缩短。故很有必要寻找出能使其长期缓解或根治的治疗措施。初步研究结果提示，去髓性放疗和化疗后自体骨髓移植(ABMT)有可能将其治愈。但因自体骨髓中常有大量的白血病细胞污染，需体外净化，以减少复发的可能性；加上CLL患者常为老年人，去髓性放疗和化疗后骨髓移植，特别是净化处理后的自体骨髓移植患者，骨髓抑制时间延长，移植相关并发症和危险性相对增加，使得移植难度特别大。外周血干细胞(PBSCs)与骨髓相比，特别是行体外净化处理的情况下，可显著缩短移植后骨髓抑制时间，故其应更适合CLL患者。
CLL在ABMT后易复发，对移植前肿瘤负荷大的患者，更是如此。提示与其它血液肿瘤一样，为获得良好疗效，就必须在自体移植前，使患者肿瘤细胞尽量清除干净。因此，对CLL患者，建议早期应用大剂量化疗和移植前细胞减量(cytoreductive)化疗，尽量降低白血病负荷。
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对移植后早期临床缓解的CLL患者，用临床标准或血液学方法还不能对疾病是否已根治进行评估，意味着还需用免疫或分子标记的敏感技术监测其微小残留病变(MRD)的情况。对CLL患者，可用IgH 基因作为其特异性的分子标记。因在B细胞成熟过程中, IgH3个不同的胚系基因片段V、D、J发生特异性重排。在此过程中产生的CDR Ⅲ基因片段，对每个B细胞克隆来说，都是独一无二的。应用与CDR Ⅲ基因上VJ区的保守序列特异结合的通用引物，可用PCR的方法将其扩增。用此种技术，可从102～104细胞中，检测出1个克隆性B系白血病细胞。
因此，对CLL患者，应采用PBSCT而非BMT，应早期或缓解后即行移植，且在移植后需采用更敏感的检测MRD的方法。基于以上考虑，我们设计了包括用Dexa-BEAM方案(地塞米松、氯化亚硝脲、足叶乙甙、阿糖胞苷、马法兰)行干细胞动员和诱导治疗、大剂量放化疗后干细胞回输及移植后CDR Ⅲ PCR 分子水平监测的序贯治疗方案。初步研究结果表明，此方案不但安全可行，而且可使CLL患者获得长期临床和分子水平缓解。
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病例和方法
病例资料 1993年3月～1996年5月共18例CLL患者，其中男5例，女13例，中位年龄为49岁(29～61岁)，所有患者都符合Kiel 或REAL CLL诊断标准。Binet分期如下：研究开始时，A期6例，B期9例，C期3例；病程中最大分期为A期3例，B期11例，C期4例。16例患者都存在预后不佳的因素(骨髓广泛浸润或淋巴细胞计数>50×109/l)。
疗效判断和治疗方案 完全缓解(CR)：体格检查、胸腹和盆腔CT扫描病灶消失，骨髓活检正常，外周血淋巴细胞计数<1×109/l；部分缓解(PR)：病灶减少超过50%，至少8周无新的病灶出现，骨髓浸润减少，小于骨小粱间隙的20%。达到MRD的标准为：CR或PR时外周血B淋巴细胞计数<1×109/l和肿块直径<2cm 。疗效未达PR者为难治性CLL。
在明确分期后，对进入本研究的患者首先行Dexa-BEAM一个疗程，疗程结束后采集PBSC。进入本研究时未达CR患者，再用Dexa-BEAM治疗1个疗程(对第一次疗程前肿瘤负荷大者，在此次化疗后才采集PBSC)，然后再行临床分期，如果达到了MRD，则进入大剂量治疗。自体干细胞移植(ASCT)后第3、第6和第12个月行骨髓活检、骨髓及外周血PCR检查，之后，以上检查每隔12个月重复一次。
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化疗方案的实施和祖细胞采集 Dexa-BEAM方案包括：地塞米松 8mg，3次/天，第1～10天，氯化亚硝脲60mg/m2 第2天，足叶乙甙75～250mg/m2第4～7天，阿糖胞苷100mg/m2 1次/12h第4～7天，马法兰20mg/m2第3天。在疗程开始后的第8天至PBSC采集的最后1天，每天皮下注射G-CSF(filgrastin) 5～10μg/kg 。每天一次，连续采集PBSC，中位采集次数为2(1～4次)。在MaxSep分选系统上，用CD19、CD20、CD23和CD37单抗免疫磁法去除B细胞和在Isolex 300系统上用CD34+细胞免疫磁正选法，对富含PBSC的机分产物和骨髓进行净化。
大剂量化疗和祖细胞回输 预处理方案为：分次全身放疗(TBI)：总剂量为2Gy×6次 ，第1～3天，环磷酰胺 60mg/kg 第4～5天。所有患者移植后每天都用G-CSF(filgrastin) 5～10μg/kg。中性粒细胞的恢复：首次出现连续3天WBC计数>0.5×109/l；血小板恢复：在未输血小板的情况下，首日血小板计数>20×109/l。
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免疫表型分析 用流式细胞术分析免疫表型。
PCR 用两步法半巢式PCR检测IgH CDR Ⅲ重排。FR3IgH 区域引物为FR3A：5'-ACACGGC(C/T)(G/C)GTATTACTGT-3', JH外侧区引物为LJH：5'-TGAGGAGACGGTGACC-3'，JH内侧区引物为VLJH：5'-GTGACCAGGGTNCCTTGGCCCCAG-3'。每次实验时，包括阴性和阳性对照。扩增产物在非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳和银染显带。用连续稀释法发现，此CPR方法约能在103～104正常细胞中，检测出1个肿瘤细胞的存在。
结 果
Dexa-BEAM的疗效 在1～2个疗程化疗后, 88%(16/18)例获得了CR或非常好的PR(相当于MRD)，其中2例在化疗前已是MRD。1例难治，1例只在肿瘤大小上达到PR。所有18例外周血B淋巴细胞都降至 1×109/l和骨髓浸润减少到20%骨小粱间隙以下。对化疗前未达MRD的14例患者，总有效率为93%。
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干细胞动员 大多数患者PBSC动员效果良好。中位采集次数为2(1～4次)，所采集到的中位CD34+细胞总数为11×106/kg(0.2～54.1)。单次机分产物中CD34+细胞百分率为3.2 %(0.1%～19.4%)。有2例所采集到的CD34+细胞数未达到2×106/kg。在所有PBSC采集产物中，都存在CD19+CD5+B细胞(中位数2.4×106/kg, 0.2～707)，且均检测到克隆性CDR Ⅲ重排。用免疫磁法对11例PBSC采集物进行了体外净化处理。其中9例净化后，用FACS已检测不到肿瘤细胞的存在，但仅有3例PCR结果阴性；4例因CD34+细胞太低或B细胞过高而不适合作净化处理；开始3例因以上体外净化技术还未建立，故未能对PBSC采集物作净化处理，对这3例患者，采用了去B细胞的ABMT，并将所采集到的PBSC冻存备用。
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大剂量治疗和造血重建 共有13例成功采集到了足量的干细胞和大剂量治疗前获得MRD的患者接受了自体干细胞移植(ASCT)。3例接受净化处理过的骨髓的患者植活延迟(移植后20～31天中性粒细胞>0.5×109/l, 46～165天血小板>20×109/l)，而接受PBSC移植的患者，植活迅速和持久，移植10天(9～13天)后中性粒细胞>0.5×109/l，11d(9～214d)后血小板>20×109/l，移植后3个月血小板计数为149×109/l(16～265×109/l)。在接受PBSC和BMT的患者中，各有1例其所回输的CD34+细胞数<1×106/kg, 出现了红系和巨核系植活延迟，输注红细胞和血小板时间超过半年。
预后和分子水平随访 随访中位时间为19月(12～48个月)，13例自体移植的患者都还存活。在对其CDR Ⅲ重排行PCR分子水平前瞻行随访检测中发现，除1例外，其余患者移植后3个月内存在克隆性CDR Ⅲ重排。在以后随访中，患者外周血和骨髓表现为多克隆CDR Ⅲ重排。但有2例患者，在移植后25个月和45个月再次出现克隆性改变。前者在移植后37个月，在外周血流式细胞术检测到了CLL样的免疫表型(CD19+CD5+)的克隆性细胞，认为此患者已临床复发。按照严格的临床标准，其余患者都还无病生存。
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5例患者因对Dexa-BEAM治疗不敏感，或因干细胞动员失败，或移植物中肿瘤细胞污染明显而未能行自体移植。其中1例接受异基因骨髓移植患者，在移植后13个月死于卡氏肺包虫病，但此患者死时仍处于分子水平缓解。1例患者在Dexa-BEAM治疗26个月死于白血病恶化。其它3例患者虽然在常规治疗下病情恶化，但目前都存活。
讨 论
尽管ASCT已广泛用于恶性肿瘤的治疗，但有关它治疗CLL的报道还不多。出现上述情形的可能原因有：CLL患者年龄常偏大，全身肿瘤负荷常较重，骨髓和外周血存在大量白血病细胞，加上CLL自然病程较为缓慢，对ASCT的疗效难以评估。因此，CLL患者大剂量治疗方案必须满足以下要求：①该方案应该安全和耐受性好；②应有能有效降低全身肿瘤负荷和对净化自体移植物的措施；③必须有检测移植后MRD和监测复发的敏感方法。在本研究中，不但用PBSC作为最主要移植物和在疾病早期即行移植，移植前强化疗使患者病变尽量缩小，而且采用免疫磁法净化PBSC和移植后在分子水平前瞻性监测和随访，已基本上满足了以上条件。
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本研究结果表明，即使用净化处理过的PBSC，也能显著缩短细胞缺乏时间，输血、感染等相关并发症应将减少。本研究的所有患者都持久植活，无移植相关死亡出现。最近随访，已有10例患者重新回到了工作岗位，表明移植相关长期并发症是较轻微的。加上我们对50例低度恶性淋巴瘤大剂量序贯治疗而未出现方案相关死亡病例。因此，Dexa-BEAM化疗后接着行APBSCT的病死率应该与常规治疗类似。
我们认为Dexa-BEAM是治疗CLL的有效安全方案。在我们的研究中，即使对白血病细胞负荷重的CLL患者，此方案也能使其患者外周血B淋巴细胞降至1×109/l和骨髓浸润也减少至20%骨小粱间隙以下，使大多数患者获得了MRD。此方案的另一优点是，干细胞动员效果极佳。另外，因大多数采集的PBSC样本中，B细胞明显降低，表明此方案对白血病细胞有净化作用。因此，对已获MRD的患者，当考虑行自体移植时，也选用它作为干细胞动员的方案。
未净化处理的自体移植物中，常有大量白血病表型的异常细胞存在，它们很可能是复发之源。因此，CLL患者自体移植时，行体外净化处理是必要的。与骨髓相比，PBSC经免疫方法净化后，其植活能力未受影响或仅轻微降低。在本研究过程中，因技术不成熟，未对前3例患者行净化处理，以后的15例患者中，有11例成功地进行了干细胞负选和正选体外净化，其中9例用FACS方法已检测不到白血病细胞的存在。
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按照临床标准，在13例移植患者中，至今仅有1例复发。虽然随访时间还短，但我们采用CDRⅢ基因通用引物PCR和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术在分子水平对移植后白血病细胞的根除状况进行评估。在移植后的数月，大多数患者表现出单克隆性，但在较长随访过程中消失。以上情况可能用存在无克隆形成能力的白血病细胞或移植后寡克隆性B细胞的重建得以解释。只有1例患者在移植后14个月，PCR检测未阴转，但患者仍处于临床缓解。在较长的随访中，其他患者都表现为多克隆性的特点。有2例患者，在移植后25个月和45个月检测到弱的克隆性信号，用肿瘤特异性探针斑点印迹法证实其来自白血病细胞，前者在12个月后复发。另有1例一直处于多克隆状态的患者，用肿瘤特异性探针仍可检测出白血病细胞DNA，提示有些患者的白血病细胞对本研究所用方案耐受。以上现象促使我们采用另外的标准来选择那些处于增殖状态和对治疗敏感的肿瘤细胞的高危CLL患者进入本序贯性大剂量治疗方案。新的标准中包括血清胸腺嘧啶和β2微球蛋白升高或细胞遗传学异常等预后不良的因素。
总之，早期 Dexa-BEAM和自体干细胞移植序贯治疗不失为一种高效治疗CLL患者的方法。但是，现有资料只是初步的，还需对更多患者进行更长时间的研究随访，以证实此方法确实可改善CLL患者的预后。, 百拇医药