胃肠道平滑肌肿瘤Ki-67的检测及其临床病理意义
作者：孙威 王宇令 王强 王明德 秦晔 张凤祥 于文泉
单位：秦晔(辽宁中医学院普外科)；张凤祥(西丰县第一人民医院外科)；于文泉(北票矿务局医院普外科)；孙威(中国医科大学第二临床学院外科，沈阳 110003)；王宇令(中国医科大学第二临床学院外科，沈阳 110003)；王强(中国医科大学第二临床学院外科，沈阳 110003)
关键词：胃肠肿瘤；平滑肌瘤；平滑肌肉瘤；人抗增殖细胞核抗原Ki-67
中国医科大学学报000124 摘要 目的：探讨人抗增殖细胞核抗原Ki-67表达与胃肠道平滑肌肿瘤(gastrointestinal smooth muscle tumors, GISMT)良恶性、恶性程度、转移及预后的关系。方法：采用微波修复抗原及免疫组织化学S-P法检测86例GISMT中Ki-67的表达情况。结果：Ki-67表达按平滑肌瘤，平滑肌肉瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的顺序依次明显上升(P<0.01)。Ki-67的表达与肿瘤的良恶性生长方式、大小、中心有无坏死亦有明显的关系(P<0.01)。Ki-67低表达组的5年生存率(87.5%)明显高于高表达组(32.3%)(P<0.05)。结论：Ki-67是反映GISMT生物学特性的良好标志物，可以作为判断GISMT良恶性、恶性程度、转移及预后的客观指标。
, http://www.100md.com
Determination and Clinicopathological Significance of Ki-67 in
Gastrointestinal Smooth Muscle Tumors
Sun Wei Wang Yuling Wang Qiang et al
(Department of Surgery, The Second Clinical College, China Medical University, Shenyang, 110003)
ABSTRACT Objective: We want to determine the relationship between Ki-67 expression and prognosis of gastrointestinal smooth muscle tumors (GISMT). Methods: Eighty-six patients with GISMT were studied by microwave antigen retrieval in Formalin-fixed tissues and by the immunohistochemical staining S-P method for Ki-67. Results: The expression of Ki-67 increased significantly according to the following order: normal smooth muscle tissues of the gastrointestinal tract, leiomyomas, grade I leiomyosarcomas, grade Ⅱ leiomyosarcomas, grade Ⅲ leiomyosarcomas (P<0.01). Meantime, the expression of Ki-67 was associated with the tumors with or without contiguous organ invasion or distant metastasis, the size of tumors, the tumors with or without central necrosis (P<0.01). The five-year survival rate was significantly higher in patients with low-expression of Ki-67 (87.5%) than those with high-expression of Ki-67 (32.3%) (P<0.05).Conclusion: Ki-67 was the valuable indicator of biological characteristics of GISMT, and could be used as an objective parameter in distinguishing malignant and benign tumors, in judging the malignant degree and predicting the prognosis of the patients with GISMT.
, 百拇医药
KEY WORDS gastrointestinal neoplasms; leiomyomas; leiomyosarcoma; Ki-67
胃肠道平滑肌肿瘤(gastrointestinal smooth muscle tumors, GISMT)较少见，临床变异较大，病理形态复杂多样，加之其间质内血管丰富，转移潜能较大，因此，给临床诊断、预后判断造成很大困难。本研究应用免疫组织化学S-P法检测GISMT中Ki-67表达，结合临床病理及预后进行综合分析，探讨其在鉴别GISMT良恶性、恶性程度及判断预后方面的意义。
1 材料与方法
1.1 临床病理资料
本研究选择我院1977年～1996年4月间手术切除的GISMT病例中诊断明确、病历完整者86例，男49例，女37例，年龄1～77岁。肿瘤发生于食管11例，胃30例，小肠27例，结直肠18例。根据镜下观察，选择细胞生长活跃区连续计数30个高倍视野(HPF)，确定每10个HPF中平均核分裂数。按Evans[2]和He LJ等[3]的标准区分平滑肌瘤(leiomyoma, LM)、平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma, LS)。LS组织学分级参考Patrick等[4]的标准。其中LM 25例；LSⅠ级(LSⅠ) 26例，Ⅱ级(LS Ⅱ)20例，Ⅲ级(LSⅢ)15例。根据大体病理特征分为：恶性生长方式组(肿瘤有周围浸润、种植或转移) 40 例；良性生长方式组(肿瘤无周围浸润、种植或转移) 46 例。肿瘤直径为0.3～5.9 cm组 38 例；6～10 cm组 25 例；>10 cm组 23 例。肿瘤中心有坏死组 41 例；无坏死组 45 例。另取 8 例正常胃肠道平滑肌组织(NSMT)作为对照。本组 86 例GISMT中，除3例因其它原因死亡外，其余 83 例随访资料完整，随访时间为 12～242 个月，平均 58 个月。
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所有标本均经 10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，常规连续切片，分别做HE染色，Ki-67微波修复抗原与免疫组织化学染色。
1.2 试剂
鼠抗人Ki-67(MIB-1)单抗工作浓度为1∶100，S-P试剂盒工作浓度为1∶150，均购自福州迈新生物制品公司。
1.3 实验方法
1.3.1 微波修复抗原方法：
(1)组织经脱蜡后用 3% H2O2或 0.5% 的过碘酸处理50 min。(2)蒸馏水冲洗3 min×2次。(3)将预先涂有聚L赖氨酸的组织切片经上述处理后完全浸泡于盛有0.01 mol/L柠檬酸缓冲液 pH＝6的玻璃载玻片缸中，盖上盖子(不要盖密)，放于微波炉内于解冻或“defrost”档加热 7～10 min，(加热过程中若遇缸中水量减少，可加蒸馏水至原先量即可)。(4)取出玻璃载玻片冷却至室温。(5)PBS溶液(pH＝7.2)冲洗3 min×3次。
, 百拇医药
1.3.2 免疫组织化学染色S-P法。
1.3.3 结果判定：以细胞核呈棕红色或细胞核，细胞浆同时呈棕红色为阳性；单纯细胞浆着色而细胞核无着色，或细胞核，细胞浆均无着色为阴性，于40倍光镜下10个视野计数，每个视野计数100个细胞，Ki-67标记值为：(阳性细胞总和/1000)×100%，同已知阳性片对照。
1.4 数据处理
t检验。患者生存率分析采用Kaplan-Meier寿命法及Log-rank检验。
2 结果
随着GISMT良恶性改变及恶性程度的增高，Ki-67标记值依次明显递增(P<0.01)。另外，Ki-67与肿瘤良恶性生长方式、肿瘤大小、肿瘤中心有无坏死，亦有明显关系(P<0.01)见表1。
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表1 Ki-67与GISMT临床病理特征的关系(
±s)
Table 1 The relationship of the expression of Ki-67 with
the clinical and pathologic features of GISMT 临床病理
n
Ki-67值
P
分类分级
NSMT
8
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0.15±0.05
LM
25
1.34±0.22
LS-Ⅰ
26
3.49±0.40
LS-Ⅱ
20
6.73±2.32
LS-Ⅲ
15
10.18±2.07
, 百拇医药
P<0.01
生长方式
良性
46
2.32±1.12
恶性
40
7.69±2.90
P<0.01
直径(cm)
0.3～5.9
38
2.05±1.28
, 百拇医药
6.0～10
25
4.89±2.47
>10
23
9.01±2.55
P<0.01
坏死
无
45
2.69±1.56
有
41
, 百拇医药
7.16±3.41
P<0.01
Ki-67低表达组(<均数5.25) 5 年生存率为 87.25%，高表达组(≥均数5.25)5年生存率为32.30%。两组间存在显著差异(P<0.05)。
3 讨论
Ki-67是由Gerdes等[4]于1983年首次制备成功，它存在于增殖细胞当中，在静止细胞则不表达。Ki-67的免疫染色揭示细胞核的反应性存在于卵泡细胞皮质的胚胎中心、胸腺细胞的皮质、胃肠道粘膜的上皮细胞、未分化的精原细胞及很多的人类细胞株。Ki-67抗体不与处于静止期的细胞发生反应，如淋巴细胞、单核细胞、胃肠道粘膜的壁细胞等。Ki-67能直接与反映肿瘤增殖的核抗原发生反应，从而用于肿瘤组织活检。
随着研究的深入，Gerdes等[5]提出：Ki-67是针对处于增殖周期的人类细胞核抗原的抗体，能标记G1后期、S期、G2期和M期细胞核，G1早期和G0期细胞核不被标记。Gerdes[6]于1985年进一步提出将Ki-67应用于外科手术中的快速病理诊断，提示Ki-67具有判断预后和有助于治疗方案的选择，为 Ki-67 广泛应用尤其是快速病理诊断提供了理论基础。微波修复抗原方法的出现[7]，使 Ki-67 的应用范围明显扩大。
, 百拇医药
本文结果表明：从LM到LSⅠ、Ⅱ、Ⅲ级，其Ki-67表达逐渐升高，说明肿瘤的分化程度越低，增殖活性越强，恶性程度越高，基本反映了肿瘤细胞增殖和分化程度的一般规律。目前认为GISMT的体积大小、周围是否有侵袭、中心有无坏死均是临床病理判断GISMT良恶性的重要依据。本研究提示：肿瘤体积大、中心有坏死、生长方式有临近器官的浸润或腹腔种植和远处转移时，Ki-67计数均明显提高。本研究结果也提示：Ki-67高表达组与低表达组的5年生存率之间存在显著性差异，但它是否能成为一个GISMT的独立预后指标，还有待进一步扩大样本，长时间的大量随访及与其它因素的对比统计分析才能确定。因此可以认为Ki-67是判断GISMT恶生程度、肿瘤分类分级及预后较好的一种指标。
辽宁省自然科学基金资助项目，972254
作者单位:王明德(中国医科大学第二临床学院外科，沈阳 110003)
秦晔(中国医科大学第二临床学院外科，沈阳 110003)
, 百拇医药
张凤祥(中国医科大学第二临床学院外科，沈阳 110003)
于文泉(中国医科大学第二临床学院外科，沈阳 110003)
参考文献
1，Evans HL. Smooth muscle tumors of the gastrointestinal tract: a study of 56 cases followed for a minimum of 10 years. Cancer, 1985, 56(9): 2242-2250
2，He LJ, Wang BS, Chen CC. Smooth muscle tumors of the digestive tract: report of 160 cases. Br J Surg, 1988, 75(2): 184-186
, 百拇医药
3，Patrick CM, James PN, Walter L, et al. Gastrointestinal Sarcomas: analysis of prognostic factors. Ann Surg, 1987, 2060(6):706-710
4，Gerdes J, Schwab U, Lemke H, et al. Production of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen associate with cell proliferation.Int J Cancer, 1983, 31(1): 13-20
5，Gerdes J, Lemke H, Baisch H, et al. Cell cycle analysis of a cell proliferation-associated human nuclear antigen defined by the monoclonal antibody Ki-67. J Immunol, 1984,133(4): 1710-1715
, http://www.100md.com
6，Gerdes J. An immunohistological method for estimating cell growth fractions in rapid histopathological diagnosis during surgery. Int J Cancer, 1985, 35(2): 169-171
7，Shi SR, Key ME, Kalra KL. Antigen retrieval in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues: an enhancement method for immunohistochemical staining based no microwave oven heating of tissue sections. J Histoche Cytoche, 1991, 39(6): 741-748
收稿1998-12-11, 百拇医药
单位：秦晔(辽宁中医学院普外科)；张凤祥(西丰县第一人民医院外科)；于文泉(北票矿务局医院普外科)；孙威(中国医科大学第二临床学院外科，沈阳 110003)；王宇令(中国医科大学第二临床学院外科，沈阳 110003)；王强(中国医科大学第二临床学院外科，沈阳 110003)
关键词：胃肠肿瘤；平滑肌瘤；平滑肌肉瘤；人抗增殖细胞核抗原Ki-67
中国医科大学学报000124 摘要 目的：探讨人抗增殖细胞核抗原Ki-67表达与胃肠道平滑肌肿瘤(gastrointestinal smooth muscle tumors, GISMT)良恶性、恶性程度、转移及预后的关系。方法：采用微波修复抗原及免疫组织化学S-P法检测86例GISMT中Ki-67的表达情况。结果：Ki-67表达按平滑肌瘤，平滑肌肉瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的顺序依次明显上升(P<0.01)。Ki-67的表达与肿瘤的良恶性生长方式、大小、中心有无坏死亦有明显的关系(P<0.01)。Ki-67低表达组的5年生存率(87.5%)明显高于高表达组(32.3%)(P<0.05)。结论：Ki-67是反映GISMT生物学特性的良好标志物，可以作为判断GISMT良恶性、恶性程度、转移及预后的客观指标。
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Determination and Clinicopathological Significance of Ki-67 in
Gastrointestinal Smooth Muscle Tumors
Sun Wei Wang Yuling Wang Qiang et al
(Department of Surgery, The Second Clinical College, China Medical University, Shenyang, 110003)
ABSTRACT Objective: We want to determine the relationship between Ki-67 expression and prognosis of gastrointestinal smooth muscle tumors (GISMT). Methods: Eighty-six patients with GISMT were studied by microwave antigen retrieval in Formalin-fixed tissues and by the immunohistochemical staining S-P method for Ki-67. Results: The expression of Ki-67 increased significantly according to the following order: normal smooth muscle tissues of the gastrointestinal tract, leiomyomas, grade I leiomyosarcomas, grade Ⅱ leiomyosarcomas, grade Ⅲ leiomyosarcomas (P<0.01). Meantime, the expression of Ki-67 was associated with the tumors with or without contiguous organ invasion or distant metastasis, the size of tumors, the tumors with or without central necrosis (P<0.01). The five-year survival rate was significantly higher in patients with low-expression of Ki-67 (87.5%) than those with high-expression of Ki-67 (32.3%) (P<0.05).Conclusion: Ki-67 was the valuable indicator of biological characteristics of GISMT, and could be used as an objective parameter in distinguishing malignant and benign tumors, in judging the malignant degree and predicting the prognosis of the patients with GISMT.
, 百拇医药
KEY WORDS gastrointestinal neoplasms; leiomyomas; leiomyosarcoma; Ki-67
胃肠道平滑肌肿瘤(gastrointestinal smooth muscle tumors, GISMT)较少见，临床变异较大，病理形态复杂多样，加之其间质内血管丰富，转移潜能较大，因此，给临床诊断、预后判断造成很大困难。本研究应用免疫组织化学S-P法检测GISMT中Ki-67表达，结合临床病理及预后进行综合分析，探讨其在鉴别GISMT良恶性、恶性程度及判断预后方面的意义。
1 材料与方法
1.1 临床病理资料
本研究选择我院1977年～1996年4月间手术切除的GISMT病例中诊断明确、病历完整者86例，男49例，女37例，年龄1～77岁。肿瘤发生于食管11例，胃30例，小肠27例，结直肠18例。根据镜下观察，选择细胞生长活跃区连续计数30个高倍视野(HPF)，确定每10个HPF中平均核分裂数。按Evans[2]和He LJ等[3]的标准区分平滑肌瘤(leiomyoma, LM)、平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma, LS)。LS组织学分级参考Patrick等[4]的标准。其中LM 25例；LSⅠ级(LSⅠ) 26例，Ⅱ级(LS Ⅱ)20例，Ⅲ级(LSⅢ)15例。根据大体病理特征分为：恶性生长方式组(肿瘤有周围浸润、种植或转移) 40 例；良性生长方式组(肿瘤无周围浸润、种植或转移) 46 例。肿瘤直径为0.3～5.9 cm组 38 例；6～10 cm组 25 例；>10 cm组 23 例。肿瘤中心有坏死组 41 例；无坏死组 45 例。另取 8 例正常胃肠道平滑肌组织(NSMT)作为对照。本组 86 例GISMT中，除3例因其它原因死亡外，其余 83 例随访资料完整，随访时间为 12～242 个月，平均 58 个月。
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所有标本均经 10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，常规连续切片，分别做HE染色，Ki-67微波修复抗原与免疫组织化学染色。
1.2 试剂
鼠抗人Ki-67(MIB-1)单抗工作浓度为1∶100，S-P试剂盒工作浓度为1∶150，均购自福州迈新生物制品公司。
1.3 实验方法
1.3.1 微波修复抗原方法：
(1)组织经脱蜡后用 3% H2O2或 0.5% 的过碘酸处理50 min。(2)蒸馏水冲洗3 min×2次。(3)将预先涂有聚L赖氨酸的组织切片经上述处理后完全浸泡于盛有0.01 mol/L柠檬酸缓冲液 pH＝6的玻璃载玻片缸中，盖上盖子(不要盖密)，放于微波炉内于解冻或“defrost”档加热 7～10 min，(加热过程中若遇缸中水量减少，可加蒸馏水至原先量即可)。(4)取出玻璃载玻片冷却至室温。(5)PBS溶液(pH＝7.2)冲洗3 min×3次。
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1.3.2 免疫组织化学染色S-P法。
1.3.3 结果判定：以细胞核呈棕红色或细胞核，细胞浆同时呈棕红色为阳性；单纯细胞浆着色而细胞核无着色，或细胞核，细胞浆均无着色为阴性，于40倍光镜下10个视野计数，每个视野计数100个细胞，Ki-67标记值为：(阳性细胞总和/1000)×100%，同已知阳性片对照。
1.4 数据处理
t检验。患者生存率分析采用Kaplan-Meier寿命法及Log-rank检验。
2 结果
随着GISMT良恶性改变及恶性程度的增高，Ki-67标记值依次明显递增(P<0.01)。另外，Ki-67与肿瘤良恶性生长方式、肿瘤大小、肿瘤中心有无坏死，亦有明显关系(P<0.01)见表1。
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表1 Ki-67与GISMT临床病理特征的关系(
±s)Table 1 The relationship of the expression of Ki-67 with
the clinical and pathologic features of GISMT 临床病理
n
Ki-67值
P
分类分级
NSMT
8
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0.15±0.05
LM
25
1.34±0.22
LS-Ⅰ
26
3.49±0.40
LS-Ⅱ
20
6.73±2.32
LS-Ⅲ
15
10.18±2.07
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P<0.01
生长方式
良性
46
2.32±1.12
恶性
40
7.69±2.90
P<0.01
直径(cm)
0.3～5.9
38
2.05±1.28
, 百拇医药
6.0～10
25
4.89±2.47
>10
23
9.01±2.55
P<0.01
坏死
无
45
2.69±1.56
有
41
, 百拇医药
7.16±3.41
P<0.01
Ki-67低表达组(<均数5.25) 5 年生存率为 87.25%，高表达组(≥均数5.25)5年生存率为32.30%。两组间存在显著差异(P<0.05)。
3 讨论
Ki-67是由Gerdes等[4]于1983年首次制备成功，它存在于增殖细胞当中，在静止细胞则不表达。Ki-67的免疫染色揭示细胞核的反应性存在于卵泡细胞皮质的胚胎中心、胸腺细胞的皮质、胃肠道粘膜的上皮细胞、未分化的精原细胞及很多的人类细胞株。Ki-67抗体不与处于静止期的细胞发生反应，如淋巴细胞、单核细胞、胃肠道粘膜的壁细胞等。Ki-67能直接与反映肿瘤增殖的核抗原发生反应，从而用于肿瘤组织活检。
随着研究的深入，Gerdes等[5]提出：Ki-67是针对处于增殖周期的人类细胞核抗原的抗体，能标记G1后期、S期、G2期和M期细胞核，G1早期和G0期细胞核不被标记。Gerdes[6]于1985年进一步提出将Ki-67应用于外科手术中的快速病理诊断，提示Ki-67具有判断预后和有助于治疗方案的选择，为 Ki-67 广泛应用尤其是快速病理诊断提供了理论基础。微波修复抗原方法的出现[7]，使 Ki-67 的应用范围明显扩大。
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本文结果表明：从LM到LSⅠ、Ⅱ、Ⅲ级，其Ki-67表达逐渐升高，说明肿瘤的分化程度越低，增殖活性越强，恶性程度越高，基本反映了肿瘤细胞增殖和分化程度的一般规律。目前认为GISMT的体积大小、周围是否有侵袭、中心有无坏死均是临床病理判断GISMT良恶性的重要依据。本研究提示：肿瘤体积大、中心有坏死、生长方式有临近器官的浸润或腹腔种植和远处转移时，Ki-67计数均明显提高。本研究结果也提示：Ki-67高表达组与低表达组的5年生存率之间存在显著性差异，但它是否能成为一个GISMT的独立预后指标，还有待进一步扩大样本，长时间的大量随访及与其它因素的对比统计分析才能确定。因此可以认为Ki-67是判断GISMT恶生程度、肿瘤分类分级及预后较好的一种指标。
辽宁省自然科学基金资助项目，972254
作者单位:王明德(中国医科大学第二临床学院外科，沈阳 110003)
秦晔(中国医科大学第二临床学院外科，沈阳 110003)
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张凤祥(中国医科大学第二临床学院外科，沈阳 110003)
于文泉(中国医科大学第二临床学院外科，沈阳 110003)
参考文献
1，Evans HL. Smooth muscle tumors of the gastrointestinal tract: a study of 56 cases followed for a minimum of 10 years. Cancer, 1985, 56(9): 2242-2250
2，He LJ, Wang BS, Chen CC. Smooth muscle tumors of the digestive tract: report of 160 cases. Br J Surg, 1988, 75(2): 184-186
, 百拇医药
3，Patrick CM, James PN, Walter L, et al. Gastrointestinal Sarcomas: analysis of prognostic factors. Ann Surg, 1987, 2060(6):706-710
4，Gerdes J, Schwab U, Lemke H, et al. Production of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen associate with cell proliferation.Int J Cancer, 1983, 31(1): 13-20
5，Gerdes J, Lemke H, Baisch H, et al. Cell cycle analysis of a cell proliferation-associated human nuclear antigen defined by the monoclonal antibody Ki-67. J Immunol, 1984,133(4): 1710-1715
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6，Gerdes J. An immunohistological method for estimating cell growth fractions in rapid histopathological diagnosis during surgery. Int J Cancer, 1985, 35(2): 169-171
7，Shi SR, Key ME, Kalra KL. Antigen retrieval in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues: an enhancement method for immunohistochemical staining based no microwave oven heating of tissue sections. J Histoche Cytoche, 1991, 39(6): 741-748
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