多药耐药相关蛋白及P-糖蛋白在胃癌组织中表达的意义
作者：陈波 赵岩 金锋 赵凤凯 王梅先 王舒宝
单位：
关键词：胃肿瘤；P-糖蛋白；多药耐药性；多药耐药相关蛋白
中国医科大学学报000119 摘要 目的：分析多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein, MRP)、P-糖蛋白(P-gp)在胃癌组织中表达，研究其与胃癌生物学行为及预后的关系。方法：采用免疫组化法检测53例胃癌组织MRP、P-gp表达的情况，分析其与相关临床资料的关系。结果：MRP、P-gp表达与临床分期、浸润深度、组织学类型无关。MRP表达与淋巴结转移显著相关(P<0.01)。MRP、P-gp表达与5年生存率无关。结论：MRP在胃癌组织中的单一表达能一定程度上反映胃癌的生物学行为。MRP、P-gp均不能较好的反映胃癌的预后。
Expression of P-glycoprotein and Multidrug Resistance Associated Protein in Gastric Cancer
, http://www.100md.com
Chen Bo Zhao Yan Jin Feng et al
(Department of Oncology, The First Clinical College, China Medical University, Shenyang,110001)
ABSTRACT Objective:Our purpose was to study the expression of MRP and Pgp in gastric cancer. Methods：The immunohistochemical expression of Pgp and MRP was examined in 53 patients with gastric cancer. The correlation between the expression and some clinical data were analyzed. Results:There were no significant correlations between the expression and pathologic stage, depth of invasion, and histological type for both MRP and Pgp (P>0.05). The positive expression of MRP in group with lymphatic metastasis was significantly higher than that in group without lymphatic metastasis (P<0.01). There was no difference between the five-year survival rate of positive expression of each antibody and that of negative expression of each antibody. Conclusion: The expression of MRP could show the invasive character of gastric cancer. Both of the expressions could not reflect prognosis of gastric cancer well.
, 百拇医药
KEY WORDS gastric neoplasm; P-glycoprotein; multidrug resistance; multidrug resistance associated protein
多药耐药(multidrug resistance, MDR)是导致胃癌化疗失败的一个重要因素。研究表明MDR是由MDR1基因编码的分子量为170 kd的细胞膜蛋白(P-glycoprotein, P-gp)引起，它作为能量依赖的药物泵，将化疗药物主动泵出细胞外，从而导致细胞耐药性[1]。最近发现多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein, MRP)与非P-gp介导的MDR有关[2]，作者对53例胃癌组织进行MRP、P-gp共同表达进行观察，并结合随访资料进行相关研究。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 对象 1980年7月～1990年7月中国医科大学第一临床学院肿瘤科胃癌手术标本53例：男38例，女15例，年龄35～70岁。患者术前均未用化疗及放疗。术后常规化疗标本用福尔马林固定，石蜡包埋，选5例正常粘膜分别做MRP、P-gp对照。
1.2 试剂与方法 鼠源性MRP、P-gp，均购自福州迈新生物技术公司。免疫组化采用SP法。主要步骤：石蜡切片脱蜡和水化后，加1滴过氧化酶阻断液，室温下孵育10 min，并用微波抗原修复；加非免疫性动物血清，置室温下孵育10 min，封闭非特异性抗原反应；加一抗MRP、P-gp，4℃冰箱内过夜；加入二抗，室温下10 min；加链霉素-过氧化酶溶液，室温下10 min；DAB显色，苏木素复染封片。
阳性结果标准：以细胞膜上和(或)胞浆内出现棕黄染色为阳性细胞，整张切片中阳性细胞数占5%～10%即为阳性[3]。
统计学处理：采用χ2检验。
, 百拇医药
2 结果
53例胃癌组织中，MRP阳性表达24例，P-gp 19例，阳性率为44.4%(24/53)及35.2%(19/53)。10例正常胃粘膜内均未见阳性染色。P-gp、MRP在细胞膜及细胞浆内均有明显表达。其表达结果经χ2检验与肿瘤分期、组织学类型、浸润深度等临床因素均无关(P>0.05)。MRP在有淋巴结转移病例中的阳性表达率为53.33%(24/45)，显著高于无淋巴结转移的阳性表达率(P<0.01)，P-gp的阳性表达虽经统计学检验与淋巴结转移无关，但阳性表达率40.00%(18/45)比无淋巴结转移率12.5%(1/8)高(表1)。对其中47例胃癌均随访5年以上，其中MRP阳性表达病例的5年生存率为13.64%(3/22)，P-gp阳性表达病例的5年生存率为10.53%(2/19)，均低于二者阴性表达病例5年生存率的45%(11/25)及28.56%(8/28)，但差别均无显著性(P>0.05)。
表1 MRP和P-gp在胃癌组织中的表达
, http://www.100md.com
Tabel 1 Expression of MRP and Pgp in the tissue
of gastric carcinoma 项 目
MRP
MRP
阳性例(%)
P
阳性例(%)
P
分期
Ⅰ
0/4(0.00)
0/4(0.00)
, http://www.100md.com
Ⅱ
3/9(33.33)
>0.05
5/9(55.56)
>0.05
Ⅲ
11/20(55.00)
6/20(30.00)
Ⅳ
10/20(50.00)
8/20(40.00)
淋巴结转移
, http://www.100md.com
有
24/45(53.33)
18/45(40.00)
无
0/8(0.00)
<0.01
1/8(12.50)
>0.05
组织学类型
高
1/4(25.00)
1/4(25.00)
, 百拇医药
中
5/9(55.56)
5/9(55.56)
低
7/15(46.67)
>0.05
7/15(46.67)
>0.05
未分化
8/12(66.67)
3/12(25.00)
其它
, http://www.100md.com
3/13(23.08)
3/13(23.08)
浸润深度
透浆膜
18/37(48.65)
13/37(35.13)
未透浆膜
6/16(37.50)
>0.05
6/16(37.50)
>0.05
3 讨论
, 百拇医药
P-gp是由MDR 1基因编码的分子量为170 kd的细胞膜蛋白，它作为能量依赖的药物泵，将化疗药物主动泵出细胞外，而MRP是由Cole等[2]在研究非MDR小细胞癌细胞株时发现的，其分子量为190 kd[4]。通过二者在胃癌组织中表达的研究，我们发现，二者表达与浸润深度，组织学类型、临床分期等因素无关。MRP在淋巴结转移中阳性表达率显著高于淋巴结无转移的阳性表达率，P-gp的阳性表达经统计学检验与淋巴结转移阴性无关，但其在有淋巴结转移的阳性表达率40.00%(18/45)要比无淋巴结转移的阳性表达率12.5%(1/8)高。说明MRP及P-gp能够在一定程度上反映的肿瘤浸润转移的生物学特性。由此说明，多药耐药机制是一个相对独立的机制，它可能在组织发生癌变的同时便被启动，产生作用。所以与胃癌生物学行为关系不够密切。
本文结果亦表明，二者表达阳性的5年生存率均与表达阴性的5年生存率无显著差别(P>0.05)。陈金联等[5]报道MRP与胃癌预后有一定的关系。这可能与本研究选择病例数较小有关，也可能某些病例在术前未产生多药耐药性，而在术后化疗中获得多药耐药性，从而影响胃癌术后的5年生存率。
, http://www.100md.com
总之，MDR机制复杂多样，胃癌组织中存在多种耐药机制，共同作用产生耐药性。单一机制的表达能反应一定的胃癌浸润转移的生物学特性，但不能较好的反映胃癌的预后。所以在临床检测中，应联合应用MRP、P-gp等不同机制的抗体。
参考文献
1 Gottesman MM, Panstan I. Biochemistry of multidrug resistance mediated by the multidrug transporter. Annu Rev Biochem, 1993；62:385_427
2 Cole SPC, Bhardwaj G, Gerlach JH, et al. Overexpression of a transporter gene in a multidrug-resistant human lung cancer cell line. Science, 1992,258:1650_1654
, http://www.100md.com
3 Sinocrope FA, Hart J, Brasitus TA, et al. Relationship of p-glycoprotein and carcinoembryonic antigen expression in human colon carcinoma to local invasion, DNA ploid and diseasere lapse. Cancer, 1994,74:2908_2917
4 Hipfner DR, Gauldie SD, Deely RG, et al. Detection of the Mr 190,000 multigrug resistance protein, MRP, with monoclonal antibodies. Cancer Res, 1994,54:5788_5792
5 陈金联，吴云林，周同，等.多药耐药相关蛋白在胃癌表达中的意义.上海第二医科大学学报，1997，4：247～249
(1999-07-08收稿), 百拇医药
单位：
关键词：胃肿瘤；P-糖蛋白；多药耐药性；多药耐药相关蛋白
中国医科大学学报000119 摘要 目的：分析多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein, MRP)、P-糖蛋白(P-gp)在胃癌组织中表达，研究其与胃癌生物学行为及预后的关系。方法：采用免疫组化法检测53例胃癌组织MRP、P-gp表达的情况，分析其与相关临床资料的关系。结果：MRP、P-gp表达与临床分期、浸润深度、组织学类型无关。MRP表达与淋巴结转移显著相关(P<0.01)。MRP、P-gp表达与5年生存率无关。结论：MRP在胃癌组织中的单一表达能一定程度上反映胃癌的生物学行为。MRP、P-gp均不能较好的反映胃癌的预后。
Expression of P-glycoprotein and Multidrug Resistance Associated Protein in Gastric Cancer
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Chen Bo Zhao Yan Jin Feng et al
(Department of Oncology, The First Clinical College, China Medical University, Shenyang,110001)
ABSTRACT Objective:Our purpose was to study the expression of MRP and Pgp in gastric cancer. Methods：The immunohistochemical expression of Pgp and MRP was examined in 53 patients with gastric cancer. The correlation between the expression and some clinical data were analyzed. Results:There were no significant correlations between the expression and pathologic stage, depth of invasion, and histological type for both MRP and Pgp (P>0.05). The positive expression of MRP in group with lymphatic metastasis was significantly higher than that in group without lymphatic metastasis (P<0.01). There was no difference between the five-year survival rate of positive expression of each antibody and that of negative expression of each antibody. Conclusion: The expression of MRP could show the invasive character of gastric cancer. Both of the expressions could not reflect prognosis of gastric cancer well.
, 百拇医药
KEY WORDS gastric neoplasm; P-glycoprotein; multidrug resistance; multidrug resistance associated protein
多药耐药(multidrug resistance, MDR)是导致胃癌化疗失败的一个重要因素。研究表明MDR是由MDR1基因编码的分子量为170 kd的细胞膜蛋白(P-glycoprotein, P-gp)引起，它作为能量依赖的药物泵，将化疗药物主动泵出细胞外，从而导致细胞耐药性[1]。最近发现多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein, MRP)与非P-gp介导的MDR有关[2]，作者对53例胃癌组织进行MRP、P-gp共同表达进行观察，并结合随访资料进行相关研究。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 对象 1980年7月～1990年7月中国医科大学第一临床学院肿瘤科胃癌手术标本53例：男38例，女15例，年龄35～70岁。患者术前均未用化疗及放疗。术后常规化疗标本用福尔马林固定，石蜡包埋，选5例正常粘膜分别做MRP、P-gp对照。
1.2 试剂与方法 鼠源性MRP、P-gp，均购自福州迈新生物技术公司。免疫组化采用SP法。主要步骤：石蜡切片脱蜡和水化后，加1滴过氧化酶阻断液，室温下孵育10 min，并用微波抗原修复；加非免疫性动物血清，置室温下孵育10 min，封闭非特异性抗原反应；加一抗MRP、P-gp，4℃冰箱内过夜；加入二抗，室温下10 min；加链霉素-过氧化酶溶液，室温下10 min；DAB显色，苏木素复染封片。
阳性结果标准：以细胞膜上和(或)胞浆内出现棕黄染色为阳性细胞，整张切片中阳性细胞数占5%～10%即为阳性[3]。
统计学处理：采用χ2检验。
, 百拇医药
2 结果
53例胃癌组织中，MRP阳性表达24例，P-gp 19例，阳性率为44.4%(24/53)及35.2%(19/53)。10例正常胃粘膜内均未见阳性染色。P-gp、MRP在细胞膜及细胞浆内均有明显表达。其表达结果经χ2检验与肿瘤分期、组织学类型、浸润深度等临床因素均无关(P>0.05)。MRP在有淋巴结转移病例中的阳性表达率为53.33%(24/45)，显著高于无淋巴结转移的阳性表达率(P<0.01)，P-gp的阳性表达虽经统计学检验与淋巴结转移无关，但阳性表达率40.00%(18/45)比无淋巴结转移率12.5%(1/8)高(表1)。对其中47例胃癌均随访5年以上，其中MRP阳性表达病例的5年生存率为13.64%(3/22)，P-gp阳性表达病例的5年生存率为10.53%(2/19)，均低于二者阴性表达病例5年生存率的45%(11/25)及28.56%(8/28)，但差别均无显著性(P>0.05)。
表1 MRP和P-gp在胃癌组织中的表达
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Tabel 1 Expression of MRP and Pgp in the tissue
of gastric carcinoma 项 目
MRP
MRP
阳性例(%)
P
阳性例(%)
P
分期
Ⅰ
0/4(0.00)
0/4(0.00)
, http://www.100md.com
Ⅱ
3/9(33.33)
>0.05
5/9(55.56)
>0.05
Ⅲ
11/20(55.00)
6/20(30.00)
Ⅳ
10/20(50.00)
8/20(40.00)
淋巴结转移
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有
24/45(53.33)
18/45(40.00)
无
0/8(0.00)
<0.01
1/8(12.50)
>0.05
组织学类型
高
1/4(25.00)
1/4(25.00)
, 百拇医药
中
5/9(55.56)
5/9(55.56)
低
7/15(46.67)
>0.05
7/15(46.67)
>0.05
未分化
8/12(66.67)
3/12(25.00)
其它
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3/13(23.08)
3/13(23.08)
浸润深度
透浆膜
18/37(48.65)
13/37(35.13)
未透浆膜
6/16(37.50)
>0.05
6/16(37.50)
>0.05
3 讨论
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P-gp是由MDR 1基因编码的分子量为170 kd的细胞膜蛋白，它作为能量依赖的药物泵，将化疗药物主动泵出细胞外，而MRP是由Cole等[2]在研究非MDR小细胞癌细胞株时发现的，其分子量为190 kd[4]。通过二者在胃癌组织中表达的研究，我们发现，二者表达与浸润深度，组织学类型、临床分期等因素无关。MRP在淋巴结转移中阳性表达率显著高于淋巴结无转移的阳性表达率，P-gp的阳性表达经统计学检验与淋巴结转移阴性无关，但其在有淋巴结转移的阳性表达率40.00%(18/45)要比无淋巴结转移的阳性表达率12.5%(1/8)高。说明MRP及P-gp能够在一定程度上反映的肿瘤浸润转移的生物学特性。由此说明，多药耐药机制是一个相对独立的机制，它可能在组织发生癌变的同时便被启动，产生作用。所以与胃癌生物学行为关系不够密切。
本文结果亦表明，二者表达阳性的5年生存率均与表达阴性的5年生存率无显著差别(P>0.05)。陈金联等[5]报道MRP与胃癌预后有一定的关系。这可能与本研究选择病例数较小有关，也可能某些病例在术前未产生多药耐药性，而在术后化疗中获得多药耐药性，从而影响胃癌术后的5年生存率。
, http://www.100md.com
总之，MDR机制复杂多样，胃癌组织中存在多种耐药机制，共同作用产生耐药性。单一机制的表达能反应一定的胃癌浸润转移的生物学特性，但不能较好的反映胃癌的预后。所以在临床检测中，应联合应用MRP、P-gp等不同机制的抗体。
参考文献
1 Gottesman MM, Panstan I. Biochemistry of multidrug resistance mediated by the multidrug transporter. Annu Rev Biochem, 1993；62:385_427
2 Cole SPC, Bhardwaj G, Gerlach JH, et al. Overexpression of a transporter gene in a multidrug-resistant human lung cancer cell line. Science, 1992,258:1650_1654
, http://www.100md.com
3 Sinocrope FA, Hart J, Brasitus TA, et al. Relationship of p-glycoprotein and carcinoembryonic antigen expression in human colon carcinoma to local invasion, DNA ploid and diseasere lapse. Cancer, 1994,74:2908_2917
4 Hipfner DR, Gauldie SD, Deely RG, et al. Detection of the Mr 190,000 multigrug resistance protein, MRP, with monoclonal antibodies. Cancer Res, 1994,54:5788_5792
5 陈金联，吴云林，周同，等.多药耐药相关蛋白在胃癌表达中的意义.上海第二医科大学学报，1997，4：247～249
(1999-07-08收稿), 百拇医药