肝硬化患者血清、腹水中一氧化氮检测及其意义
作者：邓家德 李扬 余伟雄 冯泰保
单位：邓家德 余伟雄 冯泰保(广州医学院附属市第一人民医院检验科，广州 510180)；李扬(中山医科大学病理学教研室，广州 510089)
关键词：肝硬化；一氧化氮；腹水
广州医学院学报000112
提要 目的：探讨检测肝硬化患者血清、腹水中一氧化氮(NO)浓度在肝硬化诊断及治疗中的意义。方法：用硝酸盐还原酶法测定了肝硬化患者血清(n=40)和腹水(n=15)、急性肝炎患者血清(n=50)、正常对照组(n=50)血清中NO浓度，结果：发现肝硬化患者血清NO浓度较正常对照组及急性肝炎组显著升高(P<0.01)，肝硬化患者中有腹水者血清中NO浓度较无腹水者升高更为显著(P<0.01)，血清中NO的浓度随Child-Pugh分级增高而升高(P<0.05)，肝硬化患者血清中的NO浓度与其腹水中NO浓度呈正相关(r=0.647，P<0.05)，而急性肝炎患者血清中NO浓度虽有升高，但与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05)，结论：肝硬化时，NO合成增加，肝功能的损害和腹水的产生与NO的浓度密切相关，检测肝硬化患者血清及腹水中NO浓度，对临床判断肝硬化病情严重程度和观察疗效具有一定的帮助。
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中图分类号 R575.2 文献标识码：A 文章编号：1008-1836(2000)01-0046-03
The Determination of Serum and Ascites NO in
Patients with Hepatic Cirrhosis and its Clinical Significance
Deng Jiade,Yu Weixiong
(Department of Laboratory,Guangzhou First People′s Hospital,Guangzhou 510180)
Li Yang
(Department of Pathology,Sun Yet-San University of Medical Sciences,Guangzhou 510089)
, 百拇医药
Objective:To elucidate the significance of the determination of serum and ascites nitric oxide (NO) for the diagnosis and treatment of patients with hepatic cirrhosis. Methods:By using the method of nitrate reductase,NO in 40 specimens of serum and 15 of ascites in patients with cirrhosis,that in 50 specimens of serum from patients with acute virus-hepatitis and 50 from normal controls,were determined. Results:Serum NO concentration in the patients with cirrohsis was higher than that in normal control and patienrs with acute virus-hepatitis (P<0.05),and that in cirrhosis patients with ascites was significantly higher than that without ascites (P<0.01). It was also found that serum NO concentration increased along with the elevation of the Child-Pugh grading in patients with cirrhosis,and the NO concentration in serum was positively correlated to that in ascites (r=0.674,P<0.05). The serum NO concentration in patients with acute-hepatitis patients was not statistically different from that in normal control group (P>0.05). Conclusion:There is an increased synthesis of NO in cirrhosis,which seems to bear some relationship with the damage of hepatic functions and the production of ascites. Thus,the determination of serum and ascites NO concentration should be helpful for the monitoring of patient′s condition and therapeutic effects.
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Key words Hepatic cirrhosis;Nitric oxide;Ascites
一氧化氮(Nitric Oxide,NO)是近年发现的在人体中具有多种生理、病理作用的活跃分子，其作用引起了众多学者的关注。NO能促使肝硬化患者门脉血流动力学紊乱[1]，为进一步探讨肝硬化患者血清与腹水中NO浓度的关系，本文分别检测了肝硬化患者血清及腹水中NO的浓度，报告如下。1 材料与方法
1.1 病例选择
1.1.1 肝硬化组： 共40例，全部为肝炎后肝硬化患者，男性28名，女性12名，年龄50±21岁；符合肝硬化临床诊断标准，其中Child-Pugh分级示A级8例，B级18例，C级14例，经B超探查其中23例有腹水，17例无腹水；采血前未使用丙种球蛋白、糖皮质激素、硝基类药物等。
1.1.2 急性肝炎组： 共50例，全部为急性病毒性肝炎患者，男性25名，女性25名，年龄41±17岁，诊断标准依据1995年病毒性肝炎防治方案修改讨论稿(北京)。
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1.1.3 腹水：15份腹水(采自上述肝硬化23例有腹水肝硬化患者)
1.1.4 正常对照组：共50例，为体检健康志愿者，男性25名，女性25名，平均年龄52±11岁。
1.2 方法
1.2.1 标本采集
1.2.1.1 血标本收集：空腹静脉采血3ml，分离血清，置-20℃保存待测。
1.2.1.2 腹水标本收集：将抽出的腹水，立即用离心机以1500转/min离心5min，取上清液，置-20℃保存待测。
1.2.2 NO测定：用硝酸盐还原酶法检测，试剂盒购自深圳晶美生物试剂公司，操作按说明书进行。
1.2.3 统计学处理：数据以
±s表示，各组间的均数差异性比较采用t检验，相关关系采用直线相关分析。
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2 结果
2.1 对照组、急性肝炎患者、肝硬化患者血清中NO的浓度见表1，急性肝炎患者血清中NO的浓度与正常对照组比较，虽有增高但无显著性差异(P>0.05)，肝硬化患者血清中NO的浓度明显高于正常对照组和急性肝炎组，且有统计学差异(P<0.01)。
表1 对照组、急性肝炎患者、肝硬化患者血清中NO比较(±s) 组别
例数
NO(μmol/L)
P值
对照组
50
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38.3±13.8
急性肝炎
50
45.8±10.5
>0.05
肝硬化
40
78.9±28.3
<0.01
2.2 有腹水肝硬化患者和无腹水肝硬化患者的血清中NO的浓度见表2，有腹水的肝硬化患者血清中NO浓度明显高于无腹水的肝硬化患者(P<0.01)。表2 有、无腹水肝硬化患者血清的NO浓度比较(±s) 组别
, 百拇医药
例数
NO(μmol/L)
P值
有腹水肝硬化组
23
87.1±34.3
无腹水肝硬化组
17
67.2±11.4
<0.05
2.3 肝硬化Child-Pugh分级A、B、C级患者血清中NO浓度见表3，A级与对照组、B级与A级、C级与B级比较均显著增高(P<0.05)。表3 肝硬化Child-Pugh分级与对照组NO浓度的比较(±s) 级别
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例数
NO(μmol/L)
P值
对照组
50
38.3±13.8
A级
8
52.5±15.3
<0.05*
B级
18
81.7±20.1
, 百拇医药
<0.05**
C级
14
101.4±38.2
<0.005***
注：P*A级与对照组比较，P**B级与A级比较，P***C级与B级比较。
2.4 肝硬化患者血清中的NO浓度与其腹水中NO浓度呈正相关(r=0.647，P<0.05)。3 讨论
NO是1980年Furchgott等[2]提出的一种“内皮细胞依赖扩张因子”，NO作用的一种常见形式为先与鸟苷酸环化酶的亚铁原卟啉基团结合，激活这种酶，催化合成环鸟嘌呤核苷酸(cGMP)，产生各种不同的功能[3]。
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大量的动物和人体实验说明肝硬化中NO具有重要病理和生理意义，NO的这一作用对肝硬化病情变化的影响与并发腹水的关系报道甚少。本资料显示，肝硬化患者血清中NO浓度明显高于健康对照组；这是由于肝硬化患者因门-体分流，导致肠源性内毒素未经肝脏处理，直接进入体循环，在无明显感染的情况下出现内毒素血症，高水平内毒素可通过刺激巨噬细胞、库氏细胞释放细胞因子，诱导诱生型NOS(iNOS)合成大量的NO；而急性肝炎患者血清中NO浓度虽有升高，但与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05)，这说明NO不直接损害肝细胞，这与国内卢放根等报道相符[4]；肝硬化患者在合并腹水时其血清中NO浓度较无腹水者更高(P<0.05)，并且血清中的NO浓度与其腹水中NO浓度呈正相关(r=0.647，P>0.05)，是由于肝硬化时肝功能损害、门脉高压形成、门-体分流使内毒素在肝脏灭活减少和生成增加，激活iNOS，使NO的合成增多，高水平的NO引起的有效循环血量不足，而反馈性的引起血浆肾素血管紧张升高，交感神经递质的释放，心房利钠素升高，血管舒缓肽的降低以及其它活性介质的改变，肾脏血流的改变，从而肾脏增加水钠的重吸收，出现水钠潴留，导致腹水并发[5]；这与Campillo等报道[6]相符。在不同程度的肝功能损害中，随着病情进展，肝功能损害的加重，肝硬化患者NO浓度进行性增高，Child Push A级与对照组比较，B级与A级比较，C级与B级比较，均存在显著性差异(P<0.05)，这与Hori等报道的失代偿期患者高于代偿期患者相符[7]，提示肝硬化患者NO水平增高，可能通过加重门脉血流动力学的紊乱，使其病情恶化。也就是说NO促使肝硬化病情加重是一种继发性改变。因此，对肝硬化患者血清及腹水中NO浓度的检测，为临床判断肝硬化病情进展和观察疗效具有一定的帮助。
, 百拇医药
作者简介：邓家德，男(1968.2-)，学士，主管技师。研究方向：血液病的诊断。
参考文献
[1]Rockey D. The cellular pathogenesis of portal hypertension:Stellate cell contractility,endothelial,and nitric oxide[J].Hepatology,1997;25(1):1～5
[2]Furchgott RF,Zawadzki JV,The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterialsmooth muscle by acetylcholine[J]. Nature,1980;288(5945):373～376
[3]王曾礼.左旋精氨酸—一氧化氮途径与临床[J].国外医学*内科学分册，1994；21(2)：231～235
, 百拇医药
[4]卢放根，凌奇荷，伍汉文等.急性肝炎患者血清NO、IL-10、IL-12、TNF-α和尿NO的检测及意义[J].中华消化杂志,1998；18(4)：210～212
[5]Ress DD,Cellek S,Palmer RMJ,et al. Dexame-thason prevents the induction by endotoxin of nitric oxide synthesis and the associated effects on vascular tone:A insight into endotoxin shock[J].Biochem Biophys Res Commun,1990;173(2):541～547
[6]Campillo B,Bories PN,Benvenuti C,et al. Serum and urinary nitrate levels in liver cirrhosis:edotoxemia,renal function and hyperdynamic circulation[J]. J Hepatol,1996;25(5):707～714
[7]Hori N,Okanoue T,Mon T,et al. Endogenous nitric oxide production is augmented as the severity advances in paients with liver cirrhosis[J].Clin Exp Pharmocol Physiol,1996;23(1):30～35
(收稿：1999-10-21), 百拇医药
单位：邓家德 余伟雄 冯泰保(广州医学院附属市第一人民医院检验科，广州 510180)；李扬(中山医科大学病理学教研室，广州 510089)
关键词：肝硬化；一氧化氮；腹水
广州医学院学报000112
提要 目的：探讨检测肝硬化患者血清、腹水中一氧化氮(NO)浓度在肝硬化诊断及治疗中的意义。方法：用硝酸盐还原酶法测定了肝硬化患者血清(n=40)和腹水(n=15)、急性肝炎患者血清(n=50)、正常对照组(n=50)血清中NO浓度，结果：发现肝硬化患者血清NO浓度较正常对照组及急性肝炎组显著升高(P<0.01)，肝硬化患者中有腹水者血清中NO浓度较无腹水者升高更为显著(P<0.01)，血清中NO的浓度随Child-Pugh分级增高而升高(P<0.05)，肝硬化患者血清中的NO浓度与其腹水中NO浓度呈正相关(r=0.647，P<0.05)，而急性肝炎患者血清中NO浓度虽有升高，但与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05)，结论：肝硬化时，NO合成增加，肝功能的损害和腹水的产生与NO的浓度密切相关，检测肝硬化患者血清及腹水中NO浓度，对临床判断肝硬化病情严重程度和观察疗效具有一定的帮助。
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中图分类号 R575.2 文献标识码：A 文章编号：1008-1836(2000)01-0046-03
The Determination of Serum and Ascites NO in
Patients with Hepatic Cirrhosis and its Clinical Significance
Deng Jiade,Yu Weixiong
(Department of Laboratory,Guangzhou First People′s Hospital,Guangzhou 510180)
Li Yang
(Department of Pathology,Sun Yet-San University of Medical Sciences,Guangzhou 510089)
, 百拇医药
Objective:To elucidate the significance of the determination of serum and ascites nitric oxide (NO) for the diagnosis and treatment of patients with hepatic cirrhosis. Methods:By using the method of nitrate reductase,NO in 40 specimens of serum and 15 of ascites in patients with cirrhosis,that in 50 specimens of serum from patients with acute virus-hepatitis and 50 from normal controls,were determined. Results:Serum NO concentration in the patients with cirrohsis was higher than that in normal control and patienrs with acute virus-hepatitis (P<0.05),and that in cirrhosis patients with ascites was significantly higher than that without ascites (P<0.01). It was also found that serum NO concentration increased along with the elevation of the Child-Pugh grading in patients with cirrhosis,and the NO concentration in serum was positively correlated to that in ascites (r=0.674,P<0.05). The serum NO concentration in patients with acute-hepatitis patients was not statistically different from that in normal control group (P>0.05). Conclusion:There is an increased synthesis of NO in cirrhosis,which seems to bear some relationship with the damage of hepatic functions and the production of ascites. Thus,the determination of serum and ascites NO concentration should be helpful for the monitoring of patient′s condition and therapeutic effects.
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Key words Hepatic cirrhosis;Nitric oxide;Ascites
一氧化氮(Nitric Oxide,NO)是近年发现的在人体中具有多种生理、病理作用的活跃分子，其作用引起了众多学者的关注。NO能促使肝硬化患者门脉血流动力学紊乱[1]，为进一步探讨肝硬化患者血清与腹水中NO浓度的关系，本文分别检测了肝硬化患者血清及腹水中NO的浓度，报告如下。1 材料与方法
1.1 病例选择
1.1.1 肝硬化组： 共40例，全部为肝炎后肝硬化患者，男性28名，女性12名，年龄50±21岁；符合肝硬化临床诊断标准，其中Child-Pugh分级示A级8例，B级18例，C级14例，经B超探查其中23例有腹水，17例无腹水；采血前未使用丙种球蛋白、糖皮质激素、硝基类药物等。
1.1.2 急性肝炎组： 共50例，全部为急性病毒性肝炎患者，男性25名，女性25名，年龄41±17岁，诊断标准依据1995年病毒性肝炎防治方案修改讨论稿(北京)。
, 百拇医药
1.1.3 腹水：15份腹水(采自上述肝硬化23例有腹水肝硬化患者)
1.1.4 正常对照组：共50例，为体检健康志愿者，男性25名，女性25名，平均年龄52±11岁。
1.2 方法
1.2.1 标本采集
1.2.1.1 血标本收集：空腹静脉采血3ml，分离血清，置-20℃保存待测。
1.2.1.2 腹水标本收集：将抽出的腹水，立即用离心机以1500转/min离心5min，取上清液，置-20℃保存待测。
1.2.2 NO测定：用硝酸盐还原酶法检测，试剂盒购自深圳晶美生物试剂公司，操作按说明书进行。
1.2.3 统计学处理：数据以
±s表示，各组间的均数差异性比较采用t检验，相关关系采用直线相关分析。, http://www.100md.com
2 结果
2.1 对照组、急性肝炎患者、肝硬化患者血清中NO的浓度见表1，急性肝炎患者血清中NO的浓度与正常对照组比较，虽有增高但无显著性差异(P>0.05)，肝硬化患者血清中NO的浓度明显高于正常对照组和急性肝炎组，且有统计学差异(P<0.01)。
表1 对照组、急性肝炎患者、肝硬化患者血清中NO比较(
±s) 组别例数
NO(μmol/L)
P值
对照组
50
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38.3±13.8
急性肝炎
50
45.8±10.5
>0.05
肝硬化
40
78.9±28.3
<0.01
2.2 有腹水肝硬化患者和无腹水肝硬化患者的血清中NO的浓度见表2，有腹水的肝硬化患者血清中NO浓度明显高于无腹水的肝硬化患者(P<0.01)。表2 有、无腹水肝硬化患者血清的NO浓度比较(
±s) 组别, 百拇医药
例数
NO(μmol/L)
P值
有腹水肝硬化组
23
87.1±34.3
无腹水肝硬化组
17
67.2±11.4
<0.05
2.3 肝硬化Child-Pugh分级A、B、C级患者血清中NO浓度见表3，A级与对照组、B级与A级、C级与B级比较均显著增高(P<0.05)。表3 肝硬化Child-Pugh分级与对照组NO浓度的比较(
±s) 级别, http://www.100md.com
例数
NO(μmol/L)
P值
对照组
50
38.3±13.8
A级
8
52.5±15.3
<0.05*
B级
18
81.7±20.1
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<0.05**
C级
14
101.4±38.2
<0.005***
注：P*A级与对照组比较，P**B级与A级比较，P***C级与B级比较。
2.4 肝硬化患者血清中的NO浓度与其腹水中NO浓度呈正相关(r=0.647，P<0.05)。3 讨论
NO是1980年Furchgott等[2]提出的一种“内皮细胞依赖扩张因子”，NO作用的一种常见形式为先与鸟苷酸环化酶的亚铁原卟啉基团结合，激活这种酶，催化合成环鸟嘌呤核苷酸(cGMP)，产生各种不同的功能[3]。
, http://www.100md.com
大量的动物和人体实验说明肝硬化中NO具有重要病理和生理意义，NO的这一作用对肝硬化病情变化的影响与并发腹水的关系报道甚少。本资料显示，肝硬化患者血清中NO浓度明显高于健康对照组；这是由于肝硬化患者因门-体分流，导致肠源性内毒素未经肝脏处理，直接进入体循环，在无明显感染的情况下出现内毒素血症，高水平内毒素可通过刺激巨噬细胞、库氏细胞释放细胞因子，诱导诱生型NOS(iNOS)合成大量的NO；而急性肝炎患者血清中NO浓度虽有升高，但与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05)，这说明NO不直接损害肝细胞，这与国内卢放根等报道相符[4]；肝硬化患者在合并腹水时其血清中NO浓度较无腹水者更高(P<0.05)，并且血清中的NO浓度与其腹水中NO浓度呈正相关(r=0.647，P>0.05)，是由于肝硬化时肝功能损害、门脉高压形成、门-体分流使内毒素在肝脏灭活减少和生成增加，激活iNOS，使NO的合成增多，高水平的NO引起的有效循环血量不足，而反馈性的引起血浆肾素血管紧张升高，交感神经递质的释放，心房利钠素升高，血管舒缓肽的降低以及其它活性介质的改变，肾脏血流的改变，从而肾脏增加水钠的重吸收，出现水钠潴留，导致腹水并发[5]；这与Campillo等报道[6]相符。在不同程度的肝功能损害中，随着病情进展，肝功能损害的加重，肝硬化患者NO浓度进行性增高，Child Push A级与对照组比较，B级与A级比较，C级与B级比较，均存在显著性差异(P<0.05)，这与Hori等报道的失代偿期患者高于代偿期患者相符[7]，提示肝硬化患者NO水平增高，可能通过加重门脉血流动力学的紊乱，使其病情恶化。也就是说NO促使肝硬化病情加重是一种继发性改变。因此，对肝硬化患者血清及腹水中NO浓度的检测，为临床判断肝硬化病情进展和观察疗效具有一定的帮助。
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作者简介：邓家德，男(1968.2-)，学士，主管技师。研究方向：血液病的诊断。
参考文献
[1]Rockey D. The cellular pathogenesis of portal hypertension:Stellate cell contractility,endothelial,and nitric oxide[J].Hepatology,1997;25(1):1～5
[2]Furchgott RF,Zawadzki JV,The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterialsmooth muscle by acetylcholine[J]. Nature,1980;288(5945):373～376
[3]王曾礼.左旋精氨酸—一氧化氮途径与临床[J].国外医学*内科学分册，1994；21(2)：231～235
, 百拇医药
[4]卢放根，凌奇荷，伍汉文等.急性肝炎患者血清NO、IL-10、IL-12、TNF-α和尿NO的检测及意义[J].中华消化杂志,1998；18(4)：210～212
[5]Ress DD,Cellek S,Palmer RMJ,et al. Dexame-thason prevents the induction by endotoxin of nitric oxide synthesis and the associated effects on vascular tone:A insight into endotoxin shock[J].Biochem Biophys Res Commun,1990;173(2):541～547
[6]Campillo B,Bories PN,Benvenuti C,et al. Serum and urinary nitrate levels in liver cirrhosis:edotoxemia,renal function and hyperdynamic circulation[J]. J Hepatol,1996;25(5):707～714
[7]Hori N,Okanoue T,Mon T,et al. Endogenous nitric oxide production is augmented as the severity advances in paients with liver cirrhosis[J].Clin Exp Pharmocol Physiol,1996;23(1):30～35
(收稿：1999-10-21), 百拇医药