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编号:10221967
妊娠期和哺乳期大鼠胃幽门部生长抑素免疫反应阳性细胞的变化
http://www.100md.com 《福建医科大学学报》 2000年第1期
     作者:王世鄂 陈奕权 周瑞祥

    单位:王世鄂(福建医科大学 组织胚胎学教研室,福州 350004); 陈奕权(福建医科大学 组织胚胎学教研室,福州 350004); 周瑞祥(福建医科大学 组织胚胎学教研室,福州 350004)

    关键词:生长抑素;妊娠;泌乳;免疫组织化学;大鼠

    福建医科大学学报000108

    摘要:目的 观察妊娠期和哺乳期胃幽门部生长抑素(SS)免疫反应阳性细胞(D细胞)的变化。方法 应用免疫细胞化学和放射免疫方法测定胃幽门粘膜生长抑素阳性细胞染色强度、数密度(NV)、体密度(VV)和面数密度(NA)以及胃液内生长抑素含量。结果 妊娠第19天,D细胞染色强度、数密度、体密度和面数密度明显升高(P<0.05);哺乳第20天,D细胞染色明显减弱、数密度、体密度和面数密度显著下降(P<0.05),胃液内生长抑素含量明显增加(P<0.05)。结论 生长抑素参与妊娠、哺乳期胃肠功能的调节。
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    中图分类号:R364.3;R573.603 文献标识码:A

    文章编号:1000-2235(2000)01-0021-03

    Changes of Somatostatin Immunoreactive Positive Cells in Rat Pylorus during Pregnancy and Lactation

    WANG Shi-e,CHEN Yi-quan,ZHOU Rui-xiang

    (Department of Histology and Embryology,Fujian Medical University,Fuzhou 350004,China)

    ABSTRACT:Objective To investigate the changes of somatostatin immunoreactive positive cells in rat pylorus during pregnancy and lactation.Methods To study the immunocytochemical stain intensity,the volume density(VV),the surface density(NA),and the numerical density(Nv) of D cells in rat pylorus by the immunocytochemical ABC method.To measure the level of somatostatin in gastric juice of rats by radioimmunoassy.Results The immunocytochemical stain intensity,the volume density,the surface density and the numerical density of D cells increased apparently on day 19 of pregnancy(P<0.05) and decreased significantly on day 7 of lactation(P<0.05).The level of somatostatin in gastric juice rised obviously on 20th day of lactation(P<0.05).Conclusion There results suggest that somatostatin may involve the regulation of gastrointestinal function during pregnancy and lactation.
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    KEY WORDS:somatostatin;pregnancy;lactation;immunohistochemistry;rat

    生长抑素是胃肠道一种重要调节肽,具有广泛的生物学意义,它可以抑制胃肠道激素分泌、外分泌、胃排空和小肠蠕动等[1]。雌性动物(包括人)在不同生殖功能状态下,胃肠蠕动和吸收功能有所差异,妊娠、哺乳期间胃肠道肥大,酸分泌增多。本文运用免疫细胞化学结合放射免疫方法,研究妊娠和哺乳期胃幽门部生长抑素阳性细胞的变化。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂

    兔抗SS抗体为美国DOKO公司产品,ABC试剂盒购于美国VECTOR公司,生长抑素放免药盒购自北京海科锐生物技术公司。

    1.2 材料
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    SD雌性大白鼠45只(购于上海BK公司),3~6月龄,体重180~220 g。分为6组:A组(动情间期),B组(妊娠第5天),C组(妊娠第12天),D组(妊娠第19天),E组(哺乳第7天),F组(哺乳第20天)。妊娠时间确定方法:将动情前期或动情期雌性大鼠晚上10时左右与雄性大鼠合笼,次日上午9时行阴道涂片,发现精子者为妊娠第1天。按分组将大鼠断头,首先剪下胃,将胃内容物倾入离心管中,离心后收集胃液保存待测。取胃幽门部组织,经改良Bouin's液固定,石蜡包埋,制成6 μm的连续切片,每隔5张取1张行ABC法染色,每例动物随机取4张进行统计。

    1.3 胃液的放免测定 按说明书进行。

    1.4 免疫细胞化学方法

    兔抗SS抗体的稀释度为1∶1000,羊抗兔的IgG为1∶200稀释,ABC复合物稀释度为1∶100,其余按ABC试剂盒说明进行。免疫细胞化学染色后用苏木素复染。阴性对照分别用正常羊血清和PBS代替一抗。
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    1.5 细胞染色强度判断

    在400倍视野下,将SS免疫反应物染色强度分为3等级:(1)3分:强阳性细胞中充满SS免疫反应物,着色呈深棕色或棕黑色;(2)1分:弱阳性细胞中SS免疫反应物占胞质一半以下,且着色呈浅棕黄色;(3)2分:中等阳性细胞介于上述两者之间。

    1.6 体视学测定

    按Weibei法,在×10目镜测试网格上进行,在×40物镜下,将测试网格底横线与粘膜肌层平行,观察测定粘膜肌层以上的全部胃粘膜,计数每一视野中:(1)粘膜落点数(ΣPri);(2)SS免疫反应阳性细胞的落点数(ΣPxi);(3)SS免疫反应阳性细胞数(ΣNxi)。每组动物至少计数100个视野,同时计数200个含核的D细胞长轴与短轴,求出轴比,然后按文献[2]中的对应表,查出相对应的形态系数β值。按公式计算:VV=ΣPxi/ΣPri;NA=ΣNxi/aΣPri(a为测试网格每个正方形小格面积);NV=(1/β)×[(NA3)/VV](1/2)
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    1.7 统计学处理

    以上所有测定值均以均值±标准误表示,采用SPSS软件包对以上全部数据进行单因素方差分析,以P<0.05为有显著性意义。

    2 结 果

    胃幽门部D细胞多分布于粘膜的中深部,特别是深部1/3。胞质呈棕色反应,胞核呈阴性,细胞形态多样,可见梭形、卵圆形及不规则形等。D细胞基部伸出细长突起,有的突起末端膨大,突起内含SS阳性反应物质,可见少数D细胞突起或顶部达胃小凹和腺腔,胃幽门粘膜表面呈SS免疫阳性反应(图1~3)。阴性对照结果均呈阴性,切片不着色或显极淡黄色。

    图1 D细胞主要位于粘膜中、下部,粘膜表面呈SS免疫反应阳性. ×200
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    图2 D细胞有突起,突起呈SS免疫反应阳性,D细胞的顶端到达胃幽门腺腺腔.

    *:含突起阳性的D细胞. ×400

    图3 D细胞的突起达胃小凹(*). ×400)

    胃幽门部D细胞的深度指数、NA、NV和VV在妊娠第5天、第12天和哺乳第7天均下降,但只有哺乳第7天组有显著性差别;妊娠第19天上述四项指标均明显升高。哺乳第20天,深度指数略升高,而NA、NV和VV变化不明显(表1)。

    表1 胃幽门部D细胞的深度指数、体密度、数密度和面数密度 分组
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    深度指数

    体密度

    数密度

    面数密度

    A

    1.954±0.052

    0.005±0.0001

    8981.814±519.532

    96.817±4.251

    B

    1.819±0.043

    0.004±0.0004
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    7210.377±867.883

    78.469±8.924

    C

    1.925±0.043

    0.004±0.0004

    7066.850±443.295

    77.516±5.703

    D

    2.315±0.060*

    0.008±0.0006*

    11906.681±1065.357*
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    137.651±11.567*

    E

    1.522±0.045*

    0.003±0.0003*

    5884.814±436.902*

    60.966±4.563*

    F

    2.105±0.070

    0.005±0.0005

    8125.384±744.986
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    91.714±7.949

    与A组相比,P<0.05(表2同).

    胃液内SS水平除妊娠第19天外,其余各组均上升,只有哺乳第20天有统计学意义(表2)。

    表2 胃液内生长抑素含量(pg/ml) 分组

    生长抑素

    A

    715.453±23.237

    B

    819.071±29.353

    C

    732.286±18.777
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    D

    672.386±26.326

    E

    786.214±29.258

    F

    833.857±35.441*

    3 讨 论

    D细胞大部分分布于胃幽门粘膜中、深部,细胞形态多样,有的D细胞基部发出突起伸向临近细胞,可见D细胞顶部或其突起达腺腔,胃幽门粘膜表面呈SS免疫阳性反应。Reichlin认为[3],D细胞的表面微绒毛与胃肠腔接触,胃肠腔内容物变化,特别是氢离子和某些营养物,可通过这种途径被D细胞感觉而调节SS的分泌。SS既可分泌入胃肠壁组织间隙,由此进入血流,也可直接进入胃肠腔。分泌入腔内的SS也能调节胃酸和胃泌素等分泌,称为“Lumone”,即腔激素之意。这些结果均支持Lucey观点[4],SS可作为内分泌激素,发挥生物学效应,也可作为旁分泌激素和外分泌(腔分泌)激素,发挥局部调节效应。
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    胃肠道内分泌细胞除以内分泌方式释放激素外,还存在外分泌(腔分泌)方式[3],有学者认为释放入血和释放入胃肠腔的SS可能来自两个独立的细胞群[5]。本组结果显示,妊娠第5天和第12天胃液内SS水平升高,并且妊娠期间血中SS水平也升高[6],表明妊娠第5天和第12天释放入腔和释放入血的SS均增多,故D细胞染色减弱,细胞数减少,所以妊娠第5天和第12天D细胞深度指数、体密度、数密度和面数密度均呈下降的结果,而妊娠第19天胃液内SS含量减少(但无统计学意义),说明此时释放入血SS增多,释放入腔SS减少,或许还伴随胃幽门部SS合成增加,才使妊娠第19天D细胞深度指数、体密度、数密度和面数密度均显著升高。这种现象是因为妊娠晚期胃酸分泌最多[7],反馈促进胃幽门部D细胞合成和释放SS增加,但释放入腔SS反而减少,可能是由于妊娠晚期来自胎盘胃抑多肽明显增多,参与胃酸分泌平衡调节[8],从而减弱胃酸对释放入腔的D细胞群的分泌刺激。

, http://www.100md.com     笔者以往的研究表明,哺乳期血中SS水平明显升高[6],本实验结果显示,哺乳期胃液内SS含量增加,从而说明该时期释放入血和释放入腔的SS均增加。SS可抑制胃泌素、胃酸和胃蛋白酶的分泌[9],哺乳期间胃粘膜DNA、RNA和蛋白质含量增加,胃泌素、胃酸和胃蛋白酶分泌增多,食物摄入增加[10,11],反馈促进SS分泌释放,所以细胞内的SS含量减少,以至不能被免疫细胞化学方法所显示,故出现哺乳第7天时,D细胞深度指数、体密度、数密度和面数密度均显著减少。然而,哺乳第20天,D细胞深度指数反而上升,体密度、数密度和面数密度变化不明显,笔者认为,哺乳第20天,除了释放入血和释放入腔的SS均增多外,同时伴随D细胞合成增加,其部分原因在于哺乳晚期母体食物摄入明显增加[10,11],至于其他原因有待进一步研究。

    基金项目:福建省卫生厅科研基金资助项目(9302)

    作者简介:王世鄂,男,1969年2月生,讲师,医学硕士.
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    参考文献:

    [1]Mcintosh CHS.Gastrointestinal somatostatin:distribution,secretion and physiological significance[J].Life Sci,1985;37:2043

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    [3]Reichlin S.Somatostatin[J].N Eng J Med,1983;309:1495

    [4]Lucey MR.Endogenous somatostatin and gut[J].Gut,1986;27:457

    [5]Alino SF,Garcia D,Uvnas-Moberg K.On the interaction between intragastric pH and electrical vagal stimulation in causing gastric acid secretion and intraluminal release of gastrin and somatostatin in anesthetized rats[J].Acta Physiol Scand,1983;117:491
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    [6]王世鄂,陈奕权,周瑞祥.妊娠期和哺乳期大鼠血中生长抑素变化的放射免疫分析[J].福建医科大学学报,1997;31:163

    [7]Furukawa O,Takeuchi K,Nishiwaki H,et al.Pathogenesis of digitoxin-induced duodenal ulcers in pregnant rats:roles of gastric acid and duodenal alkaline secretion[J].Dig Dis Sci,1988;33:889

    [8]Chen TS,Yen GH,Pu HF,et al.Gastric inhibitory polypeptide and gastric acid secretion in pregnant rats[J].Placenta,1995;16:85

    [9]Hakanson R.Activation and proliferation of gastric endocrine cells.In:Falkmer S,Sundler F.Evolution and tumor pathology of the neuroendocrine system[M].Amsterdam:Elsevier,1984:371~398
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    [10]Takeuchi K,Johnson LR.The role of food intake on gastric mucosal growth and gastric receptors during pregnancy and lactation[J].Proc Soc Exp Biol Med,1987;186:198

    [11]Takeuchi K,Okabe S.Factors related to gastric hypersecretion during pregnancy and lactation in rats[J].Dig Dis Sci,1984;29:248

    收稿日期:1999-10-22, 百拇医药