胆结石患者血清结合胆汁酸测定的临床研究
作者：徐雷鸣 宗春华 张敏红 桑玉尔 王秀玲 刘栅林 姚诗凯 施冬云
单位：徐雷鸣(200092 上海第二医科大学附属新华医院消化内科)；宗春华(200092 上海第二医科大学附属新华医院消化内科)；张敏红(200092 上海第二医科大学附属新华医院消化内科)；桑玉尔(200092 上海第二医科大学附属新华医院消化内科)；王秀玲(200092 上海第二医科大学附属新华医院消化内科)；刘栅林(上海第二医科大学测试中心)；姚诗凯(上海第二医科大学测试中心)；施冬云(上海第二医科大学测试中心)
关键词：胆结石；胆汁酸；高效液相色谱法
临床内科杂志000114
摘 要：目的：探讨血清结合胆汁酸对于胆结石的治疗及早期预防的价值。方法：应用高效液相色谱法(HPLC)，定量测定20例胆结石病人和15例正常对照者血清中七种结合胆汁酸含量。结果：胆结石组血清总结合胆汁酸量及GCA、TCA、GDCA、TDCA、TCDCA量均较对照组高(P<0.05～0.01)。而且CA/CDCA比值及DCA%也显著高于正常对照组(P<0.05)。结论：胆结石的形成与胆汁酸代谢紊乱密切相关，CA/CDCA比值及DCA%升高，可作为胆结石形成的危险信号。
, http://www.100md.com
分类号：R657.4+2 文献标识码：A
文章编号：1001-9057(2000)01-0034-02
Clinic study of serum conjugated bile acid in patient with gallstone
XU Leiming,ZONG Chunhua,ZHANG Minghong,et al.
(Department of Digestion,Xinhua Hospital,Shanghai Second Medlical University,Shanghai,200092，China.)
Abstract：Objective：To study the value of serum conjugated bile acid on therapy and early prevention of patient with gallstone.Method：Seven kinds of serum conjugated bile acid in 20 patients with gallstone and 15 normal controls were measured by HPLC.Results：The levels of serum conjugated bile acid and GCA,TCA,GDCA,TDCA,TCDCA in patients were significantly higher than those in controls (P<0.05～0.01).The ratio of CA/CDCA and percentage of DCA were increased sharply (P<0.05)。Conclusion：The formation of gallstone was related to alteration of bile acid matabolism.lncreasing of CA/CDCA and DCA% may be dangerous signals of gallstone.
, 百拇医药
Key words：Gallstone；Bile acid；HPLC
随着生活水平的提高及饮食习惯的改变，目前胆石症已成为一种常见病。有资料表明，胆结石的发病率呈上升趋势。胆汁酸代谢紊乱与胆结石的形成有密切关系，我们应用反相高效液相色谱法检测血清结合胆汁酸，了解胆结石的成因，预测胆汁成份，为临床预防胆结石及溶石治疗提供依据。
对象与方法
一、对象：(1)对照组：健康体检者15例，排除肝胆肠及其他器质性疾病。男性6例，女性9例；年龄51岁～74岁，平均年龄(62.53±6.90)岁。(2)胆结石组：B超示胆囊结石患者20例，排除肝胆肠及其他器质性疾病。男性7例，女性13例；年龄35岁～76岁，平均年龄(57.90±12.83)岁。
二、方法：清晨空腹抽血3ml，分离血清。
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(1)作出标准色谱图，出峰顺序依此为：TCA-TCDCA-TDCA-TLCA-GCA-GCDCA-GDCA。(2)标本预处理。(3)高效液相色谱法进样检测。
三、数据处理用外标法计算。统计学处理用均数±标准差(
±s)表示，结果用t检验。
结 果
血清总结合胆汁酸含量及GCA、TCA、GDCA、TDCA、TCDCA含量检测结果见附表。胆结石组均较正常对照组高(P<0.05～0.01)，而TCDCA、GCDCA、TLCA、G/T值与正常对照比较无显著性差异(P>0.05)，CA/CDCA比值及DCA%也显著高于对照组(P<0.05)。
附表 两组血清总结合胆汁酸含量及七种结合胆汁酸含量结果比较(±s) 组 别
, 百拇医药
GCA
GCDCA
GDCA
TCA
TCDCA
TDCA
对照组(15例)
1.49±0.69
2.02±0.92
0.75±0.34
1.29±0.48
2.51±0.59
, 百拇医药
1.17±0.48
胆结石组(20例)
2.80±2.08*
2.29±1.64
2.69±2.37**
3.71±3.27**
3.93±2.69
2.82±1.97**
组 别
TLCA
TOTAGL
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G/T
CA/CDCA
DCA%
对照组(15例)
0.60±0.21
9.91±1.38
0.83±0.30
0.62±0.24
18.58± 5.66
胆结石组(20例)
0.72±1.01
18.96±9.90**
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0.77±0.53
1.65±1.76*
26.66±10.94*
注：G/T为(GCA+GCDCA+GDCA)/(TCA+TCDCA+TDCA+TLCA)；CA/CDCA为(GCA+TCA)/(GCDCA+TCDCA)；DCA%为(GDCA+TDCA)/TOTAL×100%。与对照组比较 *P<0.05，**P<0.01。讨 论
胆汁酸是胆汁的主要成分，在人体中主要有胆酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、石胆酸组成。而大部分胆汁酸通过肽键与甘氨酸或牛磺酸结合成甘氨胆酸(G)或牛磺胆酸(T)。胆汁酸参与微胶粒的形成，从而使不溶于水的胆固醇和非结合胆红素溶于胆汁，各种原因引起的胆汁中胆汁酸含量下降，使胆固醇和胆红素的溶解度降低，使胆固醇结晶和非结合胆红素颗粒在成核因子共同作用下形成胆固醇结石和胆红素结石。
, http://www.100md.com
胆汁酸由肝细胞通过主动转运分泌入胆汁，进入小肠后95%～98%的胆汁酸在回肠末段重吸收，经门静脉返回肝脏，形成胆汁酸的肠肝循环。经门静脉回流的胆汁酸80%以上被肝细胞的窦膜有效摄取，仅少量未被摄取胆汁酸进入外周的血液循环。外周血的结合胆汁酸能反映肠肝循环的动态平衡，并且血清和胆汁中的胆汁酸呈相对应的关系。
胆结石患者由于肝脏胆汁酸合成酶7α-羟化酶活性降低，胆汁酸的合成减少，使得胆汁酸池体积缩小。此外，胆囊内的胆汁淤滞，胆囊的形态和功能发生变化，胆囊将胆汁中的胆汁酸吸收入血。而胆汁酸池体积大小与胆汁酸的循环率呈负相关，循环率增加，使胆汁酸 的丢失增多，从而更降低了胆汁酸池的体积，易于形成胆结石。
本研究发现，胆结石组血清七种结合胆汁酸总量显著增高(P<0.01)。说明胆结石患者存在着明显的胆汁酸池体积缩小，从而使胆固醇、磷脂、胆汁酸三者的比例失调，胆汁胆固醇过饱和、析出，形成胆结石。此外，胆结石组的GCA、TCA、GDCA、TDCA、TCDCA量均较对照组高。而TCDCA、GCDCA、TLCA与对照组比较无显著性差异。显示胆结石患者还存在着胆汁酸成份的改变。结合CDCA量在总量中比例明显下降，致使CA/CDCA比例升高，而CDCA能抑制胆固醇合成限速酶(HMG-CoA)的活性，使胆固醇合成减少；反之，则增加胆汁的成石性。
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也有研究更重视DCA的成石性，它的亲水性比CD和CACA更弱，无论是5小时的短期替代或3周～4周的长期口服，能引起更多的胆固醇分泌。大样本相关分析证实，DCA的相对浓度与胆固醇饱和指数(CSI)呈正相关，CDCA与CSI呈负相关[4]。本研究发现GDCA、TDCA值较对照组显著增高(P<0.01)，DCA%较对照组显著增高(P<0.05)。结合DCA增多可引起肝脏分泌过饱和胆固醇胆汁，主要是由于它的疏水因素以及DCA比其它胆汁酸有更强的极性，导致胆固醇从小管滤出；另一方面，DCA可抑制CDCA的合成以及替代CDCA的吸收，使CDCA量下降。有研究表明，结合DCA能抑制胆汁酸的合成，主要是抑制胆汁酸合成酶7α-羟化酶活性[5]。因此，结合DCA通过抑制胆汁酸的合成，使得胆汁酸池体积缩小，影响CSI，作用结石的成核过程，促进粘蛋白分泌增加和使胆囊运动过缓，使胆结石易于形成。
通过测定血清结合胆汁酸浓度了解胆结石时胆汁酸代谢的变化，而血清结合DCA浓度增高是胆汁成石性的表现，是胆石形成的危险信号。此外，通过快速、简便的测定血清结合胆汁酸浓度，可用于溶石治疗的生化监测，为治疗期间的用药剂量及疗效提供依据。测定血清结合胆汁酸对于胆结石的治疗及早期预防有临床应用价值。
, http://www.100md.com
参考文献：
[1] Sealic S,Nilsell k,Barbara L,et al.HPLC Assay of Conjugated Bile Acids in Human Fluids Using on-Line Sample Pretreatment on a Standard Isocratic Chromatograph.Clin Chim Acta,1994,224(2)∶181-188.
[2] Vescina MC,Dial EJ,Romero JJ,et al.Evalution of Faecal Bile Acid Profiles by HPLC after Using Disposable Solid-phase Columns.J Pharm Biomed Anal,1993,11(11-12)∶1331-1339.
[3] Roda A,Laokso M,Suhoren M,et al.HPLC Study of the Impurities Present in Different Ursodeoxycholic Acid Preparations:Comparative Evaluation of Four Detections.J Pharm Biomed Anal,1993,11(8)∶751-780.
, 百拇医药
[4] Donald M.1992 Aspen Bile Acid/Cholesterol/Lipoprotein Conference.Report of a Conference.J Lipid Res,1993,34(5)∶680-682.
[5] GuoRong Xu,Gerald Salen.Sauah shefer,et al.Different Feedback Regulation of Hepatic Cholesterol and Bile Acid Synthesis By Glycodeoxycholic Acid in Rabbits.Gastroenterology,1993,105(4)∶1092-1099.
收稿日期：1999-07-02
修回日期：1999-09-06, 百拇医药
单位：徐雷鸣(200092 上海第二医科大学附属新华医院消化内科)；宗春华(200092 上海第二医科大学附属新华医院消化内科)；张敏红(200092 上海第二医科大学附属新华医院消化内科)；桑玉尔(200092 上海第二医科大学附属新华医院消化内科)；王秀玲(200092 上海第二医科大学附属新华医院消化内科)；刘栅林(上海第二医科大学测试中心)；姚诗凯(上海第二医科大学测试中心)；施冬云(上海第二医科大学测试中心)
关键词：胆结石；胆汁酸；高效液相色谱法
临床内科杂志000114
摘 要：目的：探讨血清结合胆汁酸对于胆结石的治疗及早期预防的价值。方法：应用高效液相色谱法(HPLC)，定量测定20例胆结石病人和15例正常对照者血清中七种结合胆汁酸含量。结果：胆结石组血清总结合胆汁酸量及GCA、TCA、GDCA、TDCA、TCDCA量均较对照组高(P<0.05～0.01)。而且CA/CDCA比值及DCA%也显著高于正常对照组(P<0.05)。结论：胆结石的形成与胆汁酸代谢紊乱密切相关，CA/CDCA比值及DCA%升高，可作为胆结石形成的危险信号。
, http://www.100md.com
分类号：R657.4+2 文献标识码：A
文章编号：1001-9057(2000)01-0034-02
Clinic study of serum conjugated bile acid in patient with gallstone
XU Leiming,ZONG Chunhua,ZHANG Minghong,et al.
(Department of Digestion,Xinhua Hospital,Shanghai Second Medlical University,Shanghai,200092，China.)
Abstract：Objective：To study the value of serum conjugated bile acid on therapy and early prevention of patient with gallstone.Method：Seven kinds of serum conjugated bile acid in 20 patients with gallstone and 15 normal controls were measured by HPLC.Results：The levels of serum conjugated bile acid and GCA,TCA,GDCA,TDCA,TCDCA in patients were significantly higher than those in controls (P<0.05～0.01).The ratio of CA/CDCA and percentage of DCA were increased sharply (P<0.05)。Conclusion：The formation of gallstone was related to alteration of bile acid matabolism.lncreasing of CA/CDCA and DCA% may be dangerous signals of gallstone.
, 百拇医药
Key words：Gallstone；Bile acid；HPLC
随着生活水平的提高及饮食习惯的改变，目前胆石症已成为一种常见病。有资料表明，胆结石的发病率呈上升趋势。胆汁酸代谢紊乱与胆结石的形成有密切关系，我们应用反相高效液相色谱法检测血清结合胆汁酸，了解胆结石的成因，预测胆汁成份，为临床预防胆结石及溶石治疗提供依据。
对象与方法
一、对象：(1)对照组：健康体检者15例，排除肝胆肠及其他器质性疾病。男性6例，女性9例；年龄51岁～74岁，平均年龄(62.53±6.90)岁。(2)胆结石组：B超示胆囊结石患者20例，排除肝胆肠及其他器质性疾病。男性7例，女性13例；年龄35岁～76岁，平均年龄(57.90±12.83)岁。
二、方法：清晨空腹抽血3ml，分离血清。
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(1)作出标准色谱图，出峰顺序依此为：TCA-TCDCA-TDCA-TLCA-GCA-GCDCA-GDCA。(2)标本预处理。(3)高效液相色谱法进样检测。
三、数据处理用外标法计算。统计学处理用均数±标准差(
±s)表示，结果用t检验。结 果
血清总结合胆汁酸含量及GCA、TCA、GDCA、TDCA、TCDCA含量检测结果见附表。胆结石组均较正常对照组高(P<0.05～0.01)，而TCDCA、GCDCA、TLCA、G/T值与正常对照比较无显著性差异(P>0.05)，CA/CDCA比值及DCA%也显著高于对照组(P<0.05)。
附表 两组血清总结合胆汁酸含量及七种结合胆汁酸含量结果比较(
±s) 组 别, 百拇医药
GCA
GCDCA
GDCA
TCA
TCDCA
TDCA
对照组(15例)
1.49±0.69
2.02±0.92
0.75±0.34
1.29±0.48
2.51±0.59
, 百拇医药
1.17±0.48
胆结石组(20例)
2.80±2.08*
2.29±1.64
2.69±2.37**
3.71±3.27**
3.93±2.69
2.82±1.97**
组 别
TLCA
TOTAGL
, http://www.100md.com
G/T
CA/CDCA
DCA%
对照组(15例)
0.60±0.21
9.91±1.38
0.83±0.30
0.62±0.24
18.58± 5.66
胆结石组(20例)
0.72±1.01
18.96±9.90**
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0.77±0.53
1.65±1.76*
26.66±10.94*
注：G/T为(GCA+GCDCA+GDCA)/(TCA+TCDCA+TDCA+TLCA)；CA/CDCA为(GCA+TCA)/(GCDCA+TCDCA)；DCA%为(GDCA+TDCA)/TOTAL×100%。与对照组比较 *P<0.05，**P<0.01。讨 论
胆汁酸是胆汁的主要成分，在人体中主要有胆酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、石胆酸组成。而大部分胆汁酸通过肽键与甘氨酸或牛磺酸结合成甘氨胆酸(G)或牛磺胆酸(T)。胆汁酸参与微胶粒的形成，从而使不溶于水的胆固醇和非结合胆红素溶于胆汁，各种原因引起的胆汁中胆汁酸含量下降，使胆固醇和胆红素的溶解度降低，使胆固醇结晶和非结合胆红素颗粒在成核因子共同作用下形成胆固醇结石和胆红素结石。
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胆汁酸由肝细胞通过主动转运分泌入胆汁，进入小肠后95%～98%的胆汁酸在回肠末段重吸收，经门静脉返回肝脏，形成胆汁酸的肠肝循环。经门静脉回流的胆汁酸80%以上被肝细胞的窦膜有效摄取，仅少量未被摄取胆汁酸进入外周的血液循环。外周血的结合胆汁酸能反映肠肝循环的动态平衡，并且血清和胆汁中的胆汁酸呈相对应的关系。
胆结石患者由于肝脏胆汁酸合成酶7α-羟化酶活性降低，胆汁酸的合成减少，使得胆汁酸池体积缩小。此外，胆囊内的胆汁淤滞，胆囊的形态和功能发生变化，胆囊将胆汁中的胆汁酸吸收入血。而胆汁酸池体积大小与胆汁酸的循环率呈负相关，循环率增加，使胆汁酸 的丢失增多，从而更降低了胆汁酸池的体积，易于形成胆结石。
本研究发现，胆结石组血清七种结合胆汁酸总量显著增高(P<0.01)。说明胆结石患者存在着明显的胆汁酸池体积缩小，从而使胆固醇、磷脂、胆汁酸三者的比例失调，胆汁胆固醇过饱和、析出，形成胆结石。此外，胆结石组的GCA、TCA、GDCA、TDCA、TCDCA量均较对照组高。而TCDCA、GCDCA、TLCA与对照组比较无显著性差异。显示胆结石患者还存在着胆汁酸成份的改变。结合CDCA量在总量中比例明显下降，致使CA/CDCA比例升高，而CDCA能抑制胆固醇合成限速酶(HMG-CoA)的活性，使胆固醇合成减少；反之，则增加胆汁的成石性。
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也有研究更重视DCA的成石性，它的亲水性比CD和CACA更弱，无论是5小时的短期替代或3周～4周的长期口服，能引起更多的胆固醇分泌。大样本相关分析证实，DCA的相对浓度与胆固醇饱和指数(CSI)呈正相关，CDCA与CSI呈负相关[4]。本研究发现GDCA、TDCA值较对照组显著增高(P<0.01)，DCA%较对照组显著增高(P<0.05)。结合DCA增多可引起肝脏分泌过饱和胆固醇胆汁，主要是由于它的疏水因素以及DCA比其它胆汁酸有更强的极性，导致胆固醇从小管滤出；另一方面，DCA可抑制CDCA的合成以及替代CDCA的吸收，使CDCA量下降。有研究表明，结合DCA能抑制胆汁酸的合成，主要是抑制胆汁酸合成酶7α-羟化酶活性[5]。因此，结合DCA通过抑制胆汁酸的合成，使得胆汁酸池体积缩小，影响CSI，作用结石的成核过程，促进粘蛋白分泌增加和使胆囊运动过缓，使胆结石易于形成。
通过测定血清结合胆汁酸浓度了解胆结石时胆汁酸代谢的变化，而血清结合DCA浓度增高是胆汁成石性的表现，是胆石形成的危险信号。此外，通过快速、简便的测定血清结合胆汁酸浓度，可用于溶石治疗的生化监测，为治疗期间的用药剂量及疗效提供依据。测定血清结合胆汁酸对于胆结石的治疗及早期预防有临床应用价值。
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参考文献：
[1] Sealic S,Nilsell k,Barbara L,et al.HPLC Assay of Conjugated Bile Acids in Human Fluids Using on-Line Sample Pretreatment on a Standard Isocratic Chromatograph.Clin Chim Acta,1994,224(2)∶181-188.
[2] Vescina MC,Dial EJ,Romero JJ,et al.Evalution of Faecal Bile Acid Profiles by HPLC after Using Disposable Solid-phase Columns.J Pharm Biomed Anal,1993,11(11-12)∶1331-1339.
[3] Roda A,Laokso M,Suhoren M,et al.HPLC Study of the Impurities Present in Different Ursodeoxycholic Acid Preparations:Comparative Evaluation of Four Detections.J Pharm Biomed Anal,1993,11(8)∶751-780.
, 百拇医药
[4] Donald M.1992 Aspen Bile Acid/Cholesterol/Lipoprotein Conference.Report of a Conference.J Lipid Res,1993,34(5)∶680-682.
[5] GuoRong Xu,Gerald Salen.Sauah shefer,et al.Different Feedback Regulation of Hepatic Cholesterol and Bile Acid Synthesis By Glycodeoxycholic Acid in Rabbits.Gastroenterology,1993,105(4)∶1092-1099.
收稿日期：1999-07-02
修回日期：1999-09-06, 百拇医药