脑囊虫病患者细胞免疫功能变化的观察
作者：马爱义 杨国钢 马新
单位：马爱义(沈阳铁路局 吉林中心医院，吉林 吉林 132001)；杨国钢(吉林市 第二医院，吉林 吉林 132001)；马新(空军吉林医学高等专科学校，吉林 吉林 132001)
关键词：脑囊虫病；细胞免疫；T淋巴细胞亚群
铁道医学000119
[摘要]目的 探讨脑囊虫病患者细胞免疫功能的变化。 方法 对20例脑囊虫病患者进行 间接荧光抗体试验、淋巴细胞转化试验、IL-2的诱导及活性测定，并与20例健康者相对照 。 结果 脑囊虫病患者CD+3、CD+4T淋巴细胞数量显著降低 (P<0.01)；CD+4/CD+8值降低(P<0.05)；IL-2水平也低于对照组。结论 脑囊虫病患者细胞免疫功能有一定程度降低；治疗该病可使用 某些免疫增强剂。
, 百拇医药
[中图分类号]R532.33 [文献标识码]B
[文章编号]1001-0912(2000)01-0039-02
近年来，随着寄生虫免疫学研究的发展，寄生虫感染过程中的细 胞免疫应答受到人们的关注 [1，2]，认为细胞免疫应答在寄生虫感染引起的保护性免疫机制中起重要作用，其 对体内虫体的杀伤、消除有不可忽视的作用。我们通过单克隆抗体检测外周血T淋巴细胞亚群、3H TdR掺入法淋巴细胞转化试验及IL-2生物活性测定法对脑囊虫病患者的细胞 免疫功能进行观察，为探讨脑囊虫病感染的发病机制及细胞免疫调节机制提供依据。
1 对象与方法
1.1 研究对象
观察组为根据临床症状、囊虫结节活检、囊虫抗原皮内试验阳性及头部核磁共振检 查等确诊的脑囊虫患者20例，其中男12例，女8例；年龄6～44岁。对照组为20例健康体检 者。
, 百拇医药
1.2 实验方法
1.2.1 间接荧光抗体试验 取静脉血2 ml抗凝，常规法分离淋巴细胞，用磷酸缓冲盐水(P BS)调至3×106 ml-1。吸取100 μl细胞悬液加入4支试管中，一支作对照， 再 分别加入100 μl以PBS稀释(1∶20)的CD3+、CD4+、CD8+ McAb(武汉 生物制品所产品 )充分混匀后，置4 ℃ 60 min。对照管加PBS。用2%小牛血清PBS洗3遍，每次离心5 min(500 r.min-1)。弃上清，每管加200 μl荧光羊抗小鼠IgG抗体(1∶20稀 释，产地同前)作用60 min。洗3遍，条件同前。最后弃上清，加100 μl PBS混匀，滴片 加 盖片，荧光显微镜下镜检。结果判定：分别计数200个淋巴细胞中CD+3、CD+4、C D+8细胞数，计算各细胞阳性百分比。
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1.2.2 淋巴细胞转化试验 淋巴细胞悬液调至1×106 ml-1，将细胞悬液加入9 6孔细胞培养板中，每孔100 μl，加6孔。前3孔加植物血凝素(PHA)100 μl，后3 孔为空白对照，置37 ℃ CO2培养箱中培养56 h后加3H TdR 0.5 μCi(中科院原子 能研 究所产品)，继续培养16 h，用多头细胞收集器收集细胞，滤纸片烘干后用液闪仪测定淋巴 细胞掺入的每分钟计数(cpm)值。
1.2.3 IL-2的诱导及活性测定 淋巴细胞悬液浓度为1×106 ml-1，将细胞悬 液加入24孔细胞培养板中，加PHA培养48 h，离心5 min(1 500 r.min-1),取 上清，所得样品置-40 ℃保存待测。靶细胞制备C57BL/63小鼠胸腺制成浓度为2×1 06 ml-1细胞悬液。加入PHA 5 μg.ml-1，37 ℃培养24 h，调 细胞至2×106 ml-1，即为靶细胞。待测样品倍比稀释加入96孔板，每板100 μl，加靶细胞100 μl，培养56 h并加3H TdR 0.5 μCi。收集细胞，测定靶细胞掺 入的cpm值。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 脑囊虫病患者外周血T细胞亚群检测 见表1。对照组CD+3、CD+ 4、CD+8的统计结果与以往文献报道相似[2]。
表1 两组测定者外周血T细胞亚群变化(
±s) 组别
CD+3/%
CD +4/%
CD+8/%
, 百拇医药
CD+4/CD+8
观察组
51.23±6.26
30.33±5.23
24.25±3.86
1.28±0.26
对照组
55.66±6.77
33.89±3.68
24.87±2.56
1.32±0.19
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t值
4.76
3.97
0.73
2.55
P值
<0.01
<0.01
>0.05
<0.05
观察组与对照组相比，CD+3、CD+4T淋巴细胞百分率减少，两组差异 有极显著 意义(P<0.01)；CD+4/CD+8值降低，两组差异有显著意义(P<0.05 )。
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2.2 脑囊虫病患者淋巴细胞转化测定结果 患者淋 巴细胞3H TdR掺入 值为(6 894±985 )cpm，低于对照组 (10 975±1 142)cpm，差异有极显著意义(t=4.87，P<0.01 )。
2.3 脑囊虫病患者IL-2诱导及活性测定结果
观察组靶细胞3H TdR的掺入值为(4 037±884)cpm；对照组为(7 422±507)cpm，两组 比较差异有极显著意义(t=5.12,P<0.01)
3 讨 论
测定机体的T细胞数量和免疫功能对于了解体内的免疫状态有重要意义。T细胞在 机体免 疫系统中，既是效应细胞，又是调节细胞。正常免疫应答的形成有赖于各种免疫细胞，特别 是依赖于T细胞亚群之间的相互促进或相互制约，使之即能清除抗原性异物,又不损伤自身 组织。辅助T细胞和抑制T细胞是免疫调节的中心枢纽[3]。
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近年来人们发现很多感染性疾病与免疫机制有关。感染囊虫后，机体虽可产生相应特异性 抗体，在对虫体的杀伤清除等起一定的作用，但通过T细胞亚群的研究表明,在囊虫感染过 程中辅助T细胞减少，而且有抑制功能的T细胞增多，加之患者淋巴细胞转化试验结果及IL- 2水平低于对照组，说明其细胞免疫功能有一定程度的降低。影响机体免疫活性细胞有效地发挥完全清除抗原异物的作用。
本观察结果提示，在脑囊虫病治疗过程中，除了常规使用驱虫药物外，还可有目的地利用某 些免疫增强剂，消除免疫抑制状态，定向调控免疫反应，促进疾病的恢复。
作者简介：马爱义(1952年生)，女，河北乐亭人，沈阳 铁路局吉林中心医院副主任医师。
参考文献：
[1] 赵灵芝，山长武，于江.脑囊虫病患者外周血T淋巴细胞亚群的研 究[J].中国寄生虫病防治杂志,1991,4:214-6.
[2] 武华，许绶泰.日本血吸虫保护性免疫机制的研究-细胞免疫应答[J].中 国寄生虫学与寄生虫病杂志，1993，11(1):41-4.
[3] 郑武飞.医学免疫学[M].北京：人民卫生出版社，1989.84-6.
收稿日期：1999-07-07, http://www.100md.com
单位：马爱义(沈阳铁路局 吉林中心医院，吉林 吉林 132001)；杨国钢(吉林市 第二医院，吉林 吉林 132001)；马新(空军吉林医学高等专科学校，吉林 吉林 132001)
关键词：脑囊虫病；细胞免疫；T淋巴细胞亚群
铁道医学000119
[摘要]目的 探讨脑囊虫病患者细胞免疫功能的变化。 方法 对20例脑囊虫病患者进行 间接荧光抗体试验、淋巴细胞转化试验、IL-2的诱导及活性测定，并与20例健康者相对照 。 结果 脑囊虫病患者CD+3、CD+4T淋巴细胞数量显著降低 (P<0.01)；CD+4/CD+8值降低(P<0.05)；IL-2水平也低于对照组。结论 脑囊虫病患者细胞免疫功能有一定程度降低；治疗该病可使用 某些免疫增强剂。
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[中图分类号]R532.33 [文献标识码]B
[文章编号]1001-0912(2000)01-0039-02
近年来，随着寄生虫免疫学研究的发展，寄生虫感染过程中的细 胞免疫应答受到人们的关注 [1，2]，认为细胞免疫应答在寄生虫感染引起的保护性免疫机制中起重要作用，其 对体内虫体的杀伤、消除有不可忽视的作用。我们通过单克隆抗体检测外周血T淋巴细胞亚群、3H TdR掺入法淋巴细胞转化试验及IL-2生物活性测定法对脑囊虫病患者的细胞 免疫功能进行观察，为探讨脑囊虫病感染的发病机制及细胞免疫调节机制提供依据。
1 对象与方法
1.1 研究对象
观察组为根据临床症状、囊虫结节活检、囊虫抗原皮内试验阳性及头部核磁共振检 查等确诊的脑囊虫患者20例，其中男12例，女8例；年龄6～44岁。对照组为20例健康体检 者。
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1.2 实验方法
1.2.1 间接荧光抗体试验 取静脉血2 ml抗凝，常规法分离淋巴细胞，用磷酸缓冲盐水(P BS)调至3×106 ml-1。吸取100 μl细胞悬液加入4支试管中，一支作对照， 再 分别加入100 μl以PBS稀释(1∶20)的CD3+、CD4+、CD8+ McAb(武汉 生物制品所产品 )充分混匀后，置4 ℃ 60 min。对照管加PBS。用2%小牛血清PBS洗3遍，每次离心5 min(500 r.min-1)。弃上清，每管加200 μl荧光羊抗小鼠IgG抗体(1∶20稀 释，产地同前)作用60 min。洗3遍，条件同前。最后弃上清，加100 μl PBS混匀，滴片 加 盖片，荧光显微镜下镜检。结果判定：分别计数200个淋巴细胞中CD+3、CD+4、C D+8细胞数，计算各细胞阳性百分比。
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1.2.2 淋巴细胞转化试验 淋巴细胞悬液调至1×106 ml-1，将细胞悬液加入9 6孔细胞培养板中，每孔100 μl，加6孔。前3孔加植物血凝素(PHA)100 μl，后3 孔为空白对照，置37 ℃ CO2培养箱中培养56 h后加3H TdR 0.5 μCi(中科院原子 能研 究所产品)，继续培养16 h，用多头细胞收集器收集细胞，滤纸片烘干后用液闪仪测定淋巴 细胞掺入的每分钟计数(cpm)值。
1.2.3 IL-2的诱导及活性测定 淋巴细胞悬液浓度为1×106 ml-1，将细胞悬 液加入24孔细胞培养板中，加PHA培养48 h，离心5 min(1 500 r.min-1),取 上清，所得样品置-40 ℃保存待测。靶细胞制备C57BL/63小鼠胸腺制成浓度为2×1 06 ml-1细胞悬液。加入PHA 5 μg.ml-1，37 ℃培养24 h，调 细胞至2×106 ml-1，即为靶细胞。待测样品倍比稀释加入96孔板，每板100 μl，加靶细胞100 μl，培养56 h并加3H TdR 0.5 μCi。收集细胞，测定靶细胞掺 入的cpm值。
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2 结 果
2.1 脑囊虫病患者外周血T细胞亚群检测 见表1。对照组CD+3、CD+ 4、CD+8的统计结果与以往文献报道相似[2]。
表1 两组测定者外周血T细胞亚群变化(
±s) 组别CD+3/%
CD +4/%
CD+8/%
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CD+4/CD+8
观察组
51.23±6.26
30.33±5.23
24.25±3.86
1.28±0.26
对照组
55.66±6.77
33.89±3.68
24.87±2.56
1.32±0.19
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t值
4.76
3.97
0.73
2.55
P值
<0.01
<0.01
>0.05
<0.05
观察组与对照组相比，CD+3、CD+4T淋巴细胞百分率减少，两组差异 有极显著 意义(P<0.01)；CD+4/CD+8值降低，两组差异有显著意义(P<0.05 )。
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2.2 脑囊虫病患者淋巴细胞转化测定结果 患者淋 巴细胞3H TdR掺入 值为(6 894±985 )cpm，低于对照组 (10 975±1 142)cpm，差异有极显著意义(t=4.87，P<0.01 )。
2.3 脑囊虫病患者IL-2诱导及活性测定结果
观察组靶细胞3H TdR的掺入值为(4 037±884)cpm；对照组为(7 422±507)cpm，两组 比较差异有极显著意义(t=5.12,P<0.01)
3 讨 论
测定机体的T细胞数量和免疫功能对于了解体内的免疫状态有重要意义。T细胞在 机体免 疫系统中，既是效应细胞，又是调节细胞。正常免疫应答的形成有赖于各种免疫细胞，特别 是依赖于T细胞亚群之间的相互促进或相互制约，使之即能清除抗原性异物,又不损伤自身 组织。辅助T细胞和抑制T细胞是免疫调节的中心枢纽[3]。
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近年来人们发现很多感染性疾病与免疫机制有关。感染囊虫后，机体虽可产生相应特异性 抗体，在对虫体的杀伤清除等起一定的作用，但通过T细胞亚群的研究表明,在囊虫感染过 程中辅助T细胞减少，而且有抑制功能的T细胞增多，加之患者淋巴细胞转化试验结果及IL- 2水平低于对照组，说明其细胞免疫功能有一定程度的降低。影响机体免疫活性细胞有效地发挥完全清除抗原异物的作用。
本观察结果提示，在脑囊虫病治疗过程中，除了常规使用驱虫药物外，还可有目的地利用某 些免疫增强剂，消除免疫抑制状态，定向调控免疫反应，促进疾病的恢复。
作者简介：马爱义(1952年生)，女，河北乐亭人，沈阳 铁路局吉林中心医院副主任医师。
参考文献：
[1] 赵灵芝，山长武，于江.脑囊虫病患者外周血T淋巴细胞亚群的研 究[J].中国寄生虫病防治杂志,1991,4:214-6.
[2] 武华，许绶泰.日本血吸虫保护性免疫机制的研究-细胞免疫应答[J].中 国寄生虫学与寄生虫病杂志，1993，11(1):41-4.
[3] 郑武飞.医学免疫学[M].北京：人民卫生出版社，1989.84-6.
收稿日期：1999-07-07, http://www.100md.com