前列腺癌组织中血管生成的免疫组织化学观察
作者：申永璋 林霞 项锋钢 申东亮
单位：申永璋(日照市人民 医院泌尿外科 山东省日照市276800)；林霞(日照市人民 医院泌尿外科 山东省日照市276800)；项锋钢(青岛大学医学院病理解剖学教研室)；申东亮(青岛大学医学院附属医院泌尿外科)
关键词：前列腺肿瘤；新生血管化；免疫组织化学
齐鲁医学杂志000101 [摘要] ①目的 探讨前列腺癌组织中血管生成 与肿瘤生物学行为之间的关系。②方法 应用免疫组织化学LSAB法 检测38例前列腺癌组织中微血管密度(MVD)。③结果 前列腺癌 组织中微血管形态不一，分布呈异质性；高分化癌组织中MVD明显低于低分化和未分化癌组 织(F=6.48，q=3.80,4.86，P<0.05,0.01)；发生转移的癌组织中MVD明显高于未 转移的癌组织(t=3.76，P<0.001)。④结论 血管生成在前 列腺癌侵袭和转移过程中起重要作用。
, 百拇医药
[中图分类号] R730. 23 [文献标识码] A [文章编号] 1008-0341(2000)01-0001-03
IMMUNOHISTOCHEMICAL STUDIES OF ANG IOGENESIS IN HUMAN PROSTATIC CANCER
SHEN Yongzhang, LIN Xia, XIANG Fengga ng, et al
Department of Urology, Rizhao People's Hospital, Rizhao, Shan dong 276800
[ABSTRACT] Objective To investigate the biological signif icance of tumor angiogenesis in human prostatic cancer. Methods Microvessel density (MVD) in 38 cases of invasive prostat ic cancer were detected using immunohistochemical techniques (LSAB). Results The morphology of tumor microvessel was obviously various . Microvessel density in highly differentiated prostatic cancer was significantl y lower than that in poorly differentiated and undifferentiated prostatic cancer , respectively(F=6.48, q=3.80, 4.86, P<0.05, 0.01). In carcinoma, with posit ive lymph node metastasis, microvessel density was significantly higher than th at in node-negative carcinoma (t=3.76,P<0.001). Conclusion The results suggest that angiogenesis assessed by MVD plays an important role in the invasion and metastasis of human prostatic cancer .
, 百拇医药
[KEY WORDS] prostatic neoplasms; neovascularization; immunohi stochemistry
近年来研究发现，血管生成与肿瘤的侵袭和转移关系密切[1～3]。1971年Folkman提 出，肿瘤是典型的血管依赖性病变，血管生成有利于肿瘤的生长、侵袭和转移[1] 。我们采用免疫组织化学LSAB法，检测前列腺癌组织中微血管密度(MVD)，以进一步探 讨肿瘤血管生成与前列腺癌侵袭和转移的关系，寻找一种可靠的前列腺癌预后指标。现报告 如下。
1 材料和方法
1.1 材料来源
收集我院及协作单位1988～1997年间经病理证实为前列腺癌的标本38例(病人平均年龄66.7 岁)。按分化程度分为高分化12例、低分化15例、未分化11例。有淋巴结情况记录者34例， 发生淋巴结转移者14例。
, 百拇医药
1.2 试剂来源
兔抗人Ⅷ因子相关抗原(F8-RAg)抗体及LSAB免疫组化试剂盒系DAKO公司 产品。
1.3 免疫组织化学染色
所有组织标本均常规经质量浓度为40g/L的中性甲醛溶液固定，逐级乙醇脱水，石蜡包埋 。将存档蜡块用Leica石蜡切片机作4μm连续切片，连切3张，1张切片行HE染色后病理复查 ，1张切片行免疫组织化学染色，1张切片空白对照。采用免疫组织化学LSAB法，参照试剂盒 说明书，以PBS 缓冲液代替Ⅰ抗作空白对照。
1.4 结果判断标准
1.4.1 微血管判断标准[4] 切片中染色呈棕黄色的单个内皮细胞或内皮 细胞簇，作为一个血管计数。不以红细胞的出现来确定是否是血管，也不以是否出现管腔来 计数血管；凡管腔大于8个红细胞大小，带有较厚肌层的血管均不计数。
, 百拇医药
1.4.2 微血管计数方法 参照Bosari等[4]和Folkman [2]的标准，在200倍视野下(0.723mm2)选择微血管量多的3个视野进行计数，每张 切片先后进行2次计数，得出6个数值，取其平均值为每个标本的MVD.
1.5 统计学处理
微血管密度结果以
±s表示，统计学处理采用方差分析或t检验。
2 结 果
2.1 前列腺癌组织中微血管(MV)的形态
光镜下，癌组织中MV分布于肿瘤生长活跃的间质中，其形态不一，结构粗糙，常有不规则狭 窄、扩张或扭曲。多数毛细血管扩张如窦，壁薄，仅一层内皮细胞，内皮细胞多幼稚，分化 差；还有许多毛细血管仅有极小或不显著的腔，呈不规则状、交叉状，极性紊乱。不同的肿 瘤区域微血管形态不同，分布呈异质性。
, 百拇医药
2.2 MVD与肿瘤分化程度及淋巴结转移的关系
38例前列腺癌组织中MVD为88.4±21.6.高分化癌组织中MVD明显低于低分化和未分化癌组织 (F=6.48，q=3.80,4.86，P<0.05,0.01)；低分化与未分化癌组织之间MVD差异无显著 性(q=1.41,P>0.05)。淋巴结转移(N1)组MVD明显高于无转移(N0)组，差异有 极显著性(t=3.76，P<0.001)。见表1.
表1 MVD与前列腺癌分化及转移的 关系(±s) 生物学特性
n
MVD
分化程度
, 百拇医药
高分化
12
73.9±20.6
低分化
15
92.1±19.5*
未分化
11
99.0±19.9*
N0组
20
77.5±18.2
, 百拇医药
N1组
14
102.2±19.8△
与高分化组比较，F=6.48，*q=3.80,4.86，P<0.05,0.01；与N0组比较，△ t=3.76，P<0.001
3 讨 论
Ⅷ因子相关抗原位于内皮细胞的Weibel-Palade小体上，是内皮细胞的标记抗原，应用血 管内皮细胞内该抗原的单克隆抗体进行免疫组化染色，可特异性地使微血管内皮着色。因此 ，可通过对检测内皮细胞上的Ⅷ因子相关抗原的表达来研究血管生成与肿瘤生物学行为、病 人预后之间的关系。
1945年Algire首次提出“肿瘤血管生成”这一概念。认为肿瘤血管生成是一包括血管内皮细 胞分裂增殖、迁移及细胞外基质降解的多步骤复杂的过程。在血管生成之前，肿瘤处于相对 静止的血管前期，即肿瘤生长休眠期，此期肿瘤生长缓慢，直径小于1～2mm，肿瘤细胞总数 也是极有限的，某些早期原位癌仅含有不足106个细胞。一旦肿瘤血管生成开始，肿瘤生 长即进入血管 期，此期肿瘤生长明显增快，新生的毛细血管可以从肿瘤外周长入肿瘤组织中，并相互吻合 形成外周血管网，再进一步分支进入肿瘤深部，为肿瘤细胞分裂增殖提供充足的氧和营养， 有利于肿瘤细胞侵袭[2,5]。侵袭和转移是连续的过程，由于新生成的血管结构不 完整，周 围缺乏足够基质，加之新形成的血管顶端分泌降解酶，降解肿瘤基质，从而为瘤细胞侵入提 供了条件，增加了肿瘤细胞进入血循环的机会。没有血管生成，肿瘤细胞很少能够脱落进入 血循环而发生转移。本文结果显示,前列腺癌组织中MVD与肿瘤分化程度有关，高分化癌组织 中MVD明显低于低分化和未分化癌组织；发生转移癌组织中MVD明显高于无转移的癌组织，结 果与Weidner等[6]报道相似。提示微血管密度在一定程度上反映了前列腺癌的恶 性程度，可 能成为评估前列腺癌浸润能力、自然转归及预后的指标之一。最近，Heimann等[7] 对乳癌术 后病人进行长期随访观察，发现MVD高的病人20年生存率明显低于MVD低的病人，MVD可作为 乳癌病人的一个可靠的、独立的预后指标。由于本研究对前列腺癌病人缺乏长 期随访观察，无法确定MVD与生存率之间的关系，因此有必要对其进行深入研究，以确定M VD对前列腺癌病人是否有预后意义。
, 百拇医药
近年来，国外学者对肿瘤血管生成抑制剂进行了广泛 深入的研究，认为在肿瘤中内皮细胞增生将作为治疗的靶，阻止血管生成可作为肿瘤治疗的 突破点[8]。目前已发现10余种血管生成抑制剂，在抗肿瘤治疗方面已取得了显 著的临床效果，其中较理想的血管生成抑制剂--TNP-470是烟曲霉素的类似物，具有强 力的抑制血管内皮细胞增殖和阻碍血管生成的作用，已进入Ⅰ期临床研究，主要用于治疗Ka posi肉瘤、转移性前列腺癌等实体肿瘤[9]。动物实验表明，应用血管生成抑制剂 治疗肿瘤很少有全身副作用，且血管内皮细胞对治疗不易产生耐药性，因此血管生成抑制剂 在抗肿瘤治疗中越来越受到人们的关注。
总之，肿瘤是典型的血管依赖性疾病，肿瘤生长、侵袭及转移均与肿瘤血管生成关系密切， 微血管密度可能对评估病人预后具有重要意义。
作者简介 申永璋，男，1 964年11月生，硕士，主治医师
, 百拇医药
参考文献
1，Folkman J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications[J]. N En g J Med, 1971 ,285:1182
2，Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis-depende nt[J]？ J Natl Cancer Inst, 1990,82:4
3，Weidner N. Intratumor microvessel density as a prognostic factor in c ancer[J]. Am J Pathol, 1995,147:9
4，Bosari S, Lee AKC, Delellis RA, et al. Microvessel quantitation and p rognosis in invasive breast carcinoma[J]. Hum Pathol, 1992,23:755
, http://www.100md.com
5，高 进. 瘤细胞侵袭和转移过程中各阶段的影响因素[A]. 见: 高进主编. 癌的侵袭与转移[M].北京医科大学中国协和医科大学联合出版 社, 1995.182
6，Weidner N, Carroll PR, Flax J, et al. Tumor angiogenesis correlates w ith metastasis in invasive prostate carcinoma[J]. Am J Pathol, 1993,143:4 01
7，Heimann R, Forguson D, Powers C, et al. Angiogenesis as a predictor o f long-term survival for patients with node-negative breast cancer[J]. J Natl Cancer Inst, 1996,88:1764
8，Folkman J, Ingber D. Inhibition of angiogenesis[J]. Sem Cancer B iol, 1992,3:89
9，Yamamoto T, Sudo K, Fujita T. Significant inhibition of endothelial c ell growth in tumor vasculature by an angiogenesis inhibitor, TNP-470(AGM-1470 )[J]. Anticancer Res, 1994,14:1
(1999-04-20收稿 1999-11-12修回), 百拇医药
单位：申永璋(日照市人民 医院泌尿外科 山东省日照市276800)；林霞(日照市人民 医院泌尿外科 山东省日照市276800)；项锋钢(青岛大学医学院病理解剖学教研室)；申东亮(青岛大学医学院附属医院泌尿外科)
关键词：前列腺肿瘤；新生血管化；免疫组织化学
齐鲁医学杂志000101 [摘要] ①目的 探讨前列腺癌组织中血管生成 与肿瘤生物学行为之间的关系。②方法 应用免疫组织化学LSAB法 检测38例前列腺癌组织中微血管密度(MVD)。③结果 前列腺癌 组织中微血管形态不一，分布呈异质性；高分化癌组织中MVD明显低于低分化和未分化癌组 织(F=6.48，q=3.80,4.86，P<0.05,0.01)；发生转移的癌组织中MVD明显高于未 转移的癌组织(t=3.76，P<0.001)。④结论 血管生成在前 列腺癌侵袭和转移过程中起重要作用。
, 百拇医药
[中图分类号] R730. 23 [文献标识码] A [文章编号] 1008-0341(2000)01-0001-03
IMMUNOHISTOCHEMICAL STUDIES OF ANG IOGENESIS IN HUMAN PROSTATIC CANCER
SHEN Yongzhang, LIN Xia, XIANG Fengga ng, et al
Department of Urology, Rizhao People's Hospital, Rizhao, Shan dong 276800
[ABSTRACT] Objective To investigate the biological signif icance of tumor angiogenesis in human prostatic cancer. Methods Microvessel density (MVD) in 38 cases of invasive prostat ic cancer were detected using immunohistochemical techniques (LSAB). Results The morphology of tumor microvessel was obviously various . Microvessel density in highly differentiated prostatic cancer was significantl y lower than that in poorly differentiated and undifferentiated prostatic cancer , respectively(F=6.48, q=3.80, 4.86, P<0.05, 0.01). In carcinoma, with posit ive lymph node metastasis, microvessel density was significantly higher than th at in node-negative carcinoma (t=3.76,P<0.001). Conclusion The results suggest that angiogenesis assessed by MVD plays an important role in the invasion and metastasis of human prostatic cancer .
, 百拇医药
[KEY WORDS] prostatic neoplasms; neovascularization; immunohi stochemistry
近年来研究发现，血管生成与肿瘤的侵袭和转移关系密切[1～3]。1971年Folkman提 出，肿瘤是典型的血管依赖性病变，血管生成有利于肿瘤的生长、侵袭和转移[1] 。我们采用免疫组织化学LSAB法，检测前列腺癌组织中微血管密度(MVD)，以进一步探 讨肿瘤血管生成与前列腺癌侵袭和转移的关系，寻找一种可靠的前列腺癌预后指标。现报告 如下。
1 材料和方法
1.1 材料来源
收集我院及协作单位1988～1997年间经病理证实为前列腺癌的标本38例(病人平均年龄66.7 岁)。按分化程度分为高分化12例、低分化15例、未分化11例。有淋巴结情况记录者34例， 发生淋巴结转移者14例。
, 百拇医药
1.2 试剂来源
兔抗人Ⅷ因子相关抗原(F8-RAg)抗体及LSAB免疫组化试剂盒系DAKO公司 产品。
1.3 免疫组织化学染色
所有组织标本均常规经质量浓度为40g/L的中性甲醛溶液固定，逐级乙醇脱水，石蜡包埋 。将存档蜡块用Leica石蜡切片机作4μm连续切片，连切3张，1张切片行HE染色后病理复查 ，1张切片行免疫组织化学染色，1张切片空白对照。采用免疫组织化学LSAB法，参照试剂盒 说明书，以PBS 缓冲液代替Ⅰ抗作空白对照。
1.4 结果判断标准
1.4.1 微血管判断标准[4] 切片中染色呈棕黄色的单个内皮细胞或内皮 细胞簇，作为一个血管计数。不以红细胞的出现来确定是否是血管，也不以是否出现管腔来 计数血管；凡管腔大于8个红细胞大小，带有较厚肌层的血管均不计数。
, 百拇医药
1.4.2 微血管计数方法 参照Bosari等[4]和Folkman [2]的标准，在200倍视野下(0.723mm2)选择微血管量多的3个视野进行计数，每张 切片先后进行2次计数，得出6个数值，取其平均值为每个标本的MVD.
1.5 统计学处理
微血管密度结果以
±s表示，统计学处理采用方差分析或t检验。2 结 果
2.1 前列腺癌组织中微血管(MV)的形态
光镜下，癌组织中MV分布于肿瘤生长活跃的间质中，其形态不一，结构粗糙，常有不规则狭 窄、扩张或扭曲。多数毛细血管扩张如窦，壁薄，仅一层内皮细胞，内皮细胞多幼稚，分化 差；还有许多毛细血管仅有极小或不显著的腔，呈不规则状、交叉状，极性紊乱。不同的肿 瘤区域微血管形态不同，分布呈异质性。
, 百拇医药
2.2 MVD与肿瘤分化程度及淋巴结转移的关系
38例前列腺癌组织中MVD为88.4±21.6.高分化癌组织中MVD明显低于低分化和未分化癌组织 (F=6.48，q=3.80,4.86，P<0.05,0.01)；低分化与未分化癌组织之间MVD差异无显著 性(q=1.41,P>0.05)。淋巴结转移(N1)组MVD明显高于无转移(N0)组，差异有 极显著性(t=3.76，P<0.001)。见表1.
表1 MVD与前列腺癌分化及转移的 关系(
±s) 生物学特性n
MVD
分化程度
, 百拇医药
高分化
12
73.9±20.6
低分化
15
92.1±19.5*
未分化
11
99.0±19.9*
N0组
20
77.5±18.2
, 百拇医药
N1组
14
102.2±19.8△
与高分化组比较，F=6.48，*q=3.80,4.86，P<0.05,0.01；与N0组比较，△ t=3.76，P<0.001
3 讨 论
Ⅷ因子相关抗原位于内皮细胞的Weibel-Palade小体上，是内皮细胞的标记抗原，应用血 管内皮细胞内该抗原的单克隆抗体进行免疫组化染色，可特异性地使微血管内皮着色。因此 ，可通过对检测内皮细胞上的Ⅷ因子相关抗原的表达来研究血管生成与肿瘤生物学行为、病 人预后之间的关系。
1945年Algire首次提出“肿瘤血管生成”这一概念。认为肿瘤血管生成是一包括血管内皮细 胞分裂增殖、迁移及细胞外基质降解的多步骤复杂的过程。在血管生成之前，肿瘤处于相对 静止的血管前期，即肿瘤生长休眠期，此期肿瘤生长缓慢，直径小于1～2mm，肿瘤细胞总数 也是极有限的，某些早期原位癌仅含有不足106个细胞。一旦肿瘤血管生成开始，肿瘤生 长即进入血管 期，此期肿瘤生长明显增快，新生的毛细血管可以从肿瘤外周长入肿瘤组织中，并相互吻合 形成外周血管网，再进一步分支进入肿瘤深部，为肿瘤细胞分裂增殖提供充足的氧和营养， 有利于肿瘤细胞侵袭[2,5]。侵袭和转移是连续的过程，由于新生成的血管结构不 完整，周 围缺乏足够基质，加之新形成的血管顶端分泌降解酶，降解肿瘤基质，从而为瘤细胞侵入提 供了条件，增加了肿瘤细胞进入血循环的机会。没有血管生成，肿瘤细胞很少能够脱落进入 血循环而发生转移。本文结果显示,前列腺癌组织中MVD与肿瘤分化程度有关，高分化癌组织 中MVD明显低于低分化和未分化癌组织；发生转移癌组织中MVD明显高于无转移的癌组织，结 果与Weidner等[6]报道相似。提示微血管密度在一定程度上反映了前列腺癌的恶 性程度，可 能成为评估前列腺癌浸润能力、自然转归及预后的指标之一。最近，Heimann等[7] 对乳癌术 后病人进行长期随访观察，发现MVD高的病人20年生存率明显低于MVD低的病人，MVD可作为 乳癌病人的一个可靠的、独立的预后指标。由于本研究对前列腺癌病人缺乏长 期随访观察，无法确定MVD与生存率之间的关系，因此有必要对其进行深入研究，以确定M VD对前列腺癌病人是否有预后意义。
, 百拇医药
近年来，国外学者对肿瘤血管生成抑制剂进行了广泛 深入的研究，认为在肿瘤中内皮细胞增生将作为治疗的靶，阻止血管生成可作为肿瘤治疗的 突破点[8]。目前已发现10余种血管生成抑制剂，在抗肿瘤治疗方面已取得了显 著的临床效果，其中较理想的血管生成抑制剂--TNP-470是烟曲霉素的类似物，具有强 力的抑制血管内皮细胞增殖和阻碍血管生成的作用，已进入Ⅰ期临床研究，主要用于治疗Ka posi肉瘤、转移性前列腺癌等实体肿瘤[9]。动物实验表明，应用血管生成抑制剂 治疗肿瘤很少有全身副作用，且血管内皮细胞对治疗不易产生耐药性，因此血管生成抑制剂 在抗肿瘤治疗中越来越受到人们的关注。
总之，肿瘤是典型的血管依赖性疾病，肿瘤生长、侵袭及转移均与肿瘤血管生成关系密切， 微血管密度可能对评估病人预后具有重要意义。
作者简介 申永璋，男，1 964年11月生，硕士，主治医师
, 百拇医药
参考文献
1，Folkman J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications[J]. N En g J Med, 1971 ,285:1182
2，Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis-depende nt[J]？ J Natl Cancer Inst, 1990,82:4
3，Weidner N. Intratumor microvessel density as a prognostic factor in c ancer[J]. Am J Pathol, 1995,147:9
4，Bosari S, Lee AKC, Delellis RA, et al. Microvessel quantitation and p rognosis in invasive breast carcinoma[J]. Hum Pathol, 1992,23:755
, http://www.100md.com
5，高 进. 瘤细胞侵袭和转移过程中各阶段的影响因素[A]. 见: 高进主编. 癌的侵袭与转移[M].北京医科大学中国协和医科大学联合出版 社, 1995.182
6，Weidner N, Carroll PR, Flax J, et al. Tumor angiogenesis correlates w ith metastasis in invasive prostate carcinoma[J]. Am J Pathol, 1993,143:4 01
7，Heimann R, Forguson D, Powers C, et al. Angiogenesis as a predictor o f long-term survival for patients with node-negative breast cancer[J]. J Natl Cancer Inst, 1996,88:1764
8，Folkman J, Ingber D. Inhibition of angiogenesis[J]. Sem Cancer B iol, 1992,3:89
9，Yamamoto T, Sudo K, Fujita T. Significant inhibition of endothelial c ell growth in tumor vasculature by an angiogenesis inhibitor, TNP-470(AGM-1470 )[J]. Anticancer Res, 1994,14:1
(1999-04-20收稿 1999-11-12修回), 百拇医药