手术前后皮肤组织KGFmRNA表达量的变化
作者：汪治中
单位：汪治中(长海医院皮肤科，上海)
关键词：角蛋白；成纤维细胞；生长因子；基因表达
中华医学美容杂志000105 摘 要：目的 探讨创伤后组织修复的机理。方法 在术中和术后24小时采集皮肤12组，抽提总RNA，用RFPCR法检测术前术后皮肤组织中KGF表达量的变化。结果 发现术后24小时皮肤组织中KGFmRNA表达量显著增高。结论 DGF表达增多在创伤后皮肤修复中起着重要的作用。
Differential expression of mRNA keratinocyte growth factor in the skin before and after the operation
WANG Zhizhong
, 百拇医药
(Department of Dermatology, Shanghai Hospital, Shanghai 200433，China)
Abstract：Objective To study the mechanism in wound repair. Methods We took 12 pairs of skin preparations during operation and 24 hours after operations, extracted total RNA, and analyzed keratinoyte growth factor expression by RTPCR. Results The level of KGF mRNA expression was predominantly higher 24 hours after skin injury. Conclusion High level of KGF plays an important role in wound repair.
, 百拇医药
Key words：Keratinocytes;Fibrobiast;Growth factor;Gene expression ▲
创伤后组织修复的机理制尚未完全明了，很多细胞因子参与其中。角朊细胞生长因子(Keratinocyte growth factor, KGF,FGF-7)是成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor, FGF)家族中的新成员，由成纤维细胞产生，以旁分泌方式作用于上皮细胞，特异地促进上皮细胞的生长增殖。为了明确KGF在组织修复中的作用，我们对12例患者术前术后皮肤组织中KGFmRNA的含量进行了检测，报道如下。
资料和方法
一、研究对象
患者为我院皮肤整容外科住院病人，供皮区均为腹部正常皮肤，3个月内未患任何皮肤疾患，年龄15～38岁，均为男性。取材方法：供皮区取全层皮肤，剔除皮下组织后总量100～200 g；24 h后以切口为中心再取全层皮肤100～200 g，标本离体后立即置液氮中保存备用，实验前用电子天平计重。
, http://www.100md.com
二、材料与方法
1.RNA抽提：所有试剂购自GIBCO，按文献[1]进行总RNA抽提，然后用甲醛变性凝胶电泳鉴定其纯度，分光光度计测定其浓度。
2.反转汞聚合酶链式反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction, RTPCR):RT试剂盒和PCR试剂盒均为Sigma 公司生产。每个标本1 μg总RNA用于RT反应。KGF引物序列如下[2]引物1：5′654TCTGTCGAA CACAGGTACCT6753′，引物2：5′919GTGTGTCCATTTAGCTGATGCAT8973′。扩增区段266 bp(nt654919)。每份RT产物各取1 μl用于PCR反应，各种试剂均加等量，共进行40次PCR循环。PCR产物用2 %凝胶电泳测定其浓度。
, http://www.100md.com
三、实验结果统计分析
实验结果采用t检验。
结果
1.各个标本的RTPCR产物在电泳后相应于266 bp的部分均呈现一定亮度的条带，说明RTPCR无误。
2.患者术前术后KGFmRNA的RFPCR产物含量(表1)，可见术后24 h的RFPCR产物含量几乎是术前组的100倍，两组相差极为显著，t=7.6226。
表1 手术前后皮肤组织中KGFmRNA的RTPCR产物的含量比较(
±s) 组别
病例
KGF的RTPCR产物含量(μg)
, http://www.100md.com
术前组
12
45.25±35.05
术后24 h组
12
4371.67±1564.21
讨论
外科手术对皮肤组织的切割导致了不同细胞因子的释放，它们在伤口愈合的过程中起着多种调节作用，诸如炎症反应、上皮再生、血管和间质蛋白形成等。这些因子多达10余种，目前已知的主要有血小板源生长因子(plateletderived growth factor, PDGF)、转化生长因子(transforming growth factor, TGF)、成纤维细胞生长因子(fibroblast grouth factor FGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)、胰岛素样生长因子(insulin like growth factor, IGF)、神经生长因子(nerve growth factor, NGF)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)，白介素1(Interleukin 1, IL1)和白介素2(Interleukin 2, IL2)等。
, 百拇医药
FGF家族中的KGF能够特异地强烈地促进上皮细胞的生长增殖，我们的实验结果显示在术后24 h皮肤组织中KGFmRNA的表达量显著提高，据此，我们认为在创伤愈合过程中，内源性KGF分泌的增多对上皮再生起到强有力的促进作用，从而有效地加速了组织修复。Werner S.[3]等在1992年用原位杂交法检测了小鼠皮肤组织在创伤前后KGFmRNA的表达量，结果发现创伤1天后的表达量是创伤前的60倍，我们的结果与之大同小异，增高倍率不同的原因有二：一是种属有别，一是我们的RTPCR反应体系所限。Marchese等[4]在1995年用ELISA法检测人体皮肤组织术后KGF蛋白表达量，同样发现术后KGF蛋白表达较术前增多。KGF蛋白的表达受很多因素的调控，有人发现IL1、PDGF、IL6和TGF2等均可促进KGF的表达[5]，在炎症过程中这些因子亦有释放，因此创伤后KGF表达的增多是原发反应还是继发反应尚需进一步探讨。在创伤愈合过程中，KGF是影响组织修复的主要调控因素还是次要调控因素，尚无定论。就本文结果而言，KGF是创伤愈合过程中多种体液介质和细胞介质所构成的网络中的一个重要组成部分，它强有力地促进了上皮组织的再生，具有广泛的生物学效应。■
, 百拇医药
基金项目：国家自然科学基金资助课题(39670674)
参考文献：
[1] 金冬雁，黎孟枫泽.分子克隆.第2版.北京：科学出版社，1995.352-354.
[2] Koos R D,Banks P K, Inkster S E, et al. Detection of aromatase and keratinocyte growth factor expression in breast tumors using reverse transcriptionpolymerase chain reaction. J Steroid Biochem Molec Biol, 1993,45:217-225.
[3] Werner S, Peters K G, Longaker M T, et al. Large induction of keratinocyte growth factor expression in the clermis during wound healing. Proc. Natl. Acad Sci USA, 1992,89:896-900.
, http://www.100md.com
[4] Marchese, Chedid, Dirsch, et al. Modulation of keratinocyte growth factor and its receptor in reepithelializing human skin. J Exp Med, 1995,182:1369-1376.
[5] Chedid, Rukin , Csaky, et al. Regulation of keratinocyte growth factor gene expression by interleukin 1. J Biol Chem, 1994, 269:10753-10757.
收稿日期：1998-12-15, 百拇医药
单位：汪治中(长海医院皮肤科，上海)
关键词：角蛋白；成纤维细胞；生长因子；基因表达
中华医学美容杂志000105 摘 要：目的 探讨创伤后组织修复的机理。方法 在术中和术后24小时采集皮肤12组，抽提总RNA，用RFPCR法检测术前术后皮肤组织中KGF表达量的变化。结果 发现术后24小时皮肤组织中KGFmRNA表达量显著增高。结论 DGF表达增多在创伤后皮肤修复中起着重要的作用。
Differential expression of mRNA keratinocyte growth factor in the skin before and after the operation
WANG Zhizhong
, 百拇医药
(Department of Dermatology, Shanghai Hospital, Shanghai 200433，China)
Abstract：Objective To study the mechanism in wound repair. Methods We took 12 pairs of skin preparations during operation and 24 hours after operations, extracted total RNA, and analyzed keratinoyte growth factor expression by RTPCR. Results The level of KGF mRNA expression was predominantly higher 24 hours after skin injury. Conclusion High level of KGF plays an important role in wound repair.
, 百拇医药
Key words：Keratinocytes;Fibrobiast;Growth factor;Gene expression ▲
创伤后组织修复的机理制尚未完全明了，很多细胞因子参与其中。角朊细胞生长因子(Keratinocyte growth factor, KGF,FGF-7)是成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor, FGF)家族中的新成员，由成纤维细胞产生，以旁分泌方式作用于上皮细胞，特异地促进上皮细胞的生长增殖。为了明确KGF在组织修复中的作用，我们对12例患者术前术后皮肤组织中KGFmRNA的含量进行了检测，报道如下。
资料和方法
一、研究对象
患者为我院皮肤整容外科住院病人，供皮区均为腹部正常皮肤，3个月内未患任何皮肤疾患，年龄15～38岁，均为男性。取材方法：供皮区取全层皮肤，剔除皮下组织后总量100～200 g；24 h后以切口为中心再取全层皮肤100～200 g，标本离体后立即置液氮中保存备用，实验前用电子天平计重。
, http://www.100md.com
二、材料与方法
1.RNA抽提：所有试剂购自GIBCO，按文献[1]进行总RNA抽提，然后用甲醛变性凝胶电泳鉴定其纯度，分光光度计测定其浓度。
2.反转汞聚合酶链式反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction, RTPCR):RT试剂盒和PCR试剂盒均为Sigma 公司生产。每个标本1 μg总RNA用于RT反应。KGF引物序列如下[2]引物1：5′654TCTGTCGAA CACAGGTACCT6753′，引物2：5′919GTGTGTCCATTTAGCTGATGCAT8973′。扩增区段266 bp(nt654919)。每份RT产物各取1 μl用于PCR反应，各种试剂均加等量，共进行40次PCR循环。PCR产物用2 %凝胶电泳测定其浓度。
, http://www.100md.com
三、实验结果统计分析
实验结果采用t检验。
结果
1.各个标本的RTPCR产物在电泳后相应于266 bp的部分均呈现一定亮度的条带，说明RTPCR无误。
2.患者术前术后KGFmRNA的RFPCR产物含量(表1)，可见术后24 h的RFPCR产物含量几乎是术前组的100倍，两组相差极为显著，t=7.6226。
表1 手术前后皮肤组织中KGFmRNA的RTPCR产物的含量比较(
±s) 组别病例
KGF的RTPCR产物含量(μg)
, http://www.100md.com
术前组
12
45.25±35.05
术后24 h组
12
4371.67±1564.21
讨论
外科手术对皮肤组织的切割导致了不同细胞因子的释放，它们在伤口愈合的过程中起着多种调节作用，诸如炎症反应、上皮再生、血管和间质蛋白形成等。这些因子多达10余种，目前已知的主要有血小板源生长因子(plateletderived growth factor, PDGF)、转化生长因子(transforming growth factor, TGF)、成纤维细胞生长因子(fibroblast grouth factor FGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)、胰岛素样生长因子(insulin like growth factor, IGF)、神经生长因子(nerve growth factor, NGF)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)，白介素1(Interleukin 1, IL1)和白介素2(Interleukin 2, IL2)等。
, 百拇医药
FGF家族中的KGF能够特异地强烈地促进上皮细胞的生长增殖，我们的实验结果显示在术后24 h皮肤组织中KGFmRNA的表达量显著提高，据此，我们认为在创伤愈合过程中，内源性KGF分泌的增多对上皮再生起到强有力的促进作用，从而有效地加速了组织修复。Werner S.[3]等在1992年用原位杂交法检测了小鼠皮肤组织在创伤前后KGFmRNA的表达量，结果发现创伤1天后的表达量是创伤前的60倍，我们的结果与之大同小异，增高倍率不同的原因有二：一是种属有别，一是我们的RTPCR反应体系所限。Marchese等[4]在1995年用ELISA法检测人体皮肤组织术后KGF蛋白表达量，同样发现术后KGF蛋白表达较术前增多。KGF蛋白的表达受很多因素的调控，有人发现IL1、PDGF、IL6和TGF2等均可促进KGF的表达[5]，在炎症过程中这些因子亦有释放，因此创伤后KGF表达的增多是原发反应还是继发反应尚需进一步探讨。在创伤愈合过程中，KGF是影响组织修复的主要调控因素还是次要调控因素，尚无定论。就本文结果而言，KGF是创伤愈合过程中多种体液介质和细胞介质所构成的网络中的一个重要组成部分，它强有力地促进了上皮组织的再生，具有广泛的生物学效应。■
, 百拇医药
基金项目：国家自然科学基金资助课题(39670674)
参考文献：
[1] 金冬雁，黎孟枫泽.分子克隆.第2版.北京：科学出版社，1995.352-354.
[2] Koos R D,Banks P K, Inkster S E, et al. Detection of aromatase and keratinocyte growth factor expression in breast tumors using reverse transcriptionpolymerase chain reaction. J Steroid Biochem Molec Biol, 1993,45:217-225.
[3] Werner S, Peters K G, Longaker M T, et al. Large induction of keratinocyte growth factor expression in the clermis during wound healing. Proc. Natl. Acad Sci USA, 1992,89:896-900.
, http://www.100md.com
[4] Marchese, Chedid, Dirsch, et al. Modulation of keratinocyte growth factor and its receptor in reepithelializing human skin. J Exp Med, 1995,182:1369-1376.
[5] Chedid, Rukin , Csaky, et al. Regulation of keratinocyte growth factor gene expression by interleukin 1. J Biol Chem, 1994, 269:10753-10757.
收稿日期：1998-12-15, 百拇医药