解毒固本冲剂对大鼠肿瘤坏死因子-α和白介素-2及病理形态学改变的影响
作者：姜玉峰 岳茂兴
单位：解放军第三○六医院普通外科，北京 100101
关键词：解毒固本冲剂；盲肠结扎穿孔术；大鼠；肿瘤坏死因子；白介素-2；病理形态学改变
中国中西医结合急救杂志000117摘要：目的：探讨纯中药制剂解毒固本冲剂对盲肠结扎加穿了致腹腔感染模型大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-2(IL-2)及病理形态学改变的影响。方法：盲肠结扎穿孔术制作大鼠CLP模型。实验对照组给予等量生理盐水，实验治疗组给予等量解毒固本冲剂；空白对照组和空白治疗组不制备CLP模型，前者仅单纯给予等量生理盐水，后者仅单纯给予等量解毒固本冲剂。各组动物于制作模型后分别给药，常规饲养3日后，取血清用放射免疫分析法测定TNF-α、IL-2。摘取肝、肺、部分小肠，进行光镜下病理形态学观察。结果：解毒固本冲剂可以明显降低模型组动物TNF-α水平，提高IL-2水平，而对正常大鼠无明显影响。从病理学角度也证明了解毒固本冲剂可降低肺、肝、肠器官所受到的损害。结论：解毒固本冲剂通过调节炎性介质的释放来降低全身炎症反应综合征时的脏器功能受损。
, http://www.100md.com
分类号：R361.3 文献标识码：A
文章编号：1008-9691(2000)01-0051-03
Influences of Jiedu Guben Granule on tumor necrosis factor-α,interleukin-2 and changes in pathomorphology in rats
JIANG Yu-feng,YUE Mao-xing
(The 306th Hospital of PLA,Beijing 100101)
Abstract：Objective：To investigate the influences of Jiedu Guben Granule on tumor necrosis factor-α(TNF-α),interleukin2(IL-2) and changes in pathomorphology in cecal ligation and puncture(CLP) model rats.Methods：CLP model was prepared and the perforation of cecum of rats was made.Normal saline was administered to experimental control group while Jiedu Guben Granule in the same volume as normal saline was given to experimental treated group;CLP models didn′t established in blank control group and blank control group furthermore only normal saline was given to former but Jiedu Guben Granule given to latter in the same volume as normal saline.After preparing models the drugs were administered respectively,conventionally feeding for three days later,the serum was taken and TNF-α,IL-2 were detected by means of radioimmune analysis method.The specimens of liver,lung,and part of small intestive were observed for pathomorphology under microscopic.Results：Jiedu Guben Granule could obviously decrease the TNF level,increase the IL-2 level in model group,but didn′t possess marked influences on them in normal rats.From pathologic angle it was confirmed that Jiedu Guben Granule was able to depress the injuried of lung liver and intestine.Conclusions：Jiedu Guben Granule is able to decrease the functional damages of organs in systemic inflammatory response syndrome through to regulate the release of inflammatory mediators.
, 百拇医药
Key words：Jiedu Guben Granule;CLP;rats;TNF-α;IL-2;pathomorphology change▲
腹腔严重感染情况下，经久不愈的胃肠粘膜损伤是白细胞系统持续激活的重要原因，全身性炎症反应综合征(SIRS)和多脏器功能失常综合征(MODS)是其主要归宿[1]。病理基础则是以细胞因子为代表的多种炎性介质的失控性释放，即各种内外源性炎症介质所产生的一系列“瀑布样级联反应”的综合过程，其中以肿瘤坏死因子 (TNF)、白介素(IL)与其关系最为密切[2]。而在机体的免疫应答中IL-2具有一定的代表性，可体现机体免疫力的程度。本研究旨在了解纯中药制剂解毒固本冲剂对盲肠结扎穿孔致腹腔感染(CLP)模型大鼠TNF、IL-2及部分脏器病理形态学改变的影响。
1 材料与方法
1.1 动物模型制备及分组：Wistar雄性大鼠60只，体重200～250 g，由北京医科大学动物实验中心提供。根据动物体重随机分为实验对照组、实验治疗组、空白对照组、空白治疗组。普通饲料，分笼饲养。按照文献[3]方法制备CLP模型。大鼠盲肠结扎穿孔，分别禁食3日后，于距盲肠末端1 cm处结扎，0.5 cm处9号针头对穿2孔。第4日起，实验对照组给予等量生理盐水经灌胃针头注入；实验治疗组给予等量解毒固本冲剂(以黄连、栀子、柴胡、连翘、生地、大黄、防风为主，由本院制剂室制作提供)。根据6.75 g/kg给药量，配置成1.5 g/2 ml浓度液体备用。空白对照组不制备模型，仅单纯给予等量生理盐水；空白治疗组不制备模型，单纯给予等量解毒固本冲剂。
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1.2 标本采集及实验观察：各组动物于制备模型后，分别给药，常规饲养3日后，断头采血5 ml，离心(3 500 r/min)20分钟 ，血浆送检。TNF-α、IL-2用酶联免疫吸附法(ELISA)测定(试剂盒为美国Bio Sourcs产品)。摘取肝、肺及距回盲部10 cm小肠，甲醛固定送病理科进行形态学观察。
1.3 统计学方法：应用SAS统计分析软件包,采用χ2SNK检验。
2 结 果
2.1 实验动物TNF-α和IL-2检测结果见表1。
表1 实验动物TNF-α和IL-2检测结果(
) 组别
, 百拇医药
动物数(只)
TNF-α(mg/L)
IL-2(ng/L)
实验对照组
15
0.446 8±0.033 0*△
341.33±52.00*△
实验治疗组
15
0.293 6±0.030 5*
650.00±59.00*
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空白对照组
15
0.195 0±0.032 0
453.00±37.00
空白治疗组
15
0.186 3±0.024 0
480.40±41.00
注：与空白对照组比较：*P<0.001；与实验治疗组比较：
△P<0.001
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2.2 病理学改变：实验对照组肺泡上皮肿胀，肺泡隔增宽，毛细血管明显扩张瘀血，中性粒细胞附壁，微血栓形成，肺间质水肿，部分区域肺萎缩；小肠衬覆上皮粘液分泌亢进，固有膜水肿，部分淋巴管明显扩张；肝细胞颗粒变性，肝窦扩张瘀血窦内皮肿胀。实验治疗组较实验对照组肺泡隔毛细血管扩张瘀血、中性粒细胞附壁现象以及肺间质水肿明显减轻，未见微血栓；小肠粘膜粘液分泌基本恢复正常，固有膜水肿消失；肝细胞颗粒变性及肝窦扩张瘀血程度减轻，肝细胞呈现增生改变。空白对照组及空白治疗组大鼠组织正常。
3 讨 论
腹腔严重感染后，随着病程的进一步发展，会不可避免地出现SIRS过程，病情进一步的恶化则会演变为MODS或多脏器功能衰竭(MOF)。SIRS主要的临床特征是持续高代谢、高动力循环状态和过度的炎症反应，病理基础则是以细胞因子为代表的多种炎性介质的失控性释放，所产生的一系列“瀑布样级联反应”的综合过程。TNF-α是介导内毒素损伤的关键介质之一，与感染的严重程度呈正相关，长时间大量分泌TNF可使人或动物呈恶液质状态[2]。IL-2主要由活化的T淋巴辅助细胞(TH1)产生，生物学活性是促进细胞毒性淋巴细胞(CTL)和自然杀伤(NK)细胞增殖，促进B细胞的增殖和分化，诱导淋巴因子激活杀伤细胞[4，5]；可用作免疫刺激剂，提高机体的免疫应答能力，可提高组织抗感染能力。CLP模型是研究脓毒症的典型模型，它是由盲肠梗阻加穿孔致严重腹膜炎而引起全身炎症反应，即脓毒症状态，更接近于临床外科情况[6]。本实验发现解毒固本冲剂可以明显降低模型组TNF-α水平，提高IL-2水平，而对正常大鼠无明显影响。提示解毒固本冲剂可以改善创伤、感染状态下大鼠免疫紊乱状态，可调控细胞因子以利于机体。急腹症情况下肠道粘膜屏障功能受到损害，肝枯否氏细胞消除功能也被阻断，由此使肠道内细菌及内毒素易位，造成肠源性内毒素血症，肠道淋巴组织和肝脏枯否细胞在受到肠道细菌和内毒素刺激下释放大量活性物质，包括TNF、ILs和干扰素。它们可激活多形核白细胞、内皮细胞、血小板，释放炎症介质形成“瀑布效应”(cascade)，这就为远离器官带来灾难性损伤。
, 百拇医药
近年来，应用通里攻下法治疗急性感染性疾病和急腹症取得了一定的成功，中医辨证以阳明证或少阳证者居多。通里攻下法对肠源性内毒素的减毒作用因其能荡涤肠道，使实邪积滞排出，改善肠、肺等脏器血流灌注，则肠蠕动及呼吸功能得以恢复，减少了内毒素的易位，从而显著减轻肠源性内毒素所造成的肺损伤。通里攻下法通过以下机制抑制肠源性内毒素血症：①机械排出作用；②直接破坏作用；③改善微循环，增加血流量；④减少过量细胞因子的产生：寒下方剂可减少内毒素诱导的TNF等细胞因子的产生，从而减轻组织损伤，降低过度免疫反应，以利于脏器保护作用；⑤抗菌消炎：大黄、白头翁、败酱草等均有较强的抑菌作用，从而减少细菌的增殖，使内毒素产生减少，易位入各脏器中内毒素也随之减少；大黄对多种革兰氏阴性及阳性细菌有抗菌作用，减轻肝脏损伤和制止消化道出血的作用；⑥脏器保护作用：除了通过上述的改善组织灌流，减少细胞因子产生等达到脏器保护作用外，大黄等中药能保护细胞间紧密联结，维持细胞结构完整等。
在本组实验中发现：实验对照组肝、肺及小肠组织均有明显损害，用解毒固本冲剂治疗后，动物肺泡隔毛细血管扩张瘀血、中性粒细胞附壁现象以及肺间质水肿明显减轻，未见微血栓；小肠粘膜粘液分泌基本恢复正常，固有膜水肿消失；肝细胞颗粒变性及肝窦扩张瘀血程度减轻，肝细胞呈现增生改变。以上表明：解毒固本冲剂通过调节炎性介质的释放从而降低SIRS时肺、肝、肠器官的损害，从而保护脏器功能，阻止病程向MODS的发展。
, 百拇医药
作者简介：姜玉峰(1972-)，男(汉族)，内蒙古临河人，硕士，医师。
参考文献：
[1]Border J R.Multiple systems organ failure.Ann Surg,1992,216：211-212.
[2]金春华，金丽娟，王静珍.小剂量肿瘤坏死因子对感染后器官损伤的保护作用及其机制.中国危重病急救医学，1996，7(8)：712-714.
[3]Flammand F J,Sibbald W J,Girotti M J,et al.Pentoxifylline does not preventmicrovascular injury in normotensive,septic rats.Crit Care Med,1995,23：119-124.
, 百拇医药
[4]Gillis J R,Smoth K A.Long term culture of tumoru-specific cytotoxic T cell.Nuture,1977,268：154-155.
[5]Henney C S,Kuribayashi K,Kern D E,et al.Interleukin-2 augments natura killer cell activity.Nature,1981,291：335-336.
[6]宋新明，王吉甫，赵继宗.皮质醇对脓毒症大鼠炎性细胞因子的影响.中华实验外科杂志，1998，15：448-449.
收稿日期：1999-09-22
修稿日期：1999-12-08, 百拇医药
单位：解放军第三○六医院普通外科，北京 100101
关键词：解毒固本冲剂；盲肠结扎穿孔术；大鼠；肿瘤坏死因子；白介素-2；病理形态学改变
中国中西医结合急救杂志000117摘要：目的：探讨纯中药制剂解毒固本冲剂对盲肠结扎加穿了致腹腔感染模型大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-2(IL-2)及病理形态学改变的影响。方法：盲肠结扎穿孔术制作大鼠CLP模型。实验对照组给予等量生理盐水，实验治疗组给予等量解毒固本冲剂；空白对照组和空白治疗组不制备CLP模型，前者仅单纯给予等量生理盐水，后者仅单纯给予等量解毒固本冲剂。各组动物于制作模型后分别给药，常规饲养3日后，取血清用放射免疫分析法测定TNF-α、IL-2。摘取肝、肺、部分小肠，进行光镜下病理形态学观察。结果：解毒固本冲剂可以明显降低模型组动物TNF-α水平，提高IL-2水平，而对正常大鼠无明显影响。从病理学角度也证明了解毒固本冲剂可降低肺、肝、肠器官所受到的损害。结论：解毒固本冲剂通过调节炎性介质的释放来降低全身炎症反应综合征时的脏器功能受损。
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分类号：R361.3 文献标识码：A
文章编号：1008-9691(2000)01-0051-03
Influences of Jiedu Guben Granule on tumor necrosis factor-α,interleukin-2 and changes in pathomorphology in rats
JIANG Yu-feng,YUE Mao-xing
(The 306th Hospital of PLA,Beijing 100101)
Abstract：Objective：To investigate the influences of Jiedu Guben Granule on tumor necrosis factor-α(TNF-α),interleukin2(IL-2) and changes in pathomorphology in cecal ligation and puncture(CLP) model rats.Methods：CLP model was prepared and the perforation of cecum of rats was made.Normal saline was administered to experimental control group while Jiedu Guben Granule in the same volume as normal saline was given to experimental treated group;CLP models didn′t established in blank control group and blank control group furthermore only normal saline was given to former but Jiedu Guben Granule given to latter in the same volume as normal saline.After preparing models the drugs were administered respectively,conventionally feeding for three days later,the serum was taken and TNF-α,IL-2 were detected by means of radioimmune analysis method.The specimens of liver,lung,and part of small intestive were observed for pathomorphology under microscopic.Results：Jiedu Guben Granule could obviously decrease the TNF level,increase the IL-2 level in model group,but didn′t possess marked influences on them in normal rats.From pathologic angle it was confirmed that Jiedu Guben Granule was able to depress the injuried of lung liver and intestine.Conclusions：Jiedu Guben Granule is able to decrease the functional damages of organs in systemic inflammatory response syndrome through to regulate the release of inflammatory mediators.
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Key words：Jiedu Guben Granule;CLP;rats;TNF-α;IL-2;pathomorphology change▲
腹腔严重感染情况下，经久不愈的胃肠粘膜损伤是白细胞系统持续激活的重要原因，全身性炎症反应综合征(SIRS)和多脏器功能失常综合征(MODS)是其主要归宿[1]。病理基础则是以细胞因子为代表的多种炎性介质的失控性释放，即各种内外源性炎症介质所产生的一系列“瀑布样级联反应”的综合过程，其中以肿瘤坏死因子 (TNF)、白介素(IL)与其关系最为密切[2]。而在机体的免疫应答中IL-2具有一定的代表性，可体现机体免疫力的程度。本研究旨在了解纯中药制剂解毒固本冲剂对盲肠结扎穿孔致腹腔感染(CLP)模型大鼠TNF、IL-2及部分脏器病理形态学改变的影响。
1 材料与方法
1.1 动物模型制备及分组：Wistar雄性大鼠60只，体重200～250 g，由北京医科大学动物实验中心提供。根据动物体重随机分为实验对照组、实验治疗组、空白对照组、空白治疗组。普通饲料，分笼饲养。按照文献[3]方法制备CLP模型。大鼠盲肠结扎穿孔，分别禁食3日后，于距盲肠末端1 cm处结扎，0.5 cm处9号针头对穿2孔。第4日起，实验对照组给予等量生理盐水经灌胃针头注入；实验治疗组给予等量解毒固本冲剂(以黄连、栀子、柴胡、连翘、生地、大黄、防风为主，由本院制剂室制作提供)。根据6.75 g/kg给药量，配置成1.5 g/2 ml浓度液体备用。空白对照组不制备模型，仅单纯给予等量生理盐水；空白治疗组不制备模型，单纯给予等量解毒固本冲剂。
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1.2 标本采集及实验观察：各组动物于制备模型后，分别给药，常规饲养3日后，断头采血5 ml，离心(3 500 r/min)20分钟 ，血浆送检。TNF-α、IL-2用酶联免疫吸附法(ELISA)测定(试剂盒为美国Bio Sourcs产品)。摘取肝、肺及距回盲部10 cm小肠，甲醛固定送病理科进行形态学观察。
1.3 统计学方法：应用SAS统计分析软件包,采用χ2SNK检验。
2 结 果
2.1 实验动物TNF-α和IL-2检测结果见表1。
表1 实验动物TNF-α和IL-2检测结果(
) 组别, 百拇医药
动物数(只)
TNF-α(mg/L)
IL-2(ng/L)
实验对照组
15
0.446 8±0.033 0*△
341.33±52.00*△
实验治疗组
15
0.293 6±0.030 5*
650.00±59.00*
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空白对照组
15
0.195 0±0.032 0
453.00±37.00
空白治疗组
15
0.186 3±0.024 0
480.40±41.00
注：与空白对照组比较：*P<0.001；与实验治疗组比较：
△P<0.001
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2.2 病理学改变：实验对照组肺泡上皮肿胀，肺泡隔增宽，毛细血管明显扩张瘀血，中性粒细胞附壁，微血栓形成，肺间质水肿，部分区域肺萎缩；小肠衬覆上皮粘液分泌亢进，固有膜水肿，部分淋巴管明显扩张；肝细胞颗粒变性，肝窦扩张瘀血窦内皮肿胀。实验治疗组较实验对照组肺泡隔毛细血管扩张瘀血、中性粒细胞附壁现象以及肺间质水肿明显减轻，未见微血栓；小肠粘膜粘液分泌基本恢复正常，固有膜水肿消失；肝细胞颗粒变性及肝窦扩张瘀血程度减轻，肝细胞呈现增生改变。空白对照组及空白治疗组大鼠组织正常。
3 讨 论
腹腔严重感染后，随着病程的进一步发展，会不可避免地出现SIRS过程，病情进一步的恶化则会演变为MODS或多脏器功能衰竭(MOF)。SIRS主要的临床特征是持续高代谢、高动力循环状态和过度的炎症反应，病理基础则是以细胞因子为代表的多种炎性介质的失控性释放，所产生的一系列“瀑布样级联反应”的综合过程。TNF-α是介导内毒素损伤的关键介质之一，与感染的严重程度呈正相关，长时间大量分泌TNF可使人或动物呈恶液质状态[2]。IL-2主要由活化的T淋巴辅助细胞(TH1)产生，生物学活性是促进细胞毒性淋巴细胞(CTL)和自然杀伤(NK)细胞增殖，促进B细胞的增殖和分化，诱导淋巴因子激活杀伤细胞[4，5]；可用作免疫刺激剂，提高机体的免疫应答能力，可提高组织抗感染能力。CLP模型是研究脓毒症的典型模型，它是由盲肠梗阻加穿孔致严重腹膜炎而引起全身炎症反应，即脓毒症状态，更接近于临床外科情况[6]。本实验发现解毒固本冲剂可以明显降低模型组TNF-α水平，提高IL-2水平，而对正常大鼠无明显影响。提示解毒固本冲剂可以改善创伤、感染状态下大鼠免疫紊乱状态，可调控细胞因子以利于机体。急腹症情况下肠道粘膜屏障功能受到损害，肝枯否氏细胞消除功能也被阻断，由此使肠道内细菌及内毒素易位，造成肠源性内毒素血症，肠道淋巴组织和肝脏枯否细胞在受到肠道细菌和内毒素刺激下释放大量活性物质，包括TNF、ILs和干扰素。它们可激活多形核白细胞、内皮细胞、血小板，释放炎症介质形成“瀑布效应”(cascade)，这就为远离器官带来灾难性损伤。
, 百拇医药
近年来，应用通里攻下法治疗急性感染性疾病和急腹症取得了一定的成功，中医辨证以阳明证或少阳证者居多。通里攻下法对肠源性内毒素的减毒作用因其能荡涤肠道，使实邪积滞排出，改善肠、肺等脏器血流灌注，则肠蠕动及呼吸功能得以恢复，减少了内毒素的易位，从而显著减轻肠源性内毒素所造成的肺损伤。通里攻下法通过以下机制抑制肠源性内毒素血症：①机械排出作用；②直接破坏作用；③改善微循环，增加血流量；④减少过量细胞因子的产生：寒下方剂可减少内毒素诱导的TNF等细胞因子的产生，从而减轻组织损伤，降低过度免疫反应，以利于脏器保护作用；⑤抗菌消炎：大黄、白头翁、败酱草等均有较强的抑菌作用，从而减少细菌的增殖，使内毒素产生减少，易位入各脏器中内毒素也随之减少；大黄对多种革兰氏阴性及阳性细菌有抗菌作用，减轻肝脏损伤和制止消化道出血的作用；⑥脏器保护作用：除了通过上述的改善组织灌流，减少细胞因子产生等达到脏器保护作用外，大黄等中药能保护细胞间紧密联结，维持细胞结构完整等。
在本组实验中发现：实验对照组肝、肺及小肠组织均有明显损害，用解毒固本冲剂治疗后，动物肺泡隔毛细血管扩张瘀血、中性粒细胞附壁现象以及肺间质水肿明显减轻，未见微血栓；小肠粘膜粘液分泌基本恢复正常，固有膜水肿消失；肝细胞颗粒变性及肝窦扩张瘀血程度减轻，肝细胞呈现增生改变。以上表明：解毒固本冲剂通过调节炎性介质的释放从而降低SIRS时肺、肝、肠器官的损害，从而保护脏器功能，阻止病程向MODS的发展。
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作者简介：姜玉峰(1972-)，男(汉族)，内蒙古临河人，硕士，医师。
参考文献：
[1]Border J R.Multiple systems organ failure.Ann Surg,1992,216：211-212.
[2]金春华，金丽娟，王静珍.小剂量肿瘤坏死因子对感染后器官损伤的保护作用及其机制.中国危重病急救医学，1996，7(8)：712-714.
[3]Flammand F J,Sibbald W J,Girotti M J,et al.Pentoxifylline does not preventmicrovascular injury in normotensive,septic rats.Crit Care Med,1995,23：119-124.
, 百拇医药
[4]Gillis J R,Smoth K A.Long term culture of tumoru-specific cytotoxic T cell.Nuture,1977,268：154-155.
[5]Henney C S,Kuribayashi K,Kern D E,et al.Interleukin-2 augments natura killer cell activity.Nature,1981,291：335-336.
[6]宋新明，王吉甫，赵继宗.皮质醇对脓毒症大鼠炎性细胞因子的影响.中华实验外科杂志，1998，15：448-449.
收稿日期：1999-09-22
修稿日期：1999-12-08, 百拇医药