苋科6种种子类药材的蛋白电泳鉴别
作者：赵华英 陈永林
单位：赵华英,陈永林(山东医科大学 药学院，山东 济南 250012)
关键词：苋科；种子；电泳鉴别▲
中国中药杂志000119 摘 要：目的：为了准确鉴别苋科种子类药材。方法：应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对6种外形很相似的种子进行了可溶性蛋白质的电泳分析。结果：电泳图谱清楚地显示出各样品的特征带，从而能准确区别各种药材。结论：该方法操作简便，重现性好，各种间可比性强。能起到准确鉴别药材的目的。
苋科植物的种子甚小，黑亮光滑，外形极相似，肉眼难以识别，如青葙子，李时珍在《本草纲目》中谓：“……子在穗中，与鸡冠花子及苋子一样难辨。”说明从明代就发现其混乱现象，为了鉴别真伪，保证临床用药的安全有效，我们利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对苋科6种种子类药材进行了可溶性蛋白质的电泳分析，现报道如下。
, 百拇医药
1 实验材料、仪器和试剂
1.1 材料 6种样品均来源于苋科，经作者鉴定其拉丁学名(见表1)。
表1 样品来源 编号
名称
植物学名
采集地点
1
青葙
Celosia argentea
本室标本室
2
牛膝
, 百拇医药
Achyranthes bidentata
西营
3
鸡冠花
C.cristata
本校药圃
4
皱果苋
Amaranthus viridis
本校药圃
5
苋
, http://www.100md.com Am.tricolor
本校药圃
6
反枝苋
Am.retroflexus
本校药圃
1.2 仪器和试剂 DYY-Ⅲ8型稳压稳流定时电泳仪(北京六一仪器厂)，采用垂直板凝胶电泳，凝胶板20 cm×20 cm。主要的试剂有分离胶、浓缩胶、四甲基乙二胺(TEMED)等，其配制方法见参考文献。
2 方法
2.1 样品制备 选取干燥成熟的种子，各取0.5 g，置冰箱内低温放置1 h后，取出加入稀释4倍的浓缩胶缓冲液5 ml，加少许石英砂，低温下研磨成匀浆，离心15 min(4 000 r.min-1)，取上清液置冰箱中备用。
, http://www.100md.com
2.2 电泳操作 参照文献[1]进行，注意用微量注射器加样，每样品格内加入100 μl，点样结束后向上槽内加入1滴溴酚蓝指示剂示踪。总电流强度控制在35 mA，样品泳入分离胶后，电流加大至70 mA，待样品在分离胶中泳动出10 cm时停止电泳。
2.3 染色和脱色 取出胶板后，用蒸馏水冲洗一下，随即放入考马斯亮蓝R250显色液中，置恒温箱中38 ℃染色4 h后取出，换上脱色液，脱至背景清晰为止。
3 结果与讨论
胶板经脱色后显示出清晰的谱带，根据谱带的自然形态绘制电泳图谱(见图1)并照相。图谱中用涂黑表示深色的I级带，作为重点分析的特征带，并测其泳动率(见表2)。斜线表示色较浅的Ⅱ级带，小点表示色最浅的Ⅲ级带。
, 百拇医药
图1 苋科6种样品蛋白电泳图谱
1.青葙子 2.牛膝子 3.鸡冠花子
4.皱果苋子 5.苋子 6.反枝苋子
表2 苋科6种样品电泳谱带(Ⅰ级带)的泳动率 编号
A区
B区
C区
A1
A2
A3
A4
A5
, http://www.100md.com
A6
B1
B2
B3
B4
C1
C2
1
0.19
0.30
0.41
2
0.09
, http://www.100md.com 0.17
0.30
0.37
0.54
0.91
3
0.04
0.09
0.17
4
0.21
0.27
0.42
, http://www.100md.com
0.75
5
0.26
0.41
0.57
6
0.14
0.25
0.44
0.75
由图谱可见，同科属植物的种子显示出一些相同的谱带，如A2，A3和B2处。同时因为种不同，各种间的谱带区别也很明显，如青葙子在C区无谱带；鸡冠花子在B区无Ⅰ级带；牛膝子Ⅰ级带的数目最多，其B1，B3和C2带的泳动率足以与其它种相区别；3种苋的谱带数目和泳动率很相似，显示出相似的亲缘关系，但3种Ⅰ级带的泳动率不同，如皱果苋子的A4带、苋子的B4带、反枝苋的A3带也足以区别。总之各种间谱带特征明显，可比性强，为准确鉴别苋科药材提供了可靠的依据。
对于以上种子，我们还进行了酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶的电泳分析，由于显示的谱带数目少，效果不甚理想而未作总结。
参考文献：
[1]袁晓华，杨中汉.植物生理生化实验.北京：高等教育出版社，1983：233
收稿日期：1999-01-20, 百拇医药
单位：赵华英,陈永林(山东医科大学 药学院，山东 济南 250012)
关键词：苋科；种子；电泳鉴别▲
中国中药杂志000119 摘 要：目的：为了准确鉴别苋科种子类药材。方法：应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对6种外形很相似的种子进行了可溶性蛋白质的电泳分析。结果：电泳图谱清楚地显示出各样品的特征带，从而能准确区别各种药材。结论：该方法操作简便，重现性好，各种间可比性强。能起到准确鉴别药材的目的。
苋科植物的种子甚小，黑亮光滑，外形极相似，肉眼难以识别，如青葙子，李时珍在《本草纲目》中谓：“……子在穗中，与鸡冠花子及苋子一样难辨。”说明从明代就发现其混乱现象，为了鉴别真伪，保证临床用药的安全有效，我们利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对苋科6种种子类药材进行了可溶性蛋白质的电泳分析，现报道如下。
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1 实验材料、仪器和试剂
1.1 材料 6种样品均来源于苋科，经作者鉴定其拉丁学名(见表1)。
表1 样品来源 编号
名称
植物学名
采集地点
1
青葙
Celosia argentea
本室标本室
2
牛膝
, 百拇医药
Achyranthes bidentata
西营
3
鸡冠花
C.cristata
本校药圃
4
皱果苋
Amaranthus viridis
本校药圃
5
苋
, http://www.100md.com Am.tricolor
本校药圃
6
反枝苋
Am.retroflexus
本校药圃
1.2 仪器和试剂 DYY-Ⅲ8型稳压稳流定时电泳仪(北京六一仪器厂)，采用垂直板凝胶电泳，凝胶板20 cm×20 cm。主要的试剂有分离胶、浓缩胶、四甲基乙二胺(TEMED)等，其配制方法见参考文献。
2 方法
2.1 样品制备 选取干燥成熟的种子，各取0.5 g，置冰箱内低温放置1 h后，取出加入稀释4倍的浓缩胶缓冲液5 ml，加少许石英砂，低温下研磨成匀浆，离心15 min(4 000 r.min-1)，取上清液置冰箱中备用。
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2.2 电泳操作 参照文献[1]进行，注意用微量注射器加样，每样品格内加入100 μl，点样结束后向上槽内加入1滴溴酚蓝指示剂示踪。总电流强度控制在35 mA，样品泳入分离胶后，电流加大至70 mA，待样品在分离胶中泳动出10 cm时停止电泳。
2.3 染色和脱色 取出胶板后，用蒸馏水冲洗一下，随即放入考马斯亮蓝R250显色液中，置恒温箱中38 ℃染色4 h后取出，换上脱色液，脱至背景清晰为止。
3 结果与讨论
胶板经脱色后显示出清晰的谱带，根据谱带的自然形态绘制电泳图谱(见图1)并照相。图谱中用涂黑表示深色的I级带，作为重点分析的特征带，并测其泳动率(见表2)。斜线表示色较浅的Ⅱ级带，小点表示色最浅的Ⅲ级带。
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图1 苋科6种样品蛋白电泳图谱
1.青葙子 2.牛膝子 3.鸡冠花子
4.皱果苋子 5.苋子 6.反枝苋子
表2 苋科6种样品电泳谱带(Ⅰ级带)的泳动率 编号
A区
B区
C区
A1
A2
A3
A4
A5
, http://www.100md.com
A6
B1
B2
B3
B4
C1
C2
1
0.19
0.30
0.41
2
0.09
, http://www.100md.com 0.17
0.30
0.37
0.54
0.91
3
0.04
0.09
0.17
4
0.21
0.27
0.42
, http://www.100md.com
0.75
5
0.26
0.41
0.57
6
0.14
0.25
0.44
0.75
由图谱可见，同科属植物的种子显示出一些相同的谱带，如A2，A3和B2处。同时因为种不同，各种间的谱带区别也很明显，如青葙子在C区无谱带；鸡冠花子在B区无Ⅰ级带；牛膝子Ⅰ级带的数目最多，其B1，B3和C2带的泳动率足以与其它种相区别；3种苋的谱带数目和泳动率很相似，显示出相似的亲缘关系，但3种Ⅰ级带的泳动率不同，如皱果苋子的A4带、苋子的B4带、反枝苋的A3带也足以区别。总之各种间谱带特征明显，可比性强，为准确鉴别苋科药材提供了可靠的依据。
对于以上种子，我们还进行了酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶的电泳分析，由于显示的谱带数目少，效果不甚理想而未作总结。
参考文献：
[1]袁晓华，杨中汉.植物生理生化实验.北京：高等教育出版社，1983：233
收稿日期：1999-01-20, 百拇医药