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编号:10253540
实验性蛛网膜下腔出血后血小板膜糖蛋白-140和血栓烷B2的变化
http://www.100md.com 《临床神经病学杂志》 2000年第1期
     作者:杨金升 高福兴 张新江 罗晓红 王娟 于伟玲

    单位:730050兰州军区兰州总医院神经内科

    关键词:大鼠;蛛网膜下腔出血;血栓烷B2;血小板膜糖蛋白-140

    临床神经病学杂志000105 【摘要】 目的 了解蛛网膜下腔出血(SAH)后血小板膜糖蛋白-140(GMP-140)和血栓烷B2(TXB2)的变化规律。方法 经颅骨钻孔-注入自家血方法建立大鼠SAH的动物模型,应用放射免疫法对SHA后不同时间内大鼠血GMP-140、TXB2水平进行测定。结果 GMP-140在实验后36小时~7天间有上升,以3天最为显著,TXB2在实验后12~36小时呈节段性升高。结论 GMP-140增高是SAH发生后脑缺血和神经组织受损后共同激活血小板的结果,GMP-140的增高与迟发性血管痉挛及SAH后的继发性血管损害有直接关系。
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    The changes of GMP-140 and thromboxane B2 after the experimental subarachnoid hemorrhage in Wistar rats

    Yang Jinsheng, Gao Fuxing, Zhang Xinjiang, et al

    (Department of Neurology, General Military Hospital, Lanzhou 730050)

    【Abstract】 Objective To grasp the regularity of gluco-membrance protein-140(GMP-140) and thromboxane B2(TXB2) after subarachnoid hemorrhage(SAH). Methods The experimental SAH models of Wistar rats were completed by transcranial drilling and the reperfusion of self-blood, the levels of GMP-140 and TXB2 in plasma were determined by radioimmunologic method. Results The increase of GMP-140 was 36 h~7 d;the highest in 3 d.the time of TXB2 was rised in 12~36 h after the experiment. Conclusion The rise of GMP-140 was a combination effect of cerebral ischemia and the damage of nevous tissure in activiting platelet after SAH, the change was(SAH) directly related to lately vascular spasm and secondary vascular injury.
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    【Key words】Rat Subarachnoid hemorrhage Thromboxane B2 Gluco-membrance protein-140

    蛛网膜下腔出血(SAH)后可引起急性及迟发性脑血管痉挛,导致严重的脑循环与代谢紊乱,这些改变直接影响着此类病人的预后。在SAH的发生和转归过程中,不同阶段的病理生理学变化可影响脑组织和血浆内多种微量介质的表达,而由这些介质参与的病理过程又可作用和影响SAH的结局。为了解SAH发生后血小板膜糖蛋白-140(GMP-140)和血栓烷B2(TXB2)的变化规律,我们用动物实验方法对大鼠实验性SAH后GMP-140和TXB2的变化进行了观察,现报告如下。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物 选用64只Wistar大鼠为实验动物,由兰州医学院实验动物中心提供,体重在250~300 g之间,动物随机分成SAH组和对照组。SAH组按大鼠处死时间不同又分成为SAH后12小时、24小时、36小时、3天、5天、7天、14天7个组,每组8只。对照组8只为假手术组。
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    1.2 方法

    1.2.1 建立SAH动物模型 参照季鹰等[1]报道的方法完成实验动物模型。将动物俯卧位固定在手术台架上,切开顶部中线皮肤,钝性分离肌肉及骨膜。在前囱前5 mm、中线旁3 mm处用电动牙科钻钻孔。此孔位于前颅窝底与额极交界处,在手术显微镜下仔细将脑膜挑破,当清亮脑脊液流出时,将PE10塑料管尖端指向双耳连线中点,紧贴前颅窝底蛛网膜下腔送入,深度约1 cm,使该管顶端恰好位于Willis环前部。连接微量注射器回吸证实有清亮脑脊液流出后,SAH组自插管内注入非肝素化的自体血100 μl。对照组操作步骤同实验组,但最后经插管注入100 μl 生理盐水。

    1.2.2 血样留取 分别在手术前及术后6、12、24、36小时及3、5、7、14天采取静脉血2 ml,置于含10% EDTA二钠30 μl 和40 U抑肽酶的试管中混匀,于低温下(4℃)3000 r/min 分离血浆,置-70℃下保存备检。
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    1.2.3 测试方法 GMP-140及TXB2药盒购自苏州医学院血栓与止血研究室。用放射免疫法完成测试,操作方法参照文献进行[1]

    1.2.4 统计方法 实验检测数据用(±s)表示,进行成组t检验。

    2 结 果

    2.1 SAH后血浆GMP-140的变化 见表1。SAH组的GMP-140为5.3±1.5 mmol/L,对照组为4.63±1.2 mmol/L,但两组间比较统计学检验无显著性差异(P>0.05)。SAH后不同时间与对照组比较在36小时~5天之间有增高,但仅在36小时、3天时统计学比较有显著差异(P<0.05~0.01,见表1)。

    表1 实验性SAH组GMP-140及TXB2的变化(± s)
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    GMP-140

    TXB2

    SAH后12小时组

    4.9±2.3

    2714.6± 1248.8**

    SAH后24小时组

    4.9±0.6

    3144.5±1533.7**

    SAH后36小时组

    6.6±1.3*

    3455.8±1496.4**
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    SAH后3天组

    7.3±1.1**

    227.4±116.5

    SAH后5天组

    4.2±1.8

    66.3±205.1

    SAH后7天组

    5.3±1.8

    332.4±266.9

    SAH后14天组

    4.5±1.4

    340.1±178.5
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    对照组

    4.6±1.2

    278.0±54.5

    与对照组比较*P<0.05,**P<0.01

    2.2 SAH后血浆TXB2含量的变化 见表1。实验组的TXB2为1365.8±655.4 mmol/L,对照组为278.0±54.5 mmol/L,两组间比较有显著差异(P<0.05)。SAH后12、24、36小时组与对照组比较均有显著性增高(P<0.01)

    2.3 GMP-140和TXB2的相关性 以SAH组和对照组GMP-140与TXB2测定值为对象,就两者之间的相关性作直线回归分析,见两变量在术后均有递进性增高(r=0.7634,P<0.05)。
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    3 讨论

    在急性脑卒中的发生发展中,血小板的激活及其激活产物起着重要的作用。所以近年来在血小板与卒中的研究中,除了对血小板产物在凝血机理中的作用作了阐述外,有关血小板激活标志物的研究也有较大的发展[2,3]

    3. 1 实验性SAH后GMP-140的变化特征 以往判断体内血小板活化程度多是通过血小板释放产物如血小板激活因子(PAF)、vW、Ⅷ因子的测定来完成的,这些方法在诊断一些血栓形成性缺血性疾病时有一定的临床价值,但这些方法都是间接的试验手段,所以寻求一种直接标志物来反映体内、外血小板活化程度是很有必要的[2,3,6]。而GMP-140作为血小板活化后的释放产物,可以直接反映血小板激活的程度[6~8]。正常情况下由于机体内环境相对稳定,正常人血浆GMP-140的含量极少。只有当血小板活化后,一方面其伪足形成和断裂后有产物进入血浆[3,6],另一方面血小板活化后的变形力下降又加速了血小板的活化和破裂。所以GMP-140的含量改变实质上直接反映了血小板的破坏程度[8,9]。本研究试图通过对血浆GMP-140含量的观察来了解SAH时血小板的激活和破坏情况,有关这方面的报道既往未见有报道[4~6]。本研究结果表明SAH后血小板激活是存在的,血浆GMP-140升高和释放有较明确的时间特征,分析这种改变可能与SAH早期的急性脑缺血和/或血管痉挛有关。
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    在本试验中,SAH后36小时即可见到血浆GMP-140增高,表明血小板的激活在SAH后是随之发生的,但3天后即可见其明显下降,表明SAH后血小板的激活有一定的时间性。这个结果不但对判断SAH后早期脑缺血的临床过程是有价值的,而且对早期处理和预后判断亦是有意义的。根据GMP-140的变化,既可以就缺血性卒中状态的存在与否作出早期诊断;同时还可根据其降解情况对有无再缺血或血管痉挛的发生作出判断,如果SAH发生后36小时GMP-140依然增高的话,多提示有新的缺血过程发生[9,10]

    3.2 GMP-140和TXB2的相关性 测定血浆内花生四烯酸(AA)的代谢产物TXB2及6-酮-PGF含量的改变,可以间接判断体内血小板的活化程度,但由于多种组织均与AA的代谢有关,因此该结果可受多种体内因素的影响,其临床价值也有一定的局限性[4,5,9,10]。就本试验的结果来看,GMP-140与TXB2含量的演变在实验引起的血管病变中有一致性的相关性,术后12小时TXB2已呈升高状态,GMP-140仍呈低谷状态,提示缺血早期多种因素引发的TXB2的升高发生较早,而36小时后GMP-140的增高则可能主要与TXB2等因素有关[5,7,11]
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    3. 3 GMP-140改变与组织学变化的关系 由于GMP-140的活化主要在SAH后36小时发生,其后有明显的下降。这种改变与组织学上观察到的急性循环障碍和神经组织水肿有关,即当缺血后水肿及缺血明显时,GMP-140增高;至组织学改变有改善和好转后,GMP-140即有下降,表明其活化程度与组织学改变是相关的[7,11,12]。而TXB2的变化则与此不呈平行关系。是否可以认为,GMP-140的变化主要与急性循环障碍相关,即内皮依赖性血管舒缩障碍与GMP-140的活化有极大的相关性。因此,测定GMP-140可为判断体内血小板的活化程度提供一种新的测试手段,为各种神经疾患时的缺血性脑损害的早期诊断提供一个灵敏的客观指标[10,12~14]

    参 考 文 献

    1,季鹰,吴建中,赵雅度,等.一种新的蛛网膜下腔出血动物模型的建立.中华神经外科杂志,1991,7:11
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    2,杨金升,郭平,韩筱玉综述.血管内皮细胞与脑血管病.国外医学脑血管病分册, 1993,1:69

    3,Schalk KA, Faraci FM, Heistad DD. Effect of endothelin on production of cerebrospinal fluid in rabbits. Stroke, 1992,23:560

    4,Fujimor A, Kurihara M. Endothelin in plasma and cerebrospinal fluid of patients with subarachnoid heamorrhage.Lancet,1990,336:633

    5,潘多亮.颗粒膜蛋白——一种新的粘附蛋白分子.生理科学进展, 1991,22:23

    6,Pohl U, Nolte C,Bunse A,et al. Endothelium-dependent phosphrylation of vasodilator-stimulated protein in platelets during coronary passage. J Physiol Heart Circ Physiol,1994,66:35
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    7,McEver RP.GMP-140 a receptor for neutrophils and monocytes on activated platelets and endothlium.J Biochem, 1991,45:156

    8,Gawaz M,Ott I, Reininger AJ,et al. Effects of magnesium on platelet aggregation and adhesion,Magnesium modulates surface expression of glycoproteins on platelets in vitro and ex vivo.Thromb Haemost, 1994,72:912

    9,Pilarski LM. FMc46, a cell protrusion-associated lekocytes adhesion molecule-1 epitope on human lymphocytes and thymocytes.J Immunol, 1991,147:136
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    收稿1998-11-09 修回1999-03-12, http://www.100md.com