胃粘膜上皮不典型增生和胃癌组织CD44v6的表达研究
作者：严辉 陈卫昌 蔡衍郎 陶瑞芳 张学光
单位：严辉 陈卫昌 蔡衍郎 陶瑞芳(215006 苏州医学院附属第一医院消化科)；张学光(苏州医学院生物技术研究所)
关键词：不典型增生；胃癌；CD44拼接变异体；免疫组织化学
江苏医药000703 【摘要】 目的 探讨CD44v6在胃癌发生与发展中的作用。方法 运用免疫组化方法检测24例浅表性胃炎、24例不典型增生胃粘膜、48例胃癌组织中CD44v6的表达。结果 ①浅表性胃炎组无CD44v6表达，不典型增生组和胃癌组CD44v6阳性率分别为45.83%、50.00%，明显高于浅表性胃炎组(P均<0.01)；②CD44v6表达与胃癌淋巴结转移和pTNM分期有关(P<0.05)，与组织学类型无关(P>0.05)。结论 胃活检组织中CD44v6检测，有助于胃癌的早期诊断和淋巴结转移趋势的推测，并对预后的评估有一定价值。
, 百拇医药
Expression of CD44 Splice Variant V6 in Human Dysplastic and Carcinomatous Gastric Mucosa
YAN Hui，CHEN Weichang，CAI Yanlang，et al. Department of Gastroenterology，The First Affiliated Hospital of Suzhou Medical College，Suzhou 215006
【Abstract】 Objective To study the role of CD44 splice variant V6(CD44v6) in occurrence development and of human gastric carcinoma.Methods The expression of CD44v6 was studied in superficial gastritis(24cases)，dysplastic gastric mucosa (24cases) and gastric carcinoma tissues(48cases) from endoscopic and surgical specimens by immunohistochemical ABC method.Results ①No CD44v6 expression was found in superficial gastritis mucosa.The positivity rate of CD44v6 in dysplastic gastric mucosa and gastric tissues were 45.8% and 50.00%，respectively.The positivity rates were higher than those of superficial gastritis mucosa(P<0.01)；②The expressions of CD44v6 were related to metastasis to lymph nodes and the UICC TNM classification(P<0.05)，but were independent of Lauren′s type (P>0.05).Conclusions Determination of CD44v6 in biopsy tissues by immunohistochemistry might be useful in early diagnosis and predicting the potential lymphatic metastasis and in assessing prognosis of gastric carcinoma.
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【Key Words】 Dysplastic Gastric Carcinoma CD44 Splice variant 6(CD44v6) Immunohistochemistry
CD44是细胞表面粘附分子，它介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间的相互粘附，其表达程度直接影响癌细胞的脱离和再附着[1]。近年研究表明CD44拼接变异体(CD44v6)在肺、脑、结肠肿瘤中均有表达[2、3、4]，尤其是CD44v6与肿瘤关系密切[4]。本研究应用免疫组化方法观察不典型增生胃粘膜和胃癌组织CD44v6表达，初步探讨CD44v6对胃癌早期诊断及预后的价值。
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材料与方法
一、材料：取我院1996～1998年经胃镜诊断且病理确诊的活检标本共96例，其中24例浅表性胃炎、24例不典型增生胃粘膜、48例胃癌。48例胃癌均经手术治疗，术后按Lauren[5]组织分型法及UICC之pTNM分期标准[6]：肠型26例，弥漫型22例；Ⅰ、Ⅱ期12例，Ⅲ、Ⅳ期36例。淋巴结转移者38例，淋巴结无转移者12例。
二、方法：所有组织经10%福尔马林固定，石蜡包埋，5 μm厚连续切片，分别行HE和免疫组化染色。免疫组化采用ABC法，CD44v6鼠单抗购自R＆D公司(工作浓度1∶40)，加一抗前标本先经微波修复抗原，DAB显色。以膀胱癌组织作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。
胞膜呈清晰棕黄色为阳性细胞。光镜下每例随机观察5个高倍视野，每个视野计数100个细胞，阳性细胞数>25%为阳性。
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三、统计学处理：运用Epi-Info Version 5.0统计软件行χ2检验。
结 果
一、不典型增生胃粘膜和胃癌组织CD44v6表达特点
不典型增生胃粘膜组和胃癌组皆有CD44v6表达，后者相对深染，阳性率分别为45.83%、50.00%，两组间差异无显著性(P>0.05)，但都分别高于浅表性胃炎组(无CD44v6表达)(P均<0.01)。
二、胃癌组织CD44v6表达与临床病理参数间的关系
弥漫型胃癌组织CD44v6阳性率(45.45%)与肠型胃癌(53.85%)间差异无显著性(P>0.05)，淋巴结有转移者CD44v6阳性率(57.89%)高于无转移者(20.00%)(P<0.05)，Ⅲ、Ⅳ期者CD44v6阳性率(61.11%)明显高于Ⅰ、Ⅱ期者(16.67%)(P<0.01)，表明CD44v6表达与胃癌组织学类型无关，与淋巴结是否转移及pTNM分期有关，见表1。
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表1 胃癌组织CD44v6表达与临床病理参数间的关系 组别
N
阳性例数
(%)
χ2
P
Lauren型
肠型
26
14(53.85)
0.34
>0.05
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弥漫型
22
10(45.45)
淋巴结转移
无
10
2(20.00)
4.55
<0.05
有
38
22(57.89)
pTNM分期
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Ⅰ、Ⅱ
12
2(16.67)
7.11
<0.01
Ⅲ、Ⅳ
36
22(61.11)
讨 论
人类CD44基因定位于11号染色体短臂，按表达方式分：标准型CD44(CD44s)和CD44拼接变异体(CD44v)。CD44基因的转录和翻译修饰，造成恶变和转移，特别是糖基转移酶的改变，使肿瘤细胞表面糖蛋白的糖链发生改变，继之影响细胞间的识别、粘附和信号传递，甚至丧失接触抑制，造成瘤细胞的无限增殖[1]。有学者发现正常结肠粘膜无CD44v6表达，结肠肿瘤中CD44v6表达显著增加[7]，而结肠粘膜不典型增生程度与CD44v6表达相关[4]。本研究显示，不典型增生胃粘膜和胃癌组织中CD44v6阳性率分别为45.83%、50.00%(P>0.05)，较浅表性胃炎组(无CD44v6表达)明显升高，提示CD44v6表达增加可能是胃癌发生的早期信号，对胃活检组织及时进行CD44v6检测，有助于胃癌前病变和胃癌的早期发现。
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CD44v6成为研究热点的主要原因在于它是最早被发现与肿瘤转移有关的CD44拼接变异体。Cunthert U等[8]检测发现有转移能力的胰腺癌细胞株BSP73ASML有CD44v6表达，而无转移能力的细胞株BSP73AS则无CD44v6表达。本研究中CD44v6表达与胃癌组织学类型无关，淋巴结有转移者CD44v6阳性率高于无转移者(P<0.05)，Ⅲ、Ⅳ期者CD44v6阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ期者(P<0.01)，说明CD44v6表达对于肿瘤细胞扩散到淋巴结是很重要的[9]；而淋巴结有无转移和pTNM分期是临床评价患者预后的重要指标，因此CD44v6的检测有助于初步判断肿瘤淋巴结转移的趋势和预后。目前CD44v6的表达与肿瘤相关性研究还处于初始阶段，有关其与胃癌组织学类型及预后关系的研究尚有不同观点[9、10]，有待深入探索。
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参考文献
1，Takeichi M.Cadherin in cancer：implications for invasion and metastasis.Curr Opin Oncol，1993，5：806-811.
2，Margaret B，Penno J，Thomas A，et al.Expression of CD44 in human lung tumors.Cancer Res，1994，54：1381-1387.
3，Li H，Liu J，Hoffmann M，et al.Differential expression of CD44 in human brain metastasis and primary brain tumors.Br J Cancer，1995，72：160-163.
4，Mulder JWR，Kruyt PM，Sewnath M，et al.Colorectal cancer prognosis and expression of exon-v6-containg CD44 proteins.Lancet，1994，344：1470-1472.
, http://www.100md.com
5，Lauren P.The two histological main types of gastric carcinoma diffuse and so-called intestinal-type carcinoma，an attempt at a histo-clinical classification.Acta Pathol Microbiol Scand，1965，64：31.
6，UICC.Hermanek P and Sobin LH(eds)，TNM classification of maligant tumors，Rev.ED.4 Berlin：Springer-Verlag，1987，43-46.
7，Wielenga VJM，Heider KH，Offerhaus GA，et al.Expression of CD44 variant proteins in human colorectal cancer is related to tumor progression.Cancer Res，1993，53：4754-4756.
, http://www.100md.com
8，Gunthert U，Hofmann M，Rudy W，et al.A new variant of glycoprotein CD44 confers metastatic potential to rat carcinoma cell lines.Cell，1991，65：13-24.
9，Dammrich J，Vollmers HP，Heider KH，et al.Importance of different CD44V6 expression in human gastric intestinal and diffuse type cancers for metastatic lymphogenic spreading.J Mol Med，1995，73：395-401.
10，Mirecka J，Marx D and Schauser A.Immunohistochemical localization of CD44 variants 5 and 6 in human gastric mucosa and gastric cancer.Anticancer Res，1995，15：1459-1465.
(收稿：1999-12-08 修回：2000-02-21), 百拇医药
单位：严辉 陈卫昌 蔡衍郎 陶瑞芳(215006 苏州医学院附属第一医院消化科)；张学光(苏州医学院生物技术研究所)
关键词：不典型增生；胃癌；CD44拼接变异体；免疫组织化学
江苏医药000703 【摘要】 目的 探讨CD44v6在胃癌发生与发展中的作用。方法 运用免疫组化方法检测24例浅表性胃炎、24例不典型增生胃粘膜、48例胃癌组织中CD44v6的表达。结果 ①浅表性胃炎组无CD44v6表达，不典型增生组和胃癌组CD44v6阳性率分别为45.83%、50.00%，明显高于浅表性胃炎组(P均<0.01)；②CD44v6表达与胃癌淋巴结转移和pTNM分期有关(P<0.05)，与组织学类型无关(P>0.05)。结论 胃活检组织中CD44v6检测，有助于胃癌的早期诊断和淋巴结转移趋势的推测，并对预后的评估有一定价值。
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Expression of CD44 Splice Variant V6 in Human Dysplastic and Carcinomatous Gastric Mucosa
YAN Hui，CHEN Weichang，CAI Yanlang，et al. Department of Gastroenterology，The First Affiliated Hospital of Suzhou Medical College，Suzhou 215006
【Abstract】 Objective To study the role of CD44 splice variant V6(CD44v6) in occurrence development and of human gastric carcinoma.Methods The expression of CD44v6 was studied in superficial gastritis(24cases)，dysplastic gastric mucosa (24cases) and gastric carcinoma tissues(48cases) from endoscopic and surgical specimens by immunohistochemical ABC method.Results ①No CD44v6 expression was found in superficial gastritis mucosa.The positivity rate of CD44v6 in dysplastic gastric mucosa and gastric tissues were 45.8% and 50.00%，respectively.The positivity rates were higher than those of superficial gastritis mucosa(P<0.01)；②The expressions of CD44v6 were related to metastasis to lymph nodes and the UICC TNM classification(P<0.05)，but were independent of Lauren′s type (P>0.05).Conclusions Determination of CD44v6 in biopsy tissues by immunohistochemistry might be useful in early diagnosis and predicting the potential lymphatic metastasis and in assessing prognosis of gastric carcinoma.
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【Key Words】 Dysplastic Gastric Carcinoma CD44 Splice variant 6(CD44v6) Immunohistochemistry
CD44是细胞表面粘附分子，它介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间的相互粘附，其表达程度直接影响癌细胞的脱离和再附着[1]。近年研究表明CD44拼接变异体(CD44v6)在肺、脑、结肠肿瘤中均有表达[2、3、4]，尤其是CD44v6与肿瘤关系密切[4]。本研究应用免疫组化方法观察不典型增生胃粘膜和胃癌组织CD44v6表达，初步探讨CD44v6对胃癌早期诊断及预后的价值。
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材料与方法
一、材料：取我院1996～1998年经胃镜诊断且病理确诊的活检标本共96例，其中24例浅表性胃炎、24例不典型增生胃粘膜、48例胃癌。48例胃癌均经手术治疗，术后按Lauren[5]组织分型法及UICC之pTNM分期标准[6]：肠型26例，弥漫型22例；Ⅰ、Ⅱ期12例，Ⅲ、Ⅳ期36例。淋巴结转移者38例，淋巴结无转移者12例。
二、方法：所有组织经10%福尔马林固定，石蜡包埋，5 μm厚连续切片，分别行HE和免疫组化染色。免疫组化采用ABC法，CD44v6鼠单抗购自R＆D公司(工作浓度1∶40)，加一抗前标本先经微波修复抗原，DAB显色。以膀胱癌组织作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。
胞膜呈清晰棕黄色为阳性细胞。光镜下每例随机观察5个高倍视野，每个视野计数100个细胞，阳性细胞数>25%为阳性。
, 百拇医药
三、统计学处理：运用Epi-Info Version 5.0统计软件行χ2检验。
结 果
一、不典型增生胃粘膜和胃癌组织CD44v6表达特点
不典型增生胃粘膜组和胃癌组皆有CD44v6表达，后者相对深染，阳性率分别为45.83%、50.00%，两组间差异无显著性(P>0.05)，但都分别高于浅表性胃炎组(无CD44v6表达)(P均<0.01)。
二、胃癌组织CD44v6表达与临床病理参数间的关系
弥漫型胃癌组织CD44v6阳性率(45.45%)与肠型胃癌(53.85%)间差异无显著性(P>0.05)，淋巴结有转移者CD44v6阳性率(57.89%)高于无转移者(20.00%)(P<0.05)，Ⅲ、Ⅳ期者CD44v6阳性率(61.11%)明显高于Ⅰ、Ⅱ期者(16.67%)(P<0.01)，表明CD44v6表达与胃癌组织学类型无关，与淋巴结是否转移及pTNM分期有关，见表1。
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表1 胃癌组织CD44v6表达与临床病理参数间的关系 组别
N
阳性例数
(%)
χ2
P
Lauren型
肠型
26
14(53.85)
0.34
>0.05
, http://www.100md.com
弥漫型
22
10(45.45)
淋巴结转移
无
10
2(20.00)
4.55
<0.05
有
38
22(57.89)
pTNM分期
, 百拇医药
Ⅰ、Ⅱ
12
2(16.67)
7.11
<0.01
Ⅲ、Ⅳ
36
22(61.11)
讨 论
人类CD44基因定位于11号染色体短臂，按表达方式分：标准型CD44(CD44s)和CD44拼接变异体(CD44v)。CD44基因的转录和翻译修饰，造成恶变和转移，特别是糖基转移酶的改变，使肿瘤细胞表面糖蛋白的糖链发生改变，继之影响细胞间的识别、粘附和信号传递，甚至丧失接触抑制，造成瘤细胞的无限增殖[1]。有学者发现正常结肠粘膜无CD44v6表达，结肠肿瘤中CD44v6表达显著增加[7]，而结肠粘膜不典型增生程度与CD44v6表达相关[4]。本研究显示，不典型增生胃粘膜和胃癌组织中CD44v6阳性率分别为45.83%、50.00%(P>0.05)，较浅表性胃炎组(无CD44v6表达)明显升高，提示CD44v6表达增加可能是胃癌发生的早期信号，对胃活检组织及时进行CD44v6检测，有助于胃癌前病变和胃癌的早期发现。
, 百拇医药
CD44v6成为研究热点的主要原因在于它是最早被发现与肿瘤转移有关的CD44拼接变异体。Cunthert U等[8]检测发现有转移能力的胰腺癌细胞株BSP73ASML有CD44v6表达，而无转移能力的细胞株BSP73AS则无CD44v6表达。本研究中CD44v6表达与胃癌组织学类型无关，淋巴结有转移者CD44v6阳性率高于无转移者(P<0.05)，Ⅲ、Ⅳ期者CD44v6阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ期者(P<0.01)，说明CD44v6表达对于肿瘤细胞扩散到淋巴结是很重要的[9]；而淋巴结有无转移和pTNM分期是临床评价患者预后的重要指标，因此CD44v6的检测有助于初步判断肿瘤淋巴结转移的趋势和预后。目前CD44v6的表达与肿瘤相关性研究还处于初始阶段，有关其与胃癌组织学类型及预后关系的研究尚有不同观点[9、10]，有待深入探索。
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参考文献
1，Takeichi M.Cadherin in cancer：implications for invasion and metastasis.Curr Opin Oncol，1993，5：806-811.
2，Margaret B，Penno J，Thomas A，et al.Expression of CD44 in human lung tumors.Cancer Res，1994，54：1381-1387.
3，Li H，Liu J，Hoffmann M，et al.Differential expression of CD44 in human brain metastasis and primary brain tumors.Br J Cancer，1995，72：160-163.
4，Mulder JWR，Kruyt PM，Sewnath M，et al.Colorectal cancer prognosis and expression of exon-v6-containg CD44 proteins.Lancet，1994，344：1470-1472.
, http://www.100md.com
5，Lauren P.The two histological main types of gastric carcinoma diffuse and so-called intestinal-type carcinoma，an attempt at a histo-clinical classification.Acta Pathol Microbiol Scand，1965，64：31.
6，UICC.Hermanek P and Sobin LH(eds)，TNM classification of maligant tumors，Rev.ED.4 Berlin：Springer-Verlag，1987，43-46.
7，Wielenga VJM，Heider KH，Offerhaus GA，et al.Expression of CD44 variant proteins in human colorectal cancer is related to tumor progression.Cancer Res，1993，53：4754-4756.
, http://www.100md.com
8，Gunthert U，Hofmann M，Rudy W，et al.A new variant of glycoprotein CD44 confers metastatic potential to rat carcinoma cell lines.Cell，1991，65：13-24.
9，Dammrich J，Vollmers HP，Heider KH，et al.Importance of different CD44V6 expression in human gastric intestinal and diffuse type cancers for metastatic lymphogenic spreading.J Mol Med，1995，73：395-401.
10，Mirecka J，Marx D and Schauser A.Immunohistochemical localization of CD44 variants 5 and 6 in human gastric mucosa and gastric cancer.Anticancer Res，1995，15：1459-1465.
(收稿：1999-12-08 修回：2000-02-21), 百拇医药