人血管内皮细胞生长因子腺病毒表达系统的构建及体外表达
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北京大学第三医院骨科；北京大学人类疾病治疗中心 蔡善保；马庆军；余希杰；党耕町；马大龙
内皮生长因子|血管|腺病毒|人|基因疗法|骨髓基质细胞
参见附件(51kb)。
北京大学第三医院骨科；北京大学人类疾病治疗中心 蔡善保；马庆军；余希杰；党耕町；马大龙
关键词：内皮生长因子；血管；腺病毒；人；基因疗法；骨髓基质细胞
摘要：目的 构建人VEGF12 1腺病毒表达载体 ,探讨应用血管内皮细胞生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因治疗骨科缺血性疾患的可行性。 方法 采用分子克隆技术 ,从pCDI/VEGF12 1质粒获得hVEGF12 1cDNA ,经穿梭质粒pShuttle克隆到腺病毒质粒上 ,构成Adeno VEGF12 1腺病毒重组质粒 ,经酶切及测序鉴定正确后 ,包装成为重组Adeno VEGF12 1腺病毒 ,并进行电镜观察及滴度测定。用病毒感染小鼠骨髓基质细胞 ,用逆转录PCR方法检测VEGF12 1基因在骨髓基质细胞中的转录 ,用免疫印迹及免疫组化方法检测VEGF蛋白的表达。 结果 经酶切鉴定及基因测序
北京大学第三医院骨科；北京大学人类疾病治疗中心 蔡善保；马庆军；余希杰；党耕町；马大龙
关键词：内皮生长因子；血管；腺病毒；人；基因疗法；骨髓基质细胞
摘要：目的 构建人VEGF12 1腺病毒表达载体 ,探讨应用血管内皮细胞生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因治疗骨科缺血性疾患的可行性。 方法 采用分子克隆技术 ,从pCDI/VEGF12 1质粒获得hVEGF12 1cDNA ,经穿梭质粒pShuttle克隆到腺病毒质粒上 ,构成Adeno VEGF12 1腺病毒重组质粒 ,经酶切及测序鉴定正确后 ,包装成为重组Adeno VEGF12 1腺病毒 ,并进行电镜观察及滴度测定。用病毒感染小鼠骨髓基质细胞 ,用逆转录PCR方法检测VEGF12 1基因在骨髓基质细胞中的转录 ,用免疫印迹及免疫组化方法检测VEGF蛋白的表达。 结果 经酶切鉴定及基因测序
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