复合季铵盐对乙型肝炎表面抗原破坏作用的试验观察
作者：魏兰芬 林军明 许激
单位：浙江省卫生防疫站，杭州 310009
关键词：季铵盐；双癸基氯化铵；正烷基苄基氯化铵；十六烷基三甲基溴化铵；HBsAg
中国消毒学杂志9901009
提要 以含3200mg/L 复合季铵盐(含双癸基氯化铵与正12～16烷基苄基氯化铵)溶液对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)作用45min，或以含800mg/L复合季铵盐溶液作用60min，均可将HBsAg抗原性破坏。以含8000mg/L十六烷基三甲基溴化铵溶液作用120min亦未完全将HBsAg抗原性破坏。
EXPERIMENTAL OBSERVATION ON DESTRUCTIVE EFFECT OF COMPOUND QUATERNARY AMMONIUM SALT ON HBsAg
, 百拇医药
〔Wei Lanfen, et al. Zhejiang Provincial Sanitary and Anti-epidemic Station, Hangzhou 310009〕
Abstract The solution containing 3200mg/L compound quaternary ammonium salt 〔containing didecyl ammonium chloride and n-alkyl (from dodecyl to hexadecyl) ammonium chlorides〕 with a 45min contact time or the solution containing 800mg/L with a 60 min contact time could destroy the antigenicity of HBsAg. The solution containing hexadecyl trimethyl ammonium bromide with a 120 min contact time did not destroy completely the antigenicity of HBsAg.
, http://www.100md.com
Key words quaternary ammonium salt didecyl ammonium chloride n-alkyl benzyl ammonium chloride hexadecyl trimethyl ammonium bromide HBsAg
所测复合季铵盐消毒剂主要由双癸基氯化铵和12～16碳的正烷基苄基氯化铵组成，制剂中含1.6%季铵盐，pH值为5.6〔1〕。在实验室内进行了其对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)破坏作用的检测，并与十六烷基三甲基溴化铵(上海新华活化材料研究所产)的0.8%去离子水溶液(pH 5.8)作比较。现将结果报告如下。
1方法
1.1 HBsAg样片的制备
将HBsAg原液(含量为4mg/ml，北京生化免疫中心提供)稀释成HBsAg含量为100μg/ml(是试验灵敏度的50000倍)的悬液。取20μl该悬液染于直径为1.5cm的不锈钢圆片上，置于37℃干燥。
, http://www.100md.com
1.2 中和剂选择试验试验用染HBsAg不锈钢片进行。试验分组为：①(HBsAg片+消毒液50μl)+磷酸盐缓冲液(PBS)1ml；②(HBsAg片+消毒液50μl)+中和剂1ml；③中和剂1ml+HBsAg片；④(中和剂1ml+消毒液50μl)+HBsAg片；⑤ PBS 1ml+HBsAg片；⑥消毒液50μl+中和剂1ml；⑦消毒液；⑧消毒液50μl+PBS1ml；⑨PBS。试验结果，当第9组与第6组均为正常阴性，第3、4、5组组间S/N值相近，第1组S/N值同阴性对照或低于第2组，第2组S/N值低于第3、4、5组而远大于阴性对照时，表明所选中和剂及其浓度合适。
1.3 HBsAg抗原性破坏试验
取50μl消毒液覆盖于染HBsAg不锈钢片上。作用至规定时间，将HBsAg片移入含1ml中和剂的试管中。震打试管以洗下HBsAg并中和作用10min。取其混匀液以ELISA崐法(试剂灵敏度经自测为2ng/ml，北京肝炎试剂中心提供)检测HBsAg抗原性。以消毒组OD 值(S)与阴性对照(消毒液与中和剂反应产物)OD值(N)的比值(S/N)<2.1为HBsAg抗原性破坏。
, 百拇医药
2 结果
2.1 中和剂试验结果试验表明，用含1%卵磷脂、5%吐温80、10%小牛血清的0.03mol/L磷酸盐缓冲液中和3200mg/L复合季铵盐溶液和8000mg/L十六烷基三甲基溴化铵溶液是合适的(表1)。 表1复合季铵盐与十六烷基三甲基溴化铵中和剂试验结果 组 别
S/N值
复合季铵盐
十六烷基三甲基溴化铵
(消毒液+HBsAg片)+PBS
20.7
27.3
(消毒液+HBsAg片)+中和剂
, 百拇医药
42.0
38.7
中和剂+HBsAg片
48.7
44.7
(中和剂+消毒液)+HBsAg片
49.3
45.0
PBS+HBsAg片
49.3
49.3
消毒液+中和剂
, http://www.100md.com
1.0
1.3
消毒液
50.3
50.3
消毒液+PBS
4.0
5.0
PBS
1.0
1.0
注：试验中，HBsAg与3200mg/L复合季铵盐溶液混合后作用5min, 与8000mg/L十六烷基三甲基溴化铵溶液混合后作用20min。结果为3次试验平均值。
, 百拇医药
2.2 对HBsAg抗原性的破坏作用经检测，800mg/L与3 200mg/L复合季铵盐溶液分别作用60min与45min，均可将HBsAg 抗原性破坏，而8000mg/L十六烷基三甲基溴化铵溶液作用120min仍不能将不锈钢片上HBsAg抗原性完全破坏(表2)。 表2 复合季铵盐与十六烷基三甲基溴化铵对HBsAg抗原性的破坏效果 作用时间
(min)
复合季铵盐不同浓度(mg/L)作用后S/N值
十六烷基三甲基溴化铵不同浓度(mg/L)作用后S/N值
3200
1600
800
8000
, 百拇医药
4000
2000
10
28.0
30.7
39.7
42.4
42.6
42.6
20
20.0
20.0
23.0………
, 百拇医药
30
9.0
9.2
9.8
26.0
29.0
37.3
45
<2.1
5.9
7.9………
60
<2.1
, 百拇医药
<2.1
<2.1
24.1
28.7
37.3
120………
22.1
25.0
30.0
注：试验温度为19～21℃。阳性对照S/N值为49.3。结果为5次试验平均值。
3 结语
3.1 结果表明，以3200mg/L复合季铵盐溶液作用45min，或800mg/L者作用60min，可将不锈钢片上HBsAg抗原性破坏，而8000mg/L十六烷基三甲基溴化铵溶液作用120min仍不能。孟凡和〔2〕、吴国强〔3〕]与刘玉书〔4〕均曾报道，0.1%～0.8%苯扎溴铵(新洁尔灭)溶液作用48h 仍未完全将 HBsAg 抗原性破坏。
, 百拇医药
3.2 在中和剂试验中，季铵盐溶液对ELISA试剂呈强阳性反应。这与李新武报崐道相一致〔5〕。其原因可能是季铵盐的烷基与试剂显色剂邻苯二胺呈显色反应。在季铵盐此类检测中应予注意。
参考文献
〔1〕 曹亚峰. 新一代双癸基二甲基氯化铵的合成. 精细化工, 1994; 11(4): 9.
〔2〕 孟凡和，王雅贤，赵小里. 消毒剂对乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸与乙型肝炎表面抗原灭活作用的比较. 消毒与灭菌, 1988; 5 (1): 23.
〔3〕 吴国强，李荣，许继庄. 几种常用消毒剂和加热对乙型肝炎表面抗原灭活作用的实验研究. 消毒与灭菌, 1988; 5(1): 20.
〔4〕 刘玉书，蒋伶. 消毒剂对乙型肝炎表面抗原抗原性破坏的观察。消毒与灭菌, 1989; 6(3):149.
〔5〕 李新武，袁洽, 孙守宏. 在乙型肝炎表面抗原破坏试验中对ELISA法检验结果影响因素的研究. 中国消毒学杂志, 1995; 12(2): 89.
(1997-10-28收稿 1998-04-17修回), 百拇医药
单位：浙江省卫生防疫站，杭州 310009
关键词：季铵盐；双癸基氯化铵；正烷基苄基氯化铵；十六烷基三甲基溴化铵；HBsAg
中国消毒学杂志9901009
提要 以含3200mg/L 复合季铵盐(含双癸基氯化铵与正12～16烷基苄基氯化铵)溶液对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)作用45min，或以含800mg/L复合季铵盐溶液作用60min，均可将HBsAg抗原性破坏。以含8000mg/L十六烷基三甲基溴化铵溶液作用120min亦未完全将HBsAg抗原性破坏。
EXPERIMENTAL OBSERVATION ON DESTRUCTIVE EFFECT OF COMPOUND QUATERNARY AMMONIUM SALT ON HBsAg
, 百拇医药
〔Wei Lanfen, et al. Zhejiang Provincial Sanitary and Anti-epidemic Station, Hangzhou 310009〕
Abstract The solution containing 3200mg/L compound quaternary ammonium salt 〔containing didecyl ammonium chloride and n-alkyl (from dodecyl to hexadecyl) ammonium chlorides〕 with a 45min contact time or the solution containing 800mg/L with a 60 min contact time could destroy the antigenicity of HBsAg. The solution containing hexadecyl trimethyl ammonium bromide with a 120 min contact time did not destroy completely the antigenicity of HBsAg.
, http://www.100md.com
Key words quaternary ammonium salt didecyl ammonium chloride n-alkyl benzyl ammonium chloride hexadecyl trimethyl ammonium bromide HBsAg
所测复合季铵盐消毒剂主要由双癸基氯化铵和12～16碳的正烷基苄基氯化铵组成，制剂中含1.6%季铵盐，pH值为5.6〔1〕。在实验室内进行了其对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)破坏作用的检测，并与十六烷基三甲基溴化铵(上海新华活化材料研究所产)的0.8%去离子水溶液(pH 5.8)作比较。现将结果报告如下。
1方法
1.1 HBsAg样片的制备
将HBsAg原液(含量为4mg/ml，北京生化免疫中心提供)稀释成HBsAg含量为100μg/ml(是试验灵敏度的50000倍)的悬液。取20μl该悬液染于直径为1.5cm的不锈钢圆片上，置于37℃干燥。
, http://www.100md.com
1.2 中和剂选择试验试验用染HBsAg不锈钢片进行。试验分组为：①(HBsAg片+消毒液50μl)+磷酸盐缓冲液(PBS)1ml；②(HBsAg片+消毒液50μl)+中和剂1ml；③中和剂1ml+HBsAg片；④(中和剂1ml+消毒液50μl)+HBsAg片；⑤ PBS 1ml+HBsAg片；⑥消毒液50μl+中和剂1ml；⑦消毒液；⑧消毒液50μl+PBS1ml；⑨PBS。试验结果，当第9组与第6组均为正常阴性，第3、4、5组组间S/N值相近，第1组S/N值同阴性对照或低于第2组，第2组S/N值低于第3、4、5组而远大于阴性对照时，表明所选中和剂及其浓度合适。
1.3 HBsAg抗原性破坏试验
取50μl消毒液覆盖于染HBsAg不锈钢片上。作用至规定时间，将HBsAg片移入含1ml中和剂的试管中。震打试管以洗下HBsAg并中和作用10min。取其混匀液以ELISA崐法(试剂灵敏度经自测为2ng/ml，北京肝炎试剂中心提供)检测HBsAg抗原性。以消毒组OD 值(S)与阴性对照(消毒液与中和剂反应产物)OD值(N)的比值(S/N)<2.1为HBsAg抗原性破坏。
, 百拇医药
2 结果
2.1 中和剂试验结果试验表明，用含1%卵磷脂、5%吐温80、10%小牛血清的0.03mol/L磷酸盐缓冲液中和3200mg/L复合季铵盐溶液和8000mg/L十六烷基三甲基溴化铵溶液是合适的(表1)。 表1复合季铵盐与十六烷基三甲基溴化铵中和剂试验结果 组 别
S/N值
复合季铵盐
十六烷基三甲基溴化铵
(消毒液+HBsAg片)+PBS
20.7
27.3
(消毒液+HBsAg片)+中和剂
, 百拇医药
42.0
38.7
中和剂+HBsAg片
48.7
44.7
(中和剂+消毒液)+HBsAg片
49.3
45.0
PBS+HBsAg片
49.3
49.3
消毒液+中和剂
, http://www.100md.com
1.0
1.3
消毒液
50.3
50.3
消毒液+PBS
4.0
5.0
PBS
1.0
1.0
注：试验中，HBsAg与3200mg/L复合季铵盐溶液混合后作用5min, 与8000mg/L十六烷基三甲基溴化铵溶液混合后作用20min。结果为3次试验平均值。
, 百拇医药
2.2 对HBsAg抗原性的破坏作用经检测，800mg/L与3 200mg/L复合季铵盐溶液分别作用60min与45min，均可将HBsAg 抗原性破坏，而8000mg/L十六烷基三甲基溴化铵溶液作用120min仍不能将不锈钢片上HBsAg抗原性完全破坏(表2)。 表2 复合季铵盐与十六烷基三甲基溴化铵对HBsAg抗原性的破坏效果 作用时间
(min)
复合季铵盐不同浓度(mg/L)作用后S/N值
十六烷基三甲基溴化铵不同浓度(mg/L)作用后S/N值
3200
1600
800
8000
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42.6
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20.0
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26.0
29.0
37.3
45
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5.9
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60
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<2.1
<2.1
24.1
28.7
37.3
120………
22.1
25.0
30.0
注：试验温度为19～21℃。阳性对照S/N值为49.3。结果为5次试验平均值。
3 结语
3.1 结果表明，以3200mg/L复合季铵盐溶液作用45min，或800mg/L者作用60min，可将不锈钢片上HBsAg抗原性破坏，而8000mg/L十六烷基三甲基溴化铵溶液作用120min仍不能。孟凡和〔2〕、吴国强〔3〕]与刘玉书〔4〕均曾报道，0.1%～0.8%苯扎溴铵(新洁尔灭)溶液作用48h 仍未完全将 HBsAg 抗原性破坏。
, 百拇医药
3.2 在中和剂试验中，季铵盐溶液对ELISA试剂呈强阳性反应。这与李新武报崐道相一致〔5〕。其原因可能是季铵盐的烷基与试剂显色剂邻苯二胺呈显色反应。在季铵盐此类检测中应予注意。
参考文献
〔1〕 曹亚峰. 新一代双癸基二甲基氯化铵的合成. 精细化工, 1994; 11(4): 9.
〔2〕 孟凡和，王雅贤，赵小里. 消毒剂对乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸与乙型肝炎表面抗原灭活作用的比较. 消毒与灭菌, 1988; 5 (1): 23.
〔3〕 吴国强，李荣，许继庄. 几种常用消毒剂和加热对乙型肝炎表面抗原灭活作用的实验研究. 消毒与灭菌, 1988; 5(1): 20.
〔4〕 刘玉书，蒋伶. 消毒剂对乙型肝炎表面抗原抗原性破坏的观察。消毒与灭菌, 1989; 6(3):149.
〔5〕 李新武，袁洽, 孙守宏. 在乙型肝炎表面抗原破坏试验中对ELISA法检验结果影响因素的研究. 中国消毒学杂志, 1995; 12(2): 89.
(1997-10-28收稿 1998-04-17修回), 百拇医药