反义寡核苷酸对HL60细胞c-myc基因表达的抑制和分化诱导作用及凋亡作用的研究
作者：王松梅 单易非 高红阳 张宝春
单位：上海医科大学基础医学院生物物理学教研室，上海200032
关键词：
中国病理生理杂志0010181
目的和方法：原癌基因c-myc广泛存在于各型白血病细胞，在人早幼粒白血病细胞系HL60细胞中表达最高。其表达水平随细胞的增殖而增加，随细胞的分化成熟而下降。HL60细胞在不同的诱导剂作用下可向不同的方向分化，如：DMSO、RA等可诱导其向粒细胞方向分化；TPA、1，25-(OH)2 Vitamin D3、DCA等可诱导其向单核/巨噬细胞方向分化。本工作在本室以前工作的基础上进一步采用针对c-myc exonl的162～179核苷酸序列，与c-myc mRNA的5’端转录调控区互补的18 bp硫修饰反义寡核苷酸5’d(CTT CTC GAG GCA GGA GGG)3’与HL60细胞共培养5 d，观察合成的反义寡核苷酸对HL60细胞c-myc基因的表达和细胞分化的影响。结果：用Northern blot检测出HL60细胞c-myc mRNA的含量减少。说明在反义寡核苷酸的作用下HL60细胞c-myc表达的减少是被阻断在转录阶段的；细胞形态学变化以及非特异性酯酶(NSE)染色、硝基四氮唑蓝(NBT)还原试验均提示HL60细胞出现了分化，部分细胞向粒细胞方向分化，部分细胞向单核细胞方向分化。原癌基因c-myc与细胞凋亡的关系已得到广泛的研究，但是结果并不完全一致。一些科学工作者发现c-myc的过量表达能诱导凋亡，而另外一些人则发现抑制c-myc的表达水平可以诱导凋亡。一些科学家用针对c-myc基因翻译起始部位的15聚的反义寡核苷酸作用于HL60细胞后，发现Myc蛋白的表达受到抑制，并且细胞凋亡增多；而当撤除c-myc反义寡核苷酸后，Myc蛋白表达迅速恢复到反义核酸作用的水平，但细胞凋亡量却明显增多。他们得出了抑制或者增加c-myc的表达都会诱导HL60细胞的凋亡的结论。因此我们初步研究了c-myc反义寡核苷酸作用于HL60细胞后的10 h和20 h的细胞凋亡情况。结果：HL60细胞中加入10 μmol/L和20 μmol/L针对c-myc基因转录起始部位的反义寡苷酸后其细胞凋亡量都较不加任何试剂的对照组细胞凋亡量多。c-myc反义寡核苷酸的浓度越高，则细胞凋亡量越多；随着反义寡核苷酸的作用时间的延长，细胞凋亡量也越多，但在10 h时基本上达到高峰。结论：c-myc反义寡核苷酸对HL60细胞的增殖抑制和诱导分化及凋亡作用，为反义寡核苷酸治疗白血病的临床应用提供理论依据。, 百拇医药
单位：上海医科大学基础医学院生物物理学教研室，上海200032
关键词：
中国病理生理杂志0010181
目的和方法：原癌基因c-myc广泛存在于各型白血病细胞，在人早幼粒白血病细胞系HL60细胞中表达最高。其表达水平随细胞的增殖而增加，随细胞的分化成熟而下降。HL60细胞在不同的诱导剂作用下可向不同的方向分化，如：DMSO、RA等可诱导其向粒细胞方向分化；TPA、1，25-(OH)2 Vitamin D3、DCA等可诱导其向单核/巨噬细胞方向分化。本工作在本室以前工作的基础上进一步采用针对c-myc exonl的162～179核苷酸序列，与c-myc mRNA的5’端转录调控区互补的18 bp硫修饰反义寡核苷酸5’d(CTT CTC GAG GCA GGA GGG)3’与HL60细胞共培养5 d，观察合成的反义寡核苷酸对HL60细胞c-myc基因的表达和细胞分化的影响。结果：用Northern blot检测出HL60细胞c-myc mRNA的含量减少。说明在反义寡核苷酸的作用下HL60细胞c-myc表达的减少是被阻断在转录阶段的；细胞形态学变化以及非特异性酯酶(NSE)染色、硝基四氮唑蓝(NBT)还原试验均提示HL60细胞出现了分化，部分细胞向粒细胞方向分化，部分细胞向单核细胞方向分化。原癌基因c-myc与细胞凋亡的关系已得到广泛的研究，但是结果并不完全一致。一些科学工作者发现c-myc的过量表达能诱导凋亡，而另外一些人则发现抑制c-myc的表达水平可以诱导凋亡。一些科学家用针对c-myc基因翻译起始部位的15聚的反义寡核苷酸作用于HL60细胞后，发现Myc蛋白的表达受到抑制，并且细胞凋亡增多；而当撤除c-myc反义寡核苷酸后，Myc蛋白表达迅速恢复到反义核酸作用的水平，但细胞凋亡量却明显增多。他们得出了抑制或者增加c-myc的表达都会诱导HL60细胞的凋亡的结论。因此我们初步研究了c-myc反义寡核苷酸作用于HL60细胞后的10 h和20 h的细胞凋亡情况。结果：HL60细胞中加入10 μmol/L和20 μmol/L针对c-myc基因转录起始部位的反义寡苷酸后其细胞凋亡量都较不加任何试剂的对照组细胞凋亡量多。c-myc反义寡核苷酸的浓度越高，则细胞凋亡量越多；随着反义寡核苷酸的作用时间的延长，细胞凋亡量也越多，但在10 h时基本上达到高峰。结论：c-myc反义寡核苷酸对HL60细胞的增殖抑制和诱导分化及凋亡作用，为反义寡核苷酸治疗白血病的临床应用提供理论依据。, 百拇医药