针刺对川芎嗪防治豚鼠庆大霉素中毒性耳聋靶向作用的影响(2)
1.2 听性脑干反应(ABR)阈值测试
用1%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔麻醉后,在隔音的电屏蔽室内采用NGT-Ⅱ型脑干诱发电位仪进行ABR测试。记录电极置颅顶正中,参考电极及接地电极分别置于给声耳及对侧耳后皮下。带通滤波为100~3000 Hz的短声刺激,叠加512次,扫描时程10ms,TDH-39型耳机输出,重复率10次/秒,距离豚鼠耳道口0.5 cm,以Ⅲ波为基准确定反应阈。分别在实验前、处死前进行ABR测试。
1.3 标本固定
停药后第2 d,待测试完ABR后,用1%戊巴比妥钠按30mg/kg腹腔注射麻醉后,迅速断头,取出听泡,在解剖显微镜下刺破前庭窗及蜗窗,右侧蜗尖钻孔,灌注10%中性缓冲福尔马林(pH 7.4)后浸入该溶液24 h。
1.4 细胞凋亡及免疫组化检测
常规包埋石蜡切片,厚4 μm,平行蜗轴5 μm连续切片,按原位切口末端标记[terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) dUTP nick end labeling, TUNEL]及Bax/Bcl-2染色试剂盒步骤操作 ......
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