1.2.6PCR限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)

    Hhal反应体系: PCR 反应体系10 μL,10×Buffer 2 μL,Hhal 1μL,加去离子水至20 μL,温和震荡,短暂离心数秒。37℃酶切4 h,然后取10L酶切产物用4%NuSieve3∶1琼脂糖凝胶电泳。

    ApoE基因PCR扩增产物的酶切结果的判断: 本研究借助限制性核酸内切酶Hhal对ApoE基因PCR扩增产物的两个多态性位点(112位和158位氨基酸残基)进行酶切,进而运用RFLP技术对酶切产物进行分析。由于酶切位点不同,故ApoE基因PCR扩增产物经限制性核酸内切酶Hhal作用后可产生6个大小不同的片段,分别为91bp、831p、61bp、72bp、48bp和35bp。6个片段不同的组合构成不同的ApoE基因型:E2/2,91bp、83bp、61bp;E2/3,91bp、83bp、61bp、48bp、35bp; E3/3,91bp、48bp、35bp; E2/4,91bp、83bp、72bp、61bp、48bp、35bp; E3/4,91bp、72bp、61bp、48bp、35bp;E4/4,72bP、61bp、48bp、35bp ......