抑郁症患者脑脊液异常蛋白的表达(2)
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1.3.10蛋白点的初步分析
根据凝胶分析报告中获得的等电点(pI)和分子量(MW),利用互联网上的蛋白质搜索网址(http:∥www.expasy.org/ch2dothergifs/publi/csf.gif)对蛋白质点进行检索,并对比 SWISS-2DPAGE 数据库中的脑脊液 2D-PAGE 参考图谱,根据差异蛋白质在凝胶中的位置和pI值、MW值,结合相关的文献中对这些蛋白进行质谱分析,得出蛋白的具体定性,对这些蛋白点进行初步分析[4]。我们已在考染中发现相应的蛋白质,进一步应用质谱技术定性蛋白质。
对照组方法同病例组。
1.4 统计方法
应用SPSS13进行统计学分析,比较应用配对样本t检验。
2 结 果
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2.1两组一般情况及量表评分比较
两组性别比例及年龄差异均无统计学意义(均P>0.05),脑脊液(CSF)压力、常规和生化检查各项均在正常范围内。
抑郁症组HAMD-17总分高于对照组[(30.62±4.51)vs.(13.65±6.25),t=11.37,P=0.001]。
2.2 两组差异蛋白比较
抑郁症组和对照组脑脊液2-DE比较,在银染胶中发现Apo D(丰度比值比较0.022 vs.0.321)、血浆视黄醇结合蛋白下调(0.032vs.0.541),而Apo A-I(0.556 vs.0.020)上调,差异均大于3倍以上(图1,2)。
3 讨 论
脑脊液存在于脑室系统,被认为是脑和脊髓的淋巴,与脑组织直接接触。脑组织的生化、代谢变化可通过脑脊液得到体现。抑郁症是一种常见的心境障碍,可由各种原因引起,以显著而持久的心境低落为主要临床特征,尸检研究发现抑郁症患者海马、胼胝体膝下区、眶回、背侧前额叶和杏仁核等部位的皮质容量、神经元、胶质细胞数量减少;还发现皮层一些区域神经元体积也减小,如带状皮层前部神经元体积减小约23%。提示抑郁症患者有神经系统器质性病变[5]。传统方法仅限于对个别蛋白质表达的探讨,蛋白质组学技术对有关蛋白质的数量、结构、性质、相互作用和生物学功能进行全面的认识和深入的研究,对抑郁症的病因、发病机制、病理生理过程、生化改变,寻找新的药物靶点都有巨大帮助,已成为疾病研究的新方向和方法。
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本文应用脑脊液比较蛋白组学的方法,通过对抑郁症和正常对照组脑脊液的2-DE比较,在银染胶中发现Apo D、血浆视黄醇结合蛋白下调,而Apo A-Ⅰ上调。血清中的视黄醇结合蛋白在急性感染时降低,且降低的程度与感染的轻重成正比。Puchades等[6]研究在额颞痴呆患者的脑脊液中视黄醇结合蛋白降低提示额颞痴呆可能与炎症有关。本研究中显示视黄醇结合蛋白降低,考虑抑郁症的发生和发展可能与炎症有关。人类的大脑中已发现载脂蛋白A-I、A-IV、D、E、J[7-8],其功能与脑内的脂代谢有关,Yang等[9]应用2-DE联合MALDI-TOF-MS方法对8例经病理证实的难治性中央颞叶癫痫(MTLE)患者和8例正常对照组的海马进行研究,发现海马中Apo A-I的含量是正常对照组的7.5倍(P=0.003)。Apo A-I是高密度脂蛋白(HDL)的主要成分,对保持HDL的结构完整性保持重要的作用。人们已经在人脑组织和脑脊液中发现Apo A-I的存在和改变[10],有明确证据证明Apo A-I与脂质代谢、细胞胆固醇的稳态、调节免疫系统有关,甚至还可能与脑神经的变性和再生有关[11-12]。本研究在抑郁症患者脑脊液中发现Apo A-I的变化,强烈支持抑郁症的神经元与胶质细胞变化的假说。尽管Apo D能和胆固醇、孕酮、胆固醇、花生四烯酸结合,但不能代表其生理学的配基。在周围神经损害部位和Alzheimer's 病患者的脑脊液中Apo D均有升高[13],因此考虑其功能为在中枢和周围神经系统内起保护和修复作用[14]。本研究发现在抑郁症患者的脑脊液中载脂蛋白D有改变,说明在抑郁症患者伴着神经元的变性和免疫异常。
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综上所述,抑郁症患者CSF中上述3种蛋白的差异表达可能与抑郁症的发生有关,有可能为治疗寻找新的药物靶点。
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编辑:岳伟华
2009-09-10收稿,2010-03-01录用, http://www.100md.com(时宝林 郎森阳 时霄冰 王鸿丽)