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编号:13596818
野黄芩苷对血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞的增殖及ERK1/2、p38 MAPK信号通路的影响(3)
http://www.100md.com 2018年3月1日 《中国药房》 20185
     2.5 细胞培养液中HYP含量检测

    将2~3代CFs接种于6孔板中,待细胞贴壁长至70%密度时,更换为不含血清的DMEM培养基饥饿处理24 h,然后按“2.4”项下方法分组、加药,将细胞置于37 ℃、5%CO2恒温培养箱中继续培养48 h后,移液器取细胞培养液500 μL,按照试剂盒说明书操作检测细胞培养液中HYP含量。

    2.6 细胞中ERK1/2、p38 MAPK、p-ERK1/2、p-p38 MAPK蛋白表达水平测定

    取细胞按“2.5”项下方法分组,加入相应浓度SCU处理细胞2 h后,加入Ang Ⅱ处理20 min,然后加入适量的蛋白裂解液冰上裂解细胞,提取总蛋白和磷酸化蛋白,二喹啉甲酸(BCA)法进行蛋白定量。取总蛋白依次经聚丙烯酰氨凝胶电泳、转膜、封闭等步骤后,加入ERK1/2(1 ∶ 1 000)、p-ERK1/2(1 ∶ 1 000)、p38 MAPK(1 ∶ 1 000)、p-p38 MAPK(1 ∶ 1 000)和GAPDH(1 ∶ 5 000)一抗 ......
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