2.4 大鼠胃黏膜组织中Claudin-1、Occludin、VIP蛋白表达水平检测

    采用蛋白印迹法检测。取“2.2”项下各组5只大鼠的胃组织，-80 ℃条件下低温保存。检测时取50 mg胃黏膜组织，按照MinuteTM动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒说明书方法进行总蛋白提取后，采用BCA蛋白定量试剂盒进行蛋白定量。采用SDS-PAGE凝胶制备试剂盒制备12%的分离胶和5%的浓缩胶，取蛋白50μg上样，浓缩胶80 V电泳1 h，分离胶130 V电泳1 h。根据目的蛋白分子量切胶后，60 V转膜2 h，5%脱脂奶粉封闭2 h；分别加入Claudin-1、Occludin、VIP蛋白抗体(1 ∶ 3 000)和β-actin抗体(1 ∶ 8 000)，4 ℃孵育24 h；TBST缓冲液冲洗3次，加入二抗(1 ∶ 7 000)，常温孵育2 h；TBST缓冲液冲洗3次，ECL发光液显影。以β-actin为参比，采用Ima- ge Pro Plus 6.0软件分析目的蛋白条带相对灰度值，以表示蛋白表达水平。

    2.5 统计学方法

    采用SPSS17.0软件对数据进行统计分析 ......