黄连解毒汤乙酸乙酯提取物对光滑念珠菌黏附作用的影响(3)
2.7RT-PCR检测光滑念珠菌黏附相关基因的表达总RNA的提取：2 mL菌液与2 mL终浓度分别为0，320，640，1 280 mg·L-1EAHD混合，另设阳性对照组(FLZ)，37 ℃作用4 h，离心收集菌体，用无菌PBS冲洗3次后进行总RNA提取，并调节RNA浓度，使菌体模板量一致。具体操作方法参照ToyoBo公司MagExtractor-RNA提取试剂说明书进行。引物的设计与合成：根据NCBI基因库查得所需基因序列，并用oligo7软件设计所需引物，委托上海生工合成引物，各引物情况见表1。
表1各引物序列表
Table 1Primer sequences
引物序列(5′-3′)长度/bpEPA1-FGAGGCTCCAATGAACCCAA19EPA1-RCACCGTCACCAGAGTCCAAA20EPA6-FCAGCAGCAGTCCTATCTCA19EPA6-RATCGGTTTGCTACTACTTGGT21EPA7-FTACGGAAGAATGGTTAGTAC18EPA7-RGCTTGCCGGTAAATGATCT19ACT1-FCCCAGAAGAACACCCAGTC19ACT1-RCACCGTCACCAGAGTCCAA19
反转录为cDNA：遵照ToyoBo公司ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover试剂盒说明的反应条件将提取的总RNA反转录成cDNA ......
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