穿心莲甲羟戊酸5—焦磷酸脱羧酶基因的克隆与表达(2)
1 材料与方法
1.1 提取总RNA 穿心莲种植在江西中医药大学神农园。取植株地上部分，按照已报道的方法提取总RNA[5]，所用化学试剂购自生工生物工程(上海)股份有限公司，其他分子生物学试剂购自宝生物工程(大连)有限公司。
1.2 克隆MVD基因 采用Invitrogen公司的PrimeScriptTM 1 st Strand cDNA Synthesis Kit 合成cDNA第一链。根据银杏Ginkgo boliba L. MVD基因(GenBank登录号AY757921)全长序列[6]，在穿心莲转录组拼接序列(GenBank登录号GBJB00000000)中搜索同源序列，获得1条相似度最大的序列(GenBank登录号GBJB01038913)。利用ORF finder软件预测开放阅读框，为1 260 bp。针对ORF设计1对引物， 5′-ATGGCGGCTGAGAAATGGGTG-3′和5′-TCACTTGGGAAACCCGGTTTC-3′ ......
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1.1 提取总RNA 穿心莲种植在江西中医药大学神农园。取植株地上部分，按照已报道的方法提取总RNA[5]，所用化学试剂购自生工生物工程(上海)股份有限公司，其他分子生物学试剂购自宝生物工程(大连)有限公司。
1.2 克隆MVD基因 采用Invitrogen公司的PrimeScriptTM 1 st Strand cDNA Synthesis Kit 合成cDNA第一链。根据银杏Ginkgo boliba L. MVD基因(GenBank登录号AY757921)全长序列[6]，在穿心莲转录组拼接序列(GenBank登录号GBJB00000000)中搜索同源序列，获得1条相似度最大的序列(GenBank登录号GBJB01038913)。利用ORF finder软件预测开放阅读框，为1 260 bp。针对ORF设计1对引物， 5′-ATGGCGGCTGAGAAATGGGTG-3′和5′-TCACTTGGGAAACCCGGTTTC-3′ ......
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