淫羊藿素通过Wnt/β—catenin信号通路促进BMSCs成软骨分化(3)

http://www.100md.com 2016年2月15日 中国中药杂志2016年第4期

     1.7 Western blot检测Ⅱ型胶原蛋白及β-catenin蛋白表达水平 取连续诱导14 d后的细胞，按总蛋白提取试剂盒说明提取细胞总蛋白。BCA法检测蛋白浓度。加入4×蛋白质上样缓冲液95 ℃水浴5 min使其变性。调整每组蛋白上样量为30 μg，在SDS-聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶中电泳；然后用湿转法将凝胶中的蛋白转至PVDF膜上；将PVDF膜置于含5%脱脂奶粉的TBST中室温摇床封闭2 h；分别加入含GAPDH(1∶3 000)，Col2(1∶5 000)，β-catenin(1∶5 000)一抗工作液室温孵育2 h，1×TBST漂洗3×10 min；用含标记辣根过氧化物酶的二抗(1∶6 000)室温孵育2 h；漂洗后于暗室用ECL试剂盒进行曝光、显影、定影。晾干后，以GAPDH为内参，用ImageJ进行灰度分析。

    1.8 统计学分析 采用SPSS 19.0统计软件进行试验数据分析，数据均以±s表示。计数资料2样本间率的比较采用χ²检验 ......