基于nano LCLTQOrbitrapMS/MS的香附四物汤干预原发性痛经模型小鼠卵巢组织差异表达蛋白筛选(2)
1.5.3 数据处理及生物信息学分析 使用ThermoProteome discoverer 1.4(内带SEQUEST搜库软件)搜索引擎对数据进行检索，检索数据库为鼠种属的UniProt数据库。
检索参数：m/z 350～5 000，母离子容忍度1×10-5 Da，碎片离子容忍度为0.8 Da，肽段和蛋白质鉴定FDR均小于1%。采用SIEVE v2.1软件进行无标定量分析寻找相关差异蛋白，组间表达量差异比率1.5以上(即ratio小于0.7或大于1.5)，且ANOVA统计检验P小于0.05，视为差异蛋白。利用DAVID，GO，KEGG，STRING数据库进行蛋白功能注释及生物学过程等分析[10]。选择合适的通路用作蛋白的解释并为后续验证做参考。
1.6 蛋白质验证
采用Western blot方法，将筛选出的重要差异蛋白进行小鼠卵巢(包括正常组、模型组和给药组)蛋白验证。一抗为兔抗人ADRM1(1∶250)及GAPDH(1∶400)多克隆抗体，二抗为辣根过氧化物标记的山羊抗兔抗体(1∶1 000) ......
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检索参数：m/z 350～5 000，母离子容忍度1×10-5 Da，碎片离子容忍度为0.8 Da，肽段和蛋白质鉴定FDR均小于1%。采用SIEVE v2.1软件进行无标定量分析寻找相关差异蛋白，组间表达量差异比率1.5以上(即ratio小于0.7或大于1.5)，且ANOVA统计检验P小于0.05，视为差异蛋白。利用DAVID，GO，KEGG，STRING数据库进行蛋白功能注释及生物学过程等分析[10]。选择合适的通路用作蛋白的解释并为后续验证做参考。
1.6 蛋白质验证
采用Western blot方法，将筛选出的重要差异蛋白进行小鼠卵巢(包括正常组、模型组和给药组)蛋白验证。一抗为兔抗人ADRM1(1∶250)及GAPDH(1∶400)多克隆抗体，二抗为辣根过氧化物标记的山羊抗兔抗体(1∶1 000) ......
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