八角莲愈伤组织中开环异落叶松脂素脱氢酶基因克隆、表达及功能鉴定(2)

http://www.100md.com 2016年12月15日 《中国中药杂志》2016年第24期

     1.2 样品 野生八角莲植株采自广西壮族自治区龙州县，由广西药用植物园袁经权副研究员鉴定为小檗科八角莲属植物八角莲D. versipellis，标本存放于中国医学科学院药物研究所标本室(ID-26856)。八角莲培养细胞诱导自野生八角莲的叶片，培养细胞的诱导采用附加α-萘乙酸(α-NAA，0.5 mg·L^-1)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D，1.0 mg·L^-1)、蔗糖(30 g·L^-1)和琼脂(7 g·L^-1)的MS固体培养基，灭菌前调pH为5.8。继代培养采用附加α-NAA(0.2 mg·L^-1)、6-BA(6-苄基嘌呤，0.2 mg·L^-1)、2，4-D(0.5 mg·L^-1)、蔗糖(30 g·L^-1)和琼脂(7 g·L^-1)的6，7-V固体培养基，于黑暗(25±2) ℃静止培养[9] ......