人参黑斑病菌对人参根系分泌物中氨基酸的化学趋向性响应研究(2)

http://www.100md.com 2017年6月1日 《中国中药杂志》2017年第11期

     2 方法

    2.1 培养基及氨基酸种类的选择

    为了更清晰地观察到菌丝生长的情况所以选择孟加拉红培养基进行趋化性实验；而对于氨基酸的选择是依据文献确定此4种氨基酸在人参中的含量相对较高，且在人参根系分泌物中检测到这些氨基酸。以无菌水为对照组来进行实验。

    2.2 菌液的制备

    刮取适量人参黑斑病菌菌丝加入到装有10 mL无菌水的EP管中(在无菌操作环境中进行)，在漩涡混合器将其混匀，用血球计数板计算孢子浓度，最终得到浓度为1×10⁶ CFU·mL^-1的孢子懸浮液，待用。

    2.3 不同氨基酸趋化液的制备

    用灭菌后的蒸馏水分别配制精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸及苏氨酸，使其分别的浓度依次为0.2，2，20，200 mg·L^-1的趋化液，经0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，待用。

    2.4 化学趋向性试验

    根据匙坤等的方法[7]，在孟加拉红固体培养基上依次等距离打3个孔 ......