牛磺酸通过p38通路对缺氧内皮细胞ICAM—1，VCAM—1表达的影响(2)

http://www.100md.com 2017年6月15日 《中国中药杂志》2017年第12期

     1.2 原代培养 取新鲜胎牛肺分离肺动脉，至于缓冲盐溶液中(HEPEs，1%青/链霉素)，在超净台内纵向剪开血管。使用无菌刀片从血管内表面刮取细胞，然后移入胶原酶溶液(3 mL/血管，盛于35 mm培养皿)。刮取细胞完毕后，将细胞转移至15 mL EP管。25 ℃温育细胞8～9 min后1 500 r·min^-1離心10 min沉淀细胞。弃上清，洗细胞3次。离心细胞弃上清。重悬细胞，培养瓶中48 h后清除非黏附细胞和杂质。

    1.3 MTT法检测Tau对PAECs增殖的影响 将0.25%胰蛋白酶置于细胞瓶中消化细胞，10 s后将细胞收集到1个EP管中混匀，均匀接种于96孔板，每孔都加入混匀的细胞悬液200 μL，置于37 ℃，5%CO₂培养箱中孵育。贴壁后，按照：H(不加药)，TL(25 mmol·L^-1)，TM(50 mmol·L^-1)，TH(100 mmol·L^-1)加药缺氧细胞箱孵育12 h ......