从猪胆膏中分离纯化鹅去氧胆酸的新工艺
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鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)，又称3α，7α二羟基5β胆烷酸，是动物体胆汁中的一种生化物质，临床上不仅用作溶解胆固醇类结石和纠正饱和胆汁的药物[1]，还具有显著的平喘、抗炎、镇咳和祛痰作用[2，3]。鹅去氧胆酸可以作为昂贵的熊去氧胆酸合成原料，它们都是治疗胆道疾病的有效药物[4]。近年来，有人用新型鹅去氧胆酸类手性分子钳做氨基酸手性识别的研究[5]。国内许多企业都把从动物胆汁中提取胆红素后的物质作为废弃物，而作者从提取胆红素后的猪胆膏中再分离纯化出鹅去氧胆酸，这样既充分利用猪胆膏的原料，提高胆汁的利用率，又增加经济效应。传统的分离方法采用有毒的试剂氯化钡，对人体和环境有一定的伤害和污染，作者首先用氯化钙代替氯化钡，利用鹅去氧胆酸钙盐与杂胆酸钙盐，脂肪酸钙盐在水中溶解度不同，分离纯化得CDCA。再利用胆酸等亲水性杂质与鹅去氧胆酸在稀氨水中在不同pH值下溶解度不同，用稀氨水作萃取剂，来去除胆酸等亲水性杂质，得精品CDCA。
1 实验方法
1.1 仪器与药品 (1)药品:已提取胆红素的猪胆膏,含CDCA 10%,淮南市绿野生物有限公司提供。氢氧化钠;氯化钙;盐酸;乙酸乙酯;氨水;均为分析纯。(2)仪器：加热套，接触式调压器，磁力搅拌器，真空干燥箱，双浴式熔点测定器,硅胶GF254薄层板(烟台市化学工业研究所)，旋光仪(WZZ2B上海精密仪器有限公司)，德国BRUKER VECTOR 33傅立叶变换红外光谱仪等。
1.2 分离纯化 (1)粗品CDCA制备：称取猪胆膏10.0 g置于250 ml烧杯中，加入NaOH 1.0 g，用适量水搅拌充分溶解，过滤。向滤液中加入CaCl2 1.0 g,充分搅拌溶解，析出沉淀，过滤，得胆酸钙盐。钙盐用水反复溶解，过滤，弃去不溶物，滤液用4 mol/L HCl调pH值为3，析出CDCA沉淀。过滤，沉淀用水洗至中性，60℃真空干燥，得粗品CDCA 4.2 g。(2)粗品CDCA纯化：粗品CDCA用乙酸乙酯回流溶解2 h，加入活性炭脱色，继续加热回流0.5 h，趁热过滤，溶液结晶得较纯CDCA 0.68 g。(3)精品CDCA制备：将(2)所得CDCA用乙酸乙酯配成浓度为10%的溶液，再用1%的氨水4 ml分两次萃取，所得溶液用稀氨水调pH值为8，收集下层稀氨水溶液，再用稀HCl调pH值为7，75℃真空干燥，得精品CDCA 0.26 g。
2 结果与讨论
2.1 性能表征 (1)旋光度的测定: 根据公式[α]20D=α·100 LC测定。式中：20为实验时温度20℃；D是指所用钠灯光源D线，波长589毫微米；α为测得的旋光度(度)；L为样品管的长度(分米)；c为浓度(g/100 ml)。2#样品：温度20℃，样品浓度5.0 g/100 ml,样品管长L=1 dm,α=0.55度;3#样品：温度20℃，样品浓度4.5 g/100 ml,样品管长L=1 dm,α=0.52度。(2)对1.2项下(2)、(3)所得产品进行薄层色谱(TLC)检测、熔点、旋光度的测定所得结果见表1。(3)产物的红外光谱图：为进一步确定产物的结构，我们对产物进行红外光谱的测试(KBr压片)，见图1。在图1中，3424 cm-1归属为分子中的OH的吸收峰，2937 cm-1归属为分子中的CH伸缩振动吸收峰，1708 cm-1归属为分子中COOH的吸收峰，1380 cm-1归属为分子中CH3的吸收峰。
表1 CDCA粗品与精品的性能表征上比较(略)
注:纯度的测定根据淮南绿野生物有限公司提供标准样品做TLC对照，薄层色谱展开剂:异丙醇：氯仿∶醋酸=15∶15∶2(V/V/V)，碘蒸气显色
图1 CDCA的红外光谱图(略)
2.2 粗品CDCA制备时，产品在真空干燥时，文献[1]报道温度为80℃，作者在实验过程中发现，当温度为80℃时，产品已熔化，冷却后分析固体不再是CDCA了。作者认为粗产品含杂质较多，当在80℃真空干燥时，物质已发生变化。经摸索，在60℃真空干燥较好。
2.3 钙盐溶液的pH值对粗品CDCA收率和纯度有很大影响。pH值大于3，沉淀量很少甚至没有,收率很低;pH值小于3，会引入杂质，纯度很低。
2.4 稀氨水的浓度和用量对精品CDCA的纯度和收率有很大影响。稀氨水浓度大、用量多，所得CDCA纯度高，但收率低；稀氨水浓度小、用量少，所得CDCA收率高，但纯度低(见表2)。本实验用1%的氨水4 ml分二次萃取效果较好。CDCA产品呈白色。
2.5 精品CDCA制备时，作者曾参照文献[6]做，但并未达到其所述的结果，经试验后，确定为本实验方法。
表2 不同浓度和用量的稀氨水对CDCA的纯度和收率的影响(略)
3 结论
用CaCl2代替BaCl2从提取胆红素后的猪胆膏废弃物中分离纯化出CDCA，纯度达80%，收率6.8%。用稀氨水有效去除CDCA中胆酸等亲水性杂质，提高CDCA纯度，纯度高于96%，收率2.6%。
参考文献
1 李良铸，李明哗.最新生化药物制备技术.第1版北京：中国医药科技出版社，2002.361362.
2 关红，李培峰，赵红霞.鹅去氧胆酸的镇咳、平喘及祛痰作用.中药材，2004，27：206208.
3 李培锋，关红，赵红霞，等.鹅去氧胆酸的平喘及抗炎作用机理研究.中国中东杂志，2004，29：349352.
4 柳湘云，莫欣，刘小瑞.熊去氧胆酸的新合成路线和方法的研究.哈尔滨师范大学自然科学学报，2000,16:6971.
5 赵志刚，牟其明，李玲，等.新型鹅去氧胆酸类手性分子钳对氨基酸的手性识别.四川大学学报(自然科学版),2003,40:931934.
6 高玉琼，刘建华，霍欣.一种鹅去氧胆酸粗品的精制方法.中国：CN1432579A，2003，7：30.
作者单位： 232001 淮南市，安徽理工大学化学工程系
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