自体外周血干细胞采集12例分析
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【摘要】 目的 探讨MCS+血细胞分离机在自体外周血干细胞采集中的使用。方法 总结12例27次采用MCS+血细胞分离机进行自体外周血干细胞采集过程,分析采集成功率、血液学参数、不良反应发生率等情况。结果 12例共采集27次。其中1例采集1次；7例采集2次；4例采集3次；每次循环血量为121～198 ml/kg，平均159 ml/kg；每次采集时间210～386 min，平均287 min；采集过程顺利，每例采集的单个核细胞(MNC)均>2.0×108/kg，CD34+细胞>2×106/kg，全部病例均获造血功能重建，无移植相关死亡；27次采集过程中出现不良反应8次,男1次,女7次,均为枸橼酸盐毒性反应；快速回输复苏后的造血干细胞,未见严重不良反应。结论 采用MCS+血细胞分离机进行自体外周血干细胞采集方法可靠,平均2.2次采集可达到临床治疗要求。
【关键词】 自体外周血干细胞；采集；MCS+血细胞分离机
自体外周血干细胞(autologous peripheral blood stem cells,APBSC)移植近年来得到了迅速应用，已经代替自体骨髓成为高剂量化放疗后自体造血干细胞的主要来源[1]。但生理状态下，自体外周血中造血干细胞的数量不能满足重建造血功能的需要, 所以采集到足够高质量的APBSC是移植成功的关键环节之一，本文总结分析2002年至今12例患者共27次的自体外周血干细胞采集经过，报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
本组12例中，男5例，女7例；年龄19～57岁，平均40岁；体重53～70 kg，平均体重60 kg。急性白血病5例，淋巴瘤5例，多发性骨髓瘤2例。一般状态卡氏评分(Karnofsky perform status,KPS)90～100分， 动员前接受化疗的周期数为4～6周期。
1.2 方法
1.2.1 采集前准备(APBSC动员)：采用化疗联合重组粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)动员，动员期间每日查外周血常规1次，当白细胞降至最低点的次日开始每天皮下注射rhGCSF 300 μg，直至APBSC采集结束前1 d。rhGCSF实际给药剂量均为300 μg·kg-1·d-1，以体重计算的rhGCSF中位剂量为5.00(4.29～5.66)μg·kg-1·d-1，开始给药的中位时间为化疗开始后的第11天(9～13 d)，给药的中位持续时间为5 d(4～7 d)。
1.2.2 APBSC采集方案：当白细胞恢复到5.0×109/L以上时开始采集APBSC，采集连日进行，使用MCS+型血细胞分离机(美国Haemonetics公司)，采集的目标是单个核细胞(MNC)>2.0×108/kg，CD34+细胞>2.0×106/kg。
1.2.3 采集后处理：外周血干细胞的冷冻保存于无菌环境下按4∶1加入造血干细胞低温保护剂(中国科学院上海生理研究所、上海三生生物技术有限公司研制)，不需速率降温直接放入-80℃冰箱保存。
2 结果
2.1 APBSC采集相关数据
2.1.1 采集过程中主要参数变化：见表1、2。表1 APBSC采集时白细胞(WBC)和ANC的变化检测时间(略)表2 APBSC采集时的血液学参数采集次序 (略)
2.1.2 APBSC采集次数及采集的细胞量：开始采集的中位时间为化疗后第15(13～18)d，采集的中位持续时间为2.2(1～3)d。其中1例采集1次，7例采集2次，4例采集3次。见表3、4。 表3 每次采集的细胞数量采集次数(略)表4 采集的细胞总数采集次数(略)
2.2 APBSC采集相关并发症
27次采集过程中出现不良反应8次,男1次,女7次,均为枸橼酸盐毒性反应,属轻症状,仅表现为口周、脸部或手指发麻,伴有恶心呕吐1次,静脉补充钙剂后逐渐缓解。
2.3 移植后造血功能重建
全部病例均获造血功能重建,无移植相关死亡。快速回输复苏后的造血干细胞,未见严重不良反应。回输后12例粒细胞恢复至0.5×109/L以上的中位时间为12(10～14)d，血小板恢复到20×109/L以上的中位时间为11(9～15)d。
3 讨论
生理状态下，人外周血中只存在极少量的造血干细胞，不能满足重建造血功能的需要，将骨髓中的造血干细胞在短时间内快速大量地动员进入外周血，并且能够有效地采集到足够高质量的APBSC是移植成功的关键环节之一。
GCSF刺激骨髓,能使之快速释放幼稚细胞到血液中,但这种情况维持时间较短[2],因此,应动态观察外周血中WBC、MNC和CD34+细胞数量等来决定最佳采集时机。曾有不同的观点，有学者认为，应在外周血白细胞恢复的早期即开始采集，这样可以采集到高质量的APBSC，国内有学者做过这方面的研究工作，但若要采集到足够数量的PBSC，则需要将采集次数增加到4±1次[3]。另一部分学者认为，若等到外周血的白细胞恢复到5×109/L以上时开始采集，则可减少采集次数[4]。本组将APBSC开始采集的时间规定为白细胞恢复至5.0×109/L以上、中位采集2.2(1～3)次，明显减少了采集次数，节省了费用和时间，也减少了APBSC大量冻存及回输引起的二甲基亚砜对人体的毒性。
目前自体外周血干细胞的采集以机采为主,MCS+是一种离心式断续采集血细胞分离机,根据血液各成份密度不同,离心杯中的全血被分为不同层面,较密的细胞成分移到离心杯外侧,较轻的成分移到中央,通过光电探测器探测各层面浊度不同来收集所需干细胞层面,即白膜层。可根据出红情况来设定并调整有关参数,既可减少血小板的丢失,又可收集到更完整的白膜层。本文每次循环血量为121～198 ml/kg，平均159 ml/kg。每次采集时间210～386 min，平均287 min；每例采集的MNC均>2.0×108/kg，CD34+细胞>2×106/kg；12例共采集27次，平均2.2次采集可达到临床治疗要求，说明采集效果满意。
应用血细胞分离机在外周血干细胞采集过程中及术后,不良反应及并发症时有发生,若不注意预防和及时处理,将影响采集的顺利进行,甚至引起严重后果。不良反应及并发症主要有术中即发的枸橼酸盐毒性反应、低血容量反应、发热反应及术后继发贫血、血小板减少、感染等，其中以枸橼酸盐毒性反应最为多见。这是因为抗凝剂中含有枸橼酸盐，当枸橼酸盐进入体内的速度超过机体代谢能力时，枸橼酸盐可螯合血液中的钙离子, 形成不能离子化的枸橼酸钙，引起血液中游离钙离子下降，引起中毒及低钙血症[5]。本文27次采集过程中出现不良反应8次,女7次,男1次,均为轻度枸橼酸盐毒性反应，经补充钙剂，调低全血流速,全血与ACD的比例降为(12～13)∶1等措施后逐渐缓解，不影响采集的顺利进行。
静脉穿刺也是采集成功与否的关键环节，由于肿瘤病人一般都经过多次化疗,血管受到一定的损伤,应注意选择适当的血管。MCS+血细胞分离机采用单针采集，如果患者肘正中静脉过细及弹性较差，不能耐受长时间的采集，可选择股静脉置管。本文12例中，肘正中静脉穿刺8例，2例股静脉穿刺，2例肘正中静脉穿刺采集失败后改为股静脉穿刺。采集结束后深部静脉均采用肝素封管，无局部不良反应发生。
总之，提高干细胞移植成功率，外周血干细胞的采集是重要的环节之一。我们使用MCS+血细胞分离机采集外周血造血干细胞，采集效果满意，可满足临床移植治疗的需要。
参考文献
1 王金铠自体外周血干细胞移植治疗自身免疫性疾病河北医药，2004，26：221223
2 Hoglund M,Smedmyr B,Bengtsson M,et al.Mobilization of CD34+ cell by glycosylated and nonglycosylated GCSF inhealthyvolunteersa comparative study.Eur J Haematol,1997,59:177183.
3 石远凯.恶性淋巴瘤的自体造血干细胞移植.白血病,2000，9：262265.
4 Goldschmidt H,Hegenbart U,Haas R,et al.Mobilization of peripheral blood progenitor cells with highdose cyclophosphamide (4 or 7 g/m2) and granulocyte colonystimulating factor in patients with multiple myeloma.Bone Marrow Transplant,1996,17:691697.
5 田兆嵩主编.临床输血学.第2版北京:人民卫生出版社,1998.131.
作者单位： 325000 浙江省温州市中心血站业务科(陈李)；温州市第三人民医院血液科(朱淼勇)
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