早期梅毒实验室检查的现状(1)
【关键词】 早期梅毒；实验室检查
文章编号：1003-1383(2008)04-0483-03中图分类号：R 759.104.46 文献标识码：A
梅毒是由梅毒螺旋体(苍白螺旋体)感染引起的一种慢性全身性传染性传播疾病，对健康的危害程度仅次于艾滋病，几乎可以引起全身所有组织器官的损害和病变，导致功能障碍。近年来，梅毒在我国的再次流行，发病率呈逐年上升的趋势。梅毒早期主要侵犯皮肤黏膜，晚期可累及心血管及中枢神经系统等重要器官[1]，给身体造成严重的损害，既严重危害了社会健康，又影响了家庭的安定。因此，对梅毒进行早期诊断、早治疗，对控制其蔓延至关重要。敏感性、特异性高的梅毒检测方法对梅毒的诊断最有效。根据梅毒的生物学及免疫学特性，目前国内外所用的梅毒螺旋体的检测方法亦很多，现将主要的检测方法作一综述。
非特异性梅毒血清学试验的阳性检出率
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非特异性梅毒血清学检查方法有快速血浆反应素环状卡片实验(RPR)和甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST)两种。RPR是20世纪80年代问世的非特异性梅毒血清学试验,也是目前国内各实验室广泛应用的主要筛查试验。RPR法检测血清中非特异性抗体,所用抗原为标准的牛心肌脂抗原,主要用于早期梅毒的诊断,王剑等[2]报道RPR用于早期梅毒检测阳性率为75%~85%。该方法有操作简便、迅速、结果容易判定、不需灭活、不需显微镜、抗原不需新鲜配制等优点,适用于大量标本检测,目前许多血站用此试验对献血者进行梅毒普查。但凡属于密螺旋体属的螺旋体均具有与梅毒螺旋体完全一样的类脂质抗原，其主要成份是心拟脂，可激发机体产生抗体，并与牛心磷脂发生反应，因此易出现生物学假阳性反应，且当抗体含量过高时易出现假阴性反应,即前带现象(prozonephenomnon)[3]。路麒等[4]通过实验发现温度较低(低于9℃)时，RPR的假阴性率达10.1%时会有漏检。而TRUST试验所用的抗原是从牛心提取的心磷脂和从鸡蛋黄提取的卵磷脂及胆固醇,与RPR方法比较,TRUST试验是在VDRC试剂中加了甲苯胺红溶液,阳性呈红色有不同程度的凝块悬于液体中,在白色纸卡上结果清晰易读,简便快速,稳定性好,对非特异性反应素抗体导致的阳性标本，TRUST法的检出率和重复性都强于RPR法,EbelA等[5]通过实验比较认为TRUST法比RPR效价测定高一个滴度，根据滴度的变化有助于判断梅毒的治疗效果、复发或再感染,这是其他方法不可替代的。缺点是许多因素影响结果,如高脂血症和抗心磷脂抗体阳性的血清均可干扰而出现假阳性结果[6]。黄波等[7]报道此法对早期梅毒检测出现较高的假阴性(10%)。王治萍等[8]通过改进实验方法发现，应用全自动微孔板法改进TRUST,实现机械操作，减少了人为因素及标本差错，可使其敏感度和特异性提高3%以上。
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重组基因与免疫反应的临床应用
采用纯化重组基因的梅毒抗原,以胶体金作为指示标记,于硝酸纤维素膜上进行反应(胶体金法),以双抗原夹心法原理，快速定性检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体特异性抗体，具有快速、简便、灵敏度高、特异性强及无需仪器设备之特点。王华等[9]报道此方法对早期梅毒的检出率可达97.22%，其特异性和灵敏度与TPPA相近，对缩短TP的“窗口期”更有临床意义，比TRUST能更早发现梅毒,抗体滴度低时更易观察结果，可最大限度地避免实验过程中标本处理、温度、湿度、pH值等因素对结果的影响。由于胶体金法试剂成本低,符号显示结果明确,操作简便,可分批或单人份检测,结果易保存。因此,采用灵敏特异的梅毒螺旋体抗体胶体金法可以完全替代TRUST,作为大批量标本梅毒筛查的理想方法,又可以作为诊断试验。但梁大立等[10]在实验过程中发现血清或血浆中特异性梅毒螺旋体抗体浓度过低时,梅毒螺旋体抗体胶体金法会产生假阴性反应(1.57%),这就需要与TPPA方法结合进行综合判断。
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梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TPELISA)是一种通过基因工程,经利用梅毒螺旋体多肽抗原(KD47、KD42、KD15)包被于反应板的试验,用双抗原夹心法测定梅毒特异性抗体，为近年来应用TP基因工程研制成功而建立的方法。Castro等[11]报道其灵敏度、特异度较高。TPELISA方法主要检测梅毒螺旋体IgG和IgM抗体, 俞伟国等[12]和程艳杰等[13]报道此类方法对早期梅毒的诊断，其敏感度在80%～99.5%,特异性在90.2%～100%。此法检测操作简便,取样量少,不受样本中纤维蛋白和溶血等影响,一次可进行多份样本的检测,具有敏感性高,特异性好,能自动化,判断结果客观准确,成本低,操作简便，适用于大量样本,试剂盒价格便宜,设备简单,试剂稳定,受干扰因素少,结果打印存档,便于实验室标准化和实验室管理等优点,是一种集筛查和确诊为一体的检测梅毒的好方法,值得临床大力推广。ELISA法对梅毒患者的检出率与患者血清中梅毒螺旋体特异性抗体的含量有关,当患者血清梅毒螺旋体特异性抗体含量低于试剂检测限时,就有可能出现假阴性，且TPELISA检测的是梅毒螺旋体总抗体,在梅毒患者治愈后相当长时间仍为阳性, 因此Manavi等[14]认为不利于临床判定是近期感染还是曾经感染和疾病状态。
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免疫PCR法检测梅毒螺旋体是目前最敏感的一种微量分子检测方法,应用于检测梅毒螺旋体特异性抗体,可直接检查病原体的基因。史俊岩等[15]对120份梅毒血清同时进行免疫PCR和ELISA法检测，结果免疫PCR法阳性检出率为81.7%,而ELISA法仅为59.2%，认为在相同条件下免疫PCR法敏感度优于ELISA法。俞伟国等[12]通过实验比较也认为免疫PCR法诊断一期梅毒的灵敏度高于ELISA及RPR法，其灵敏度、特异性均较高,且结果报告迅速，具有临床推广价值,这对于梅毒患者的早期诊断和及时治疗及发病机制研究具有重要意义,尤其是对可疑梅毒患者和梅毒螺旋体特异性抗体阴性输血人员的复检具有重要的应用价值。但必须严格操作,防止假阳性的产生。
直接观察梅毒病原体的检测方法
直接观察分泌物中的梅毒螺旋体,如见到运动活泼的苍白螺旋体可直接诊断梅毒。是最特异、最准确的诊断方法,但灵敏度低。
暗视野检查法是梅毒病原体检测的主要方法，其原理是取皮肤及黏膜破溃的组织液，用暗视野显微镜直接观察到病灶分泌物中的梅毒螺旋体,适用于有硬下疳、扁平湿疹等典型皮肤黏膜损害的早期梅毒患者，在早期梅毒中较RPR、TPPA敏感，通过结合临床症状可直接诊断早期梅毒，被视为诊断的金标准。但傅宗芬等[16]认为，由于受病程、某些外加因素以及检测人员技术水平的影响,敏感性较低(为76.5%)。暗视野检查法(DF)适用于早期梅毒的诊断,该方法不仅操作简单,且经济、快速,但此法很难从干疹或血液中检测梅毒螺旋体，对晚期及隐性梅毒病人或口腔病灶材料也不适用。目前多应用
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染色法，常用的有银染色或刚果红染色。刮取损害表面渗出物，薄涂于洁净玻片上进行镀银染色，镀银染色能使梅毒螺旋体染成棕褐色或黑褐色，杨光河等[17]报道采用此法其阳性率可达97.3%，高出暗视野检查法，且染色层次清楚，反差明显，形态清晰，梅毒螺旋体易被着色辩认，封片后可永久保存标本，具有快速、简便和可靠的诊断价值，是早期梅毒的优选实验方法。而刚果红染色是取患者皮损处的组织渗出液直接印于玻片上进行染色。其染色方法简单、方便经济，技术易掌握，镜下菌体形态固定，易于观察、识别，特异性染色干扰影响少，唐书谦等[18]比较银染色法和刚果红染色法对早期梅毒患者进行梅毒螺旋体检查，发现银染色法的阳性率为50%，而刚果红染色法的阳性率为70%，认为刚果红染色法阳性率高于镀银染色法。及时对临床上出现的无痛性溃疡患者进行TP检测，对于早期梅毒的诊断很有必要。但银染色和刚果红染色不能观察梅毒螺旋体的运动方式，因此与类似梅毒螺旋体的其他物质易混淆。, 百拇医药(韦莹慧)
文章编号：1003-1383(2008)04-0483-03中图分类号：R 759.104.46 文献标识码：A
梅毒是由梅毒螺旋体(苍白螺旋体)感染引起的一种慢性全身性传染性传播疾病，对健康的危害程度仅次于艾滋病，几乎可以引起全身所有组织器官的损害和病变，导致功能障碍。近年来，梅毒在我国的再次流行，发病率呈逐年上升的趋势。梅毒早期主要侵犯皮肤黏膜，晚期可累及心血管及中枢神经系统等重要器官[1]，给身体造成严重的损害，既严重危害了社会健康，又影响了家庭的安定。因此，对梅毒进行早期诊断、早治疗，对控制其蔓延至关重要。敏感性、特异性高的梅毒检测方法对梅毒的诊断最有效。根据梅毒的生物学及免疫学特性，目前国内外所用的梅毒螺旋体的检测方法亦很多，现将主要的检测方法作一综述。
非特异性梅毒血清学试验的阳性检出率
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非特异性梅毒血清学检查方法有快速血浆反应素环状卡片实验(RPR)和甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST)两种。RPR是20世纪80年代问世的非特异性梅毒血清学试验,也是目前国内各实验室广泛应用的主要筛查试验。RPR法检测血清中非特异性抗体,所用抗原为标准的牛心肌脂抗原,主要用于早期梅毒的诊断,王剑等[2]报道RPR用于早期梅毒检测阳性率为75%~85%。该方法有操作简便、迅速、结果容易判定、不需灭活、不需显微镜、抗原不需新鲜配制等优点,适用于大量标本检测,目前许多血站用此试验对献血者进行梅毒普查。但凡属于密螺旋体属的螺旋体均具有与梅毒螺旋体完全一样的类脂质抗原，其主要成份是心拟脂，可激发机体产生抗体，并与牛心磷脂发生反应，因此易出现生物学假阳性反应，且当抗体含量过高时易出现假阴性反应,即前带现象(prozonephenomnon)[3]。路麒等[4]通过实验发现温度较低(低于9℃)时，RPR的假阴性率达10.1%时会有漏检。而TRUST试验所用的抗原是从牛心提取的心磷脂和从鸡蛋黄提取的卵磷脂及胆固醇,与RPR方法比较,TRUST试验是在VDRC试剂中加了甲苯胺红溶液,阳性呈红色有不同程度的凝块悬于液体中,在白色纸卡上结果清晰易读,简便快速,稳定性好,对非特异性反应素抗体导致的阳性标本，TRUST法的检出率和重复性都强于RPR法,EbelA等[5]通过实验比较认为TRUST法比RPR效价测定高一个滴度，根据滴度的变化有助于判断梅毒的治疗效果、复发或再感染,这是其他方法不可替代的。缺点是许多因素影响结果,如高脂血症和抗心磷脂抗体阳性的血清均可干扰而出现假阳性结果[6]。黄波等[7]报道此法对早期梅毒检测出现较高的假阴性(10%)。王治萍等[8]通过改进实验方法发现，应用全自动微孔板法改进TRUST,实现机械操作，减少了人为因素及标本差错，可使其敏感度和特异性提高3%以上。
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重组基因与免疫反应的临床应用
采用纯化重组基因的梅毒抗原,以胶体金作为指示标记,于硝酸纤维素膜上进行反应(胶体金法),以双抗原夹心法原理，快速定性检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体特异性抗体，具有快速、简便、灵敏度高、特异性强及无需仪器设备之特点。王华等[9]报道此方法对早期梅毒的检出率可达97.22%，其特异性和灵敏度与TPPA相近，对缩短TP的“窗口期”更有临床意义，比TRUST能更早发现梅毒,抗体滴度低时更易观察结果，可最大限度地避免实验过程中标本处理、温度、湿度、pH值等因素对结果的影响。由于胶体金法试剂成本低,符号显示结果明确,操作简便,可分批或单人份检测,结果易保存。因此,采用灵敏特异的梅毒螺旋体抗体胶体金法可以完全替代TRUST,作为大批量标本梅毒筛查的理想方法,又可以作为诊断试验。但梁大立等[10]在实验过程中发现血清或血浆中特异性梅毒螺旋体抗体浓度过低时,梅毒螺旋体抗体胶体金法会产生假阴性反应(1.57%),这就需要与TPPA方法结合进行综合判断。
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梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TPELISA)是一种通过基因工程,经利用梅毒螺旋体多肽抗原(KD47、KD42、KD15)包被于反应板的试验,用双抗原夹心法测定梅毒特异性抗体，为近年来应用TP基因工程研制成功而建立的方法。Castro等[11]报道其灵敏度、特异度较高。TPELISA方法主要检测梅毒螺旋体IgG和IgM抗体, 俞伟国等[12]和程艳杰等[13]报道此类方法对早期梅毒的诊断，其敏感度在80%～99.5%,特异性在90.2%～100%。此法检测操作简便,取样量少,不受样本中纤维蛋白和溶血等影响,一次可进行多份样本的检测,具有敏感性高,特异性好,能自动化,判断结果客观准确,成本低,操作简便，适用于大量样本,试剂盒价格便宜,设备简单,试剂稳定,受干扰因素少,结果打印存档,便于实验室标准化和实验室管理等优点,是一种集筛查和确诊为一体的检测梅毒的好方法,值得临床大力推广。ELISA法对梅毒患者的检出率与患者血清中梅毒螺旋体特异性抗体的含量有关,当患者血清梅毒螺旋体特异性抗体含量低于试剂检测限时,就有可能出现假阴性，且TPELISA检测的是梅毒螺旋体总抗体,在梅毒患者治愈后相当长时间仍为阳性, 因此Manavi等[14]认为不利于临床判定是近期感染还是曾经感染和疾病状态。
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免疫PCR法检测梅毒螺旋体是目前最敏感的一种微量分子检测方法,应用于检测梅毒螺旋体特异性抗体,可直接检查病原体的基因。史俊岩等[15]对120份梅毒血清同时进行免疫PCR和ELISA法检测，结果免疫PCR法阳性检出率为81.7%,而ELISA法仅为59.2%，认为在相同条件下免疫PCR法敏感度优于ELISA法。俞伟国等[12]通过实验比较也认为免疫PCR法诊断一期梅毒的灵敏度高于ELISA及RPR法，其灵敏度、特异性均较高,且结果报告迅速，具有临床推广价值,这对于梅毒患者的早期诊断和及时治疗及发病机制研究具有重要意义,尤其是对可疑梅毒患者和梅毒螺旋体特异性抗体阴性输血人员的复检具有重要的应用价值。但必须严格操作,防止假阳性的产生。
直接观察梅毒病原体的检测方法
直接观察分泌物中的梅毒螺旋体,如见到运动活泼的苍白螺旋体可直接诊断梅毒。是最特异、最准确的诊断方法,但灵敏度低。
暗视野检查法是梅毒病原体检测的主要方法，其原理是取皮肤及黏膜破溃的组织液，用暗视野显微镜直接观察到病灶分泌物中的梅毒螺旋体,适用于有硬下疳、扁平湿疹等典型皮肤黏膜损害的早期梅毒患者，在早期梅毒中较RPR、TPPA敏感，通过结合临床症状可直接诊断早期梅毒，被视为诊断的金标准。但傅宗芬等[16]认为，由于受病程、某些外加因素以及检测人员技术水平的影响,敏感性较低(为76.5%)。暗视野检查法(DF)适用于早期梅毒的诊断,该方法不仅操作简单,且经济、快速,但此法很难从干疹或血液中检测梅毒螺旋体，对晚期及隐性梅毒病人或口腔病灶材料也不适用。目前多应用
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染色法，常用的有银染色或刚果红染色。刮取损害表面渗出物，薄涂于洁净玻片上进行镀银染色，镀银染色能使梅毒螺旋体染成棕褐色或黑褐色，杨光河等[17]报道采用此法其阳性率可达97.3%，高出暗视野检查法，且染色层次清楚，反差明显，形态清晰，梅毒螺旋体易被着色辩认，封片后可永久保存标本，具有快速、简便和可靠的诊断价值，是早期梅毒的优选实验方法。而刚果红染色是取患者皮损处的组织渗出液直接印于玻片上进行染色。其染色方法简单、方便经济，技术易掌握，镜下菌体形态固定，易于观察、识别，特异性染色干扰影响少，唐书谦等[18]比较银染色法和刚果红染色法对早期梅毒患者进行梅毒螺旋体检查，发现银染色法的阳性率为50%，而刚果红染色法的阳性率为70%，认为刚果红染色法阳性率高于镀银染色法。及时对临床上出现的无痛性溃疡患者进行TP检测，对于早期梅毒的诊断很有必要。但银染色和刚果红染色不能观察梅毒螺旋体的运动方式，因此与类似梅毒螺旋体的其他物质易混淆。, 百拇医药(韦莹慧)
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