二苯乙烯苷对Aβ25-35致NG108-15损伤的保护作用(2)
2.各组增殖细胞存活率的比较 不加Aβ25-35的正常对照组增殖最快，OD值最高；模型组增殖最慢，OD值最低。各组与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.01)；TSG各剂量组与模型组比较具有高度显著性差异(P<0.01)。见表1。
3.各组分化细胞存活率的比较 在分化剂cAMP的作用下，NG108-15细胞将停止增殖而成为分化细胞，不含Aβ25-35的正常对照组与原代播下的细胞数基本相同，可设其存活率为100%，实验结果显示含Aβ25-35的各组细胞数均低于正常对照组。经组间t检验，TSG组的OD值与正常对照组比较具有高度显著性差异(P<0.01)，与模型组比较亦具有高度显著性差异(P<0.01)。TSG各剂量组均能提高NG108-15分化细胞的存活率。见表2。
4.各组分化细胞的细胞突起率及突起平均长度比较
在分化剂cAMP的作用下，NG108-15细胞将分化成为具有较长突起的分化细胞。各组细胞突起率中以不加Aβ25-35的正常对照组最高。经组间t检验，TSG低、中剂量组的细胞突起率与正常对照组比较具有高度显著性差异(P<0.01)，TSG各组与模型组比较具有高度显著性差异(P<0.01)。各组细胞突起平均长度比较，模型组明显短于其它组(P<0.01)，TSG组与模型组比较，差异具有高度显著性(P<0.01)。见表3。
, 百拇医药
讨论
AD是一种原发性大脑神经退行性病变，为特有的中枢胆碱能神经元的大量死亡及丢失，伴有老年斑(SP)、神经纤维缠结(NFT)的形成、胆碱能神经细胞的损害、胆碱乙酰基转移酶(ChAT)水平下降和乙酰胆碱(Ach)递质合成的降低、突触蛋白I(Synapsin Ⅰ)水平下降、乙酰胆碱递质释放减少等特征[5～7]。NG108-15细胞株为神经肿瘤细胞，由小鼠的神经胚胎母细胞瘤(Neuroblastoma，不能合成Ach)与大白鼠神经胶质细胞瘤(Glioma，能合成Ach，但不能释放)细胞杂交融合而成。这种杂交细胞能无限地继代繁殖，能合成并释放乙酰胆碱递质，具有神经细胞的突起以及正常神经细胞所具有的离子通道及酶等[8～10]。因此，具有胆碱能特性的NG108-15细胞作为神经细胞模型，能较好地模拟AD的病理改变。Aβ是AD病患者大脑组织中老年斑的主要成分，它的活性部位在第25到35个的11个氨基酸片段。在NG108-15细胞加入Aβ25-35片段，可使细胞的形态学、死亡率、ChAT活性水平、SynapsinⅠ水平、Ach递质释放能力等与AD病理生理变化基本一致，因此，可用Aβ25-35片段诱导NG108-15神经细胞建立AD细胞模型[11～12]。
, 百拇医药
本实验结果显示：经5 μM Aβ25-35作用48小时后，NG108-15细胞形态结构及生长分化情况较正常培养的细胞发生了明显的变化。无论是增殖相还是分化相，细胞数量都明显减少，可见死亡、变黑、碎裂细胞；分化细胞的突起率降低，细胞突起平均长度也明显减少，表明Aβ25-35片段可损伤体外培养的NG108-15细胞，抑制细胞的生长和分化，并进一步诱导细胞死亡，而二苯乙烯苷组细胞增长良好，细胞透亮、均匀，表面无明显斑点及沉积物，细胞存活率、细胞突起率及细胞突起平均长度与模型组比较，均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)，表明二苯乙烯苷能在一定程度上抑制Aβ25-35对细胞的损伤作用。有关其详细的保护作用机制，仍需通过进一步实验加以证实。
参考文献
[1]王 巍，王丹巧.何首乌脑保护作用机理研究的进展[J]. 中国中西医结合杂志，2005，25(10)：955-959.
[2]王春英.何首乌中有效成分二苯乙烯苷的研究进展[J]. 河北医科大学学报，2008，29(1)：157-160.
, 百拇医药
[3]贾 新,陈建宗.二苯乙烯苷神经保护作用及其机制的研究进展[J]. 国际中医中药杂志，2007，29(6)：347-48.
[4]朱海升，蔡光明，刘鄂湖，等.大孔吸附树脂分离纯化何首乌有效成分二苯乙烯苷的研究[J]. 解放军药学学报，2006，22(4)：269-273.
[5]Pedersen WA,Kloczewiak MA,Blusztajin JK.Amyliod β-protein reduces acetylcholine synthesis in a cell line derived from cholinergic neurouns of the basal forebrain[J].Proc Natl Acad Sci USA,1996,93:8068-8071.
[6]Masliah E,Terry R.The role of synaptic protein in the pathogenesis of disorders of the central nervous system[J]. Brain Pathology, 1993, 3(1): 77-85.
, 百拇医药
[7]周永球，吴文峰.百年乐治疗老年血管性痴呆的疗效观察[J]. 右江医学，1996，24(1)：15-16.
[8]Li MF,Shi YL.The long-term effect of toosendanin on current through nifedipine-sensitive Ca2+channels in NG108-15 cells[J]. Toxicon，2005,45(1): 53-60.
[9]Hu Q,Shi YL.Characterization of an inward-rectifying potassium current in NG108-15 neuroblastoma×glioma cells[J].Pfluger's Arch, 1997，433(5): 617-625.
[10]Xu TH,Ding J,Shi YL.Toosendanin increases free-Ca2+ concentration in NG108-15 cells via L-type Ca2+ channels[J]. Acta Pharmacol Sin，2004, 25(5): 597-601.
, http://www.100md.com
[11]Sara M,Lippa,Carol F.et al.Synuclein aggregation in pathological aging and Alzheimer's disease: The impact of β-amyloid plaque level [J]. American Journal of Alzheimer's Disease and Other Dementias,2005;20: 315-318.
[12]钟振国.由Aβ25-35片段神经毒性诱导NG108-15细胞建立老年性痴呆细胞模型的探讨[J]. 中华临床医药,2002,3(24):18-20.
(收稿日期：2008-08-13 修回日期：2008-09-11)
(编辑：崔群飞 英文审校：钟京梓), http://www.100md.com(黄忠仕 农 嵩 谢海渊 张树球 李 韬 李曙波)
3.各组分化细胞存活率的比较 在分化剂cAMP的作用下，NG108-15细胞将停止增殖而成为分化细胞，不含Aβ25-35的正常对照组与原代播下的细胞数基本相同，可设其存活率为100%，实验结果显示含Aβ25-35的各组细胞数均低于正常对照组。经组间t检验，TSG组的OD值与正常对照组比较具有高度显著性差异(P<0.01)，与模型组比较亦具有高度显著性差异(P<0.01)。TSG各剂量组均能提高NG108-15分化细胞的存活率。见表2。
4.各组分化细胞的细胞突起率及突起平均长度比较
在分化剂cAMP的作用下，NG108-15细胞将分化成为具有较长突起的分化细胞。各组细胞突起率中以不加Aβ25-35的正常对照组最高。经组间t检验，TSG低、中剂量组的细胞突起率与正常对照组比较具有高度显著性差异(P<0.01)，TSG各组与模型组比较具有高度显著性差异(P<0.01)。各组细胞突起平均长度比较，模型组明显短于其它组(P<0.01)，TSG组与模型组比较，差异具有高度显著性(P<0.01)。见表3。
, 百拇医药
讨论
AD是一种原发性大脑神经退行性病变，为特有的中枢胆碱能神经元的大量死亡及丢失，伴有老年斑(SP)、神经纤维缠结(NFT)的形成、胆碱能神经细胞的损害、胆碱乙酰基转移酶(ChAT)水平下降和乙酰胆碱(Ach)递质合成的降低、突触蛋白I(Synapsin Ⅰ)水平下降、乙酰胆碱递质释放减少等特征[5～7]。NG108-15细胞株为神经肿瘤细胞，由小鼠的神经胚胎母细胞瘤(Neuroblastoma，不能合成Ach)与大白鼠神经胶质细胞瘤(Glioma，能合成Ach，但不能释放)细胞杂交融合而成。这种杂交细胞能无限地继代繁殖，能合成并释放乙酰胆碱递质，具有神经细胞的突起以及正常神经细胞所具有的离子通道及酶等[8～10]。因此，具有胆碱能特性的NG108-15细胞作为神经细胞模型，能较好地模拟AD的病理改变。Aβ是AD病患者大脑组织中老年斑的主要成分，它的活性部位在第25到35个的11个氨基酸片段。在NG108-15细胞加入Aβ25-35片段，可使细胞的形态学、死亡率、ChAT活性水平、SynapsinⅠ水平、Ach递质释放能力等与AD病理生理变化基本一致，因此，可用Aβ25-35片段诱导NG108-15神经细胞建立AD细胞模型[11～12]。
, 百拇医药
本实验结果显示：经5 μM Aβ25-35作用48小时后，NG108-15细胞形态结构及生长分化情况较正常培养的细胞发生了明显的变化。无论是增殖相还是分化相，细胞数量都明显减少，可见死亡、变黑、碎裂细胞；分化细胞的突起率降低，细胞突起平均长度也明显减少，表明Aβ25-35片段可损伤体外培养的NG108-15细胞，抑制细胞的生长和分化，并进一步诱导细胞死亡，而二苯乙烯苷组细胞增长良好，细胞透亮、均匀，表面无明显斑点及沉积物，细胞存活率、细胞突起率及细胞突起平均长度与模型组比较，均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)，表明二苯乙烯苷能在一定程度上抑制Aβ25-35对细胞的损伤作用。有关其详细的保护作用机制，仍需通过进一步实验加以证实。
参考文献
[1]王 巍，王丹巧.何首乌脑保护作用机理研究的进展[J]. 中国中西医结合杂志，2005，25(10)：955-959.
[2]王春英.何首乌中有效成分二苯乙烯苷的研究进展[J]. 河北医科大学学报，2008，29(1)：157-160.
, 百拇医药
[3]贾 新,陈建宗.二苯乙烯苷神经保护作用及其机制的研究进展[J]. 国际中医中药杂志，2007，29(6)：347-48.
[4]朱海升，蔡光明，刘鄂湖，等.大孔吸附树脂分离纯化何首乌有效成分二苯乙烯苷的研究[J]. 解放军药学学报，2006，22(4)：269-273.
[5]Pedersen WA,Kloczewiak MA,Blusztajin JK.Amyliod β-protein reduces acetylcholine synthesis in a cell line derived from cholinergic neurouns of the basal forebrain[J].Proc Natl Acad Sci USA,1996,93:8068-8071.
[6]Masliah E,Terry R.The role of synaptic protein in the pathogenesis of disorders of the central nervous system[J]. Brain Pathology, 1993, 3(1): 77-85.
, 百拇医药
[7]周永球，吴文峰.百年乐治疗老年血管性痴呆的疗效观察[J]. 右江医学，1996，24(1)：15-16.
[8]Li MF,Shi YL.The long-term effect of toosendanin on current through nifedipine-sensitive Ca2+channels in NG108-15 cells[J]. Toxicon，2005,45(1): 53-60.
[9]Hu Q,Shi YL.Characterization of an inward-rectifying potassium current in NG108-15 neuroblastoma×glioma cells[J].Pfluger's Arch, 1997，433(5): 617-625.
[10]Xu TH,Ding J,Shi YL.Toosendanin increases free-Ca2+ concentration in NG108-15 cells via L-type Ca2+ channels[J]. Acta Pharmacol Sin，2004, 25(5): 597-601.
, http://www.100md.com
[11]Sara M,Lippa,Carol F.et al.Synuclein aggregation in pathological aging and Alzheimer's disease: The impact of β-amyloid plaque level [J]. American Journal of Alzheimer's Disease and Other Dementias,2005;20: 315-318.
[12]钟振国.由Aβ25-35片段神经毒性诱导NG108-15细胞建立老年性痴呆细胞模型的探讨[J]. 中华临床医药,2002,3(24):18-20.
(收稿日期：2008-08-13 修回日期：2008-09-11)
(编辑：崔群飞 英文审校：钟京梓), http://www.100md.com(黄忠仕 农 嵩 谢海渊 张树球 李 韬 李曙波)