MMP-9、COX-2在膀胱尿路上皮癌表达的研究
[摘要] 目的 研究膀胱尿路上皮癌(BUC)中 MMP9、COX2的表达水平,阐明其与膀胱癌的生物学行为的关系。
方法 采用免疫组化法对43例膀胱尿路上皮癌标本和10例对照组标本中MMP9、COX2的表达量检测并进行比较。结果 MMP9与COX2在正常黏膜与不同病理分级和临床分期中的阳性率均有显著性差异(P<0.05或0.01)。MMP9和COX2的阳性率随病理分级和临床分期的上升而显著升高。MMP9和COX2表达有相关关系(P<0.01)。结论 MMP9和COX2的表达与BUC的生物学行为关系密切,为尽早了解膀胱癌侵袭、转移提供帮助。
[关键词] 膀胱尿路上皮癌;基质金属蛋白酶9;环氧化酶2;表达
文章编号:1003-1383(2009)04-0410-02
中图分类号:R 737.14
, 百拇医药
文献标识码:A
doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2009.04.016
膀胱癌(BC)是人类泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一, 发病率在国内居泌尿系统恶性肿瘤的第一位,且发病率逐年增加,在欧美国家仅次于前列腺癌而居第二位。BC男女之比5∶1,60岁以后发病率高,平均诊断年龄为71岁。BC中膀胱尿路上皮癌(BUC)占90%以上,超过70%的BUC在治疗后复发,复发肿瘤中约30%出现恶性程度增加。浅表性BUC复发率为50%～70%,而且10%～15%复发BUC浸润至肌层[1]。因此早期诊断是成功治疗BUC的重要条件。笔者检测膀胱尿路上皮癌和正常膀胱黏膜中基质金属蛋白酶9(MMP9)和环氧化酶2(COX2)的表达,研究其与膀胱癌的生物学行为的关系。
资料与方法
1.病例资料 来自本院病理科2004年1月至2006年12月确诊为BUC的外检档案43例,同时收集10例正常膀胱组织作为对照。参照WHO关于泌尿与生殖系统肿瘤分类标准[2],病理形态包括非侵袭性尿路上皮肿瘤和浸润性尿路上皮癌两大类。结合病理形态与生物学行为分为3级,临床分期按UICCTNM分期标准分浅表性肿瘤(TisT1)和浸润性肿瘤(T24)。病例分布具体如下:①I级:包括低度恶性潜能非侵袭性乳头状尿路上皮肿瘤(PUNLMP,Tis)1例;非侵袭性乳头状尿路上皮癌低级别(NIPUCLG,TisT1)3例;非侵袭性乳头状尿路上皮癌高级别(NIPUCHG,T1)5例;尿路上皮原位癌(UCIS,T1)1例。②Ⅱ级:浸润性尿路上皮癌低级别(IPUCHD,T2)22例。③Ⅲ级:浸润性尿路上皮癌高级别(IPUCLD,T34)11例。
, 百拇医药
2.实验试剂 鼠抗人MMP9抗体,COX2单克隆抗体,二抗采用生物素标记IgG,购自DAKO公司,由博士德生物技术有限公司提供。链亲和素-过氧化物酶(SP)试剂盒购自迈新公司。
3.免疫组织化学染色法 组织石蜡包埋,4μm 厚切片,常规处理后,微波炉抗原修复,依次加入稀释的一抗(工作浓度均为1∶100) 、生物素标记二抗、SABC,DAB 显色、苏木素复染,用已知阳性片作阳性对照,PBS 代替一抗作空白对照。4.结果判读标准 MMP9:染色阳性为胞浆内出现棕色和棕黄色。显微镜下组织被染成棕黄色的为阳性(+),其阳性细胞数<40%;成棕色为阳性(++),其阳性细胞数40%～80%;成深棕色(+++)其阳性细胞数>80%;组织没有着色为阴性[3]。COX2:阳性表达定位于细胞浆,呈浅黄色至深棕色。阳性判定标准:依据阳性细胞数和阳性反应强度两项指标:阳性着色细胞数>10%定为阳性表达; 阳性反应强度以浅黄色为弱阳性定为(+)、黄色或棕黄色为中等阳性定为(++)、棕色或者深棕色为强阳性定为(+++),无棕黄色或与背景着色一致为阴性[4]。
, http://www.100md.com
5.统计学处理 检测结果采用SPSS软件处理,组间比较行χ2检验,两因素间行相关性分析。
结果
1.MMP9和COX2表达与膀胱癌病理分级、临床分期的关系 两者的表达与BUC的关系密切。MMP9与COX2在正常黏膜与不同病理分级和临床分期中的阳性率均有显著性差异(P<0.05或0.01)。MMP9和COX2的阳性率随病理分级和临床分期的上升而显著升高,见表1。
表1 MMP9和COX2在BUC病理分级、临床分期中阳性表达 例(%)
类别nMMP9阳性COX2阳性
正常黏膜100(0.0)0(0.0)
Ⅰ级102(20.0)3(30.0)
, http://www.100md.com
Ⅱ级227(31.8)15(68.2)
Ⅲ级116(54.5)10(90.9)
χ2-8.125※28.641▲
注:※P<0.05,▲P<0.01
2.膀胱癌MMP9和COX2表达间的关系 在43例膀胱尿路上皮癌中MMP9和COX2二者共同阳性25例,二者共同阴性8例。二者表达经相关性检验表明有相关关系(rs=0.5621,P<0.01),见表2。
表2 MMP9和COX2在BUC中的表达关系
MMP9 COX2阴性阳性合计
阴性8614
, http://www.100md.com
阳性42529
合计123143
讨论
膀胱尿路上皮癌(BUC)的生物学行为有多中心、易复发、浸润性生长的特点。其侵袭转移过程涉及细胞的黏附、细胞运动、降解基底膜和细胞外基质,以及血管形成的情况。完善的肿瘤细胞外基质和基底膜可以限制肿瘤细胞的浸润和转移。MMP9能够降解基底膜糖蛋白以及几乎细胞外基质的所有成分,在肿瘤浸润转移中发挥重要作用[5]。本研究发现,MMP9阳性表达率随BUC恶性度增加而升高,高分化和浅表性膀胱癌中MMP9阳性率明显低于低分化、浸润性的膀胱癌。MMP9的表达随BUC的分级和分期的升高而升高,在不同的病理分级和临床分期间,其表达有显著性差异(P<0.05或0.01)。随着近几年对COX2研究的深入,发现COX2在多种肿瘤中表达。国内外部分学者在膀胱肿瘤中的研究发现COX2呈现高表达,但就其与肿瘤的分期、分级、转移等关系文献报道存在分歧,多数学者研究报道示COX2表达的强度与肿瘤的分化程度和浸润深度成正相关。COX2表达程度和肿瘤浸润到肌层阶段有关,并与膀胱移行细胞癌的分级、分期和预后具有显著相关性,在高级别、易复发的病例中其表达强度相对较高,提示COX2与膀胱癌的恶化程度有关[6]。本研究发现COX2在正常黏膜与不同病理分级和临床分期中的阳性率均有显著性差异。COX2的阳性率随病理分级和临床分期的上升而显著升高,提示在膀胱肿瘤中COX2呈现高表达,与肿瘤的发生发展有密切的关系。
, 百拇医药
本研究还发现相同的BUC分级和分期上,COX2的阳性表达率高于MMP9。笔者认为可能存在COX2对MMP9的表达调控,因为肿瘤转移调控是一个复杂的机制过程,有待进一步研究。无论如何COX2和MMP9的表达都存在随着BUC恶性程度加剧进一步升高的趋势。
为准确地判断肿瘤的恶性程度,尽早的了解膀胱癌侵袭、转移以及血管生成情况,通过检测膀胱组织中COX2和MMP9的表达是很有必要的。为治疗膀胱尿路上皮癌,预防肿瘤的复法、转移、提高生存期提供有效的帮助[7]。
参考文献
[1]Pieras E.Management and prognosis of urothelial carcinoma superficial recurrence in muscle-invasive bladder cancer after bladder preservation[J].Eur Urol,2003,44(2):222-225.
, 百拇医药
[2]EbleJ N,Sauter G,Epstein JI,et al.World Health Organization Classification of tuors of the urinary system and male genital organs[M].IARC,2004,32(5):90-123.
[3]杜春辉,廖洪利,田 刚,等.银屑病皮损ICAM1,MMP9表达的研究[J].右江医学,2007,35(6):631-632.
[4]孟庆泽,赵守元,高建光,等.膀胱移行细胞癌中COX2的表达及其预后价值[J].临床泌尿外科杂志,2005,20(3):171-173.
[5]范志强,姜佑三,徐 勇,等.PCNA、MMP9和Ecd在膀胱移行上皮癌中表达及意义[J].天津医药,2005,33(7):405-407.
, http://www.100md.com
[6]Kurt JS,Arieh AK,Bruce H,et al.Cyclooxygenase1 is up-regulated in cervical carcinomas: Autocrine/paracrine regulation of cyclooxygenase-2, prostagland in E receptors and angiogenic factors by cyclooxygenase1[J].CancerRes,2002,15(62): 424-432.
[7]赵 斌,黄云超.MMP9、CD34与膀胱癌的研究进展[J].现代肿瘤医学,2008,16(7):1250-1253.
(收稿日期:2009-04-15 修回日期:2009-08-07)
(编辑:崔群飞), http://www.100md.com(阿布力米提．木合塔尔 杜春辉 地力夏提．吾买尔等)
方法 采用免疫组化法对43例膀胱尿路上皮癌标本和10例对照组标本中MMP9、COX2的表达量检测并进行比较。结果 MMP9与COX2在正常黏膜与不同病理分级和临床分期中的阳性率均有显著性差异(P<0.05或0.01)。MMP9和COX2的阳性率随病理分级和临床分期的上升而显著升高。MMP9和COX2表达有相关关系(P<0.01)。结论 MMP9和COX2的表达与BUC的生物学行为关系密切,为尽早了解膀胱癌侵袭、转移提供帮助。
[关键词] 膀胱尿路上皮癌;基质金属蛋白酶9;环氧化酶2;表达
文章编号:1003-1383(2009)04-0410-02
中图分类号:R 737.14
, 百拇医药
文献标识码:A
doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2009.04.016
膀胱癌(BC)是人类泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一, 发病率在国内居泌尿系统恶性肿瘤的第一位,且发病率逐年增加,在欧美国家仅次于前列腺癌而居第二位。BC男女之比5∶1,60岁以后发病率高,平均诊断年龄为71岁。BC中膀胱尿路上皮癌(BUC)占90%以上,超过70%的BUC在治疗后复发,复发肿瘤中约30%出现恶性程度增加。浅表性BUC复发率为50%～70%,而且10%～15%复发BUC浸润至肌层[1]。因此早期诊断是成功治疗BUC的重要条件。笔者检测膀胱尿路上皮癌和正常膀胱黏膜中基质金属蛋白酶9(MMP9)和环氧化酶2(COX2)的表达,研究其与膀胱癌的生物学行为的关系。
资料与方法
1.病例资料 来自本院病理科2004年1月至2006年12月确诊为BUC的外检档案43例,同时收集10例正常膀胱组织作为对照。参照WHO关于泌尿与生殖系统肿瘤分类标准[2],病理形态包括非侵袭性尿路上皮肿瘤和浸润性尿路上皮癌两大类。结合病理形态与生物学行为分为3级,临床分期按UICCTNM分期标准分浅表性肿瘤(TisT1)和浸润性肿瘤(T24)。病例分布具体如下:①I级:包括低度恶性潜能非侵袭性乳头状尿路上皮肿瘤(PUNLMP,Tis)1例;非侵袭性乳头状尿路上皮癌低级别(NIPUCLG,TisT1)3例;非侵袭性乳头状尿路上皮癌高级别(NIPUCHG,T1)5例;尿路上皮原位癌(UCIS,T1)1例。②Ⅱ级:浸润性尿路上皮癌低级别(IPUCHD,T2)22例。③Ⅲ级:浸润性尿路上皮癌高级别(IPUCLD,T34)11例。
, 百拇医药
2.实验试剂 鼠抗人MMP9抗体,COX2单克隆抗体,二抗采用生物素标记IgG,购自DAKO公司,由博士德生物技术有限公司提供。链亲和素-过氧化物酶(SP)试剂盒购自迈新公司。
3.免疫组织化学染色法 组织石蜡包埋,4μm 厚切片,常规处理后,微波炉抗原修复,依次加入稀释的一抗(工作浓度均为1∶100) 、生物素标记二抗、SABC,DAB 显色、苏木素复染,用已知阳性片作阳性对照,PBS 代替一抗作空白对照。4.结果判读标准 MMP9:染色阳性为胞浆内出现棕色和棕黄色。显微镜下组织被染成棕黄色的为阳性(+),其阳性细胞数<40%;成棕色为阳性(++),其阳性细胞数40%～80%;成深棕色(+++)其阳性细胞数>80%;组织没有着色为阴性[3]。COX2:阳性表达定位于细胞浆,呈浅黄色至深棕色。阳性判定标准:依据阳性细胞数和阳性反应强度两项指标:阳性着色细胞数>10%定为阳性表达; 阳性反应强度以浅黄色为弱阳性定为(+)、黄色或棕黄色为中等阳性定为(++)、棕色或者深棕色为强阳性定为(+++),无棕黄色或与背景着色一致为阴性[4]。
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5.统计学处理 检测结果采用SPSS软件处理,组间比较行χ2检验,两因素间行相关性分析。
结果
1.MMP9和COX2表达与膀胱癌病理分级、临床分期的关系 两者的表达与BUC的关系密切。MMP9与COX2在正常黏膜与不同病理分级和临床分期中的阳性率均有显著性差异(P<0.05或0.01)。MMP9和COX2的阳性率随病理分级和临床分期的上升而显著升高,见表1。
表1 MMP9和COX2在BUC病理分级、临床分期中阳性表达 例(%)
类别nMMP9阳性COX2阳性
正常黏膜100(0.0)0(0.0)
Ⅰ级102(20.0)3(30.0)
, http://www.100md.com
Ⅱ级227(31.8)15(68.2)
Ⅲ级116(54.5)10(90.9)
χ2-8.125※28.641▲
注:※P<0.05,▲P<0.01
2.膀胱癌MMP9和COX2表达间的关系 在43例膀胱尿路上皮癌中MMP9和COX2二者共同阳性25例,二者共同阴性8例。二者表达经相关性检验表明有相关关系(rs=0.5621,P<0.01),见表2。
表2 MMP9和COX2在BUC中的表达关系
MMP9 COX2阴性阳性合计
阴性8614
, http://www.100md.com
阳性42529
合计123143
讨论
膀胱尿路上皮癌(BUC)的生物学行为有多中心、易复发、浸润性生长的特点。其侵袭转移过程涉及细胞的黏附、细胞运动、降解基底膜和细胞外基质,以及血管形成的情况。完善的肿瘤细胞外基质和基底膜可以限制肿瘤细胞的浸润和转移。MMP9能够降解基底膜糖蛋白以及几乎细胞外基质的所有成分,在肿瘤浸润转移中发挥重要作用[5]。本研究发现,MMP9阳性表达率随BUC恶性度增加而升高,高分化和浅表性膀胱癌中MMP9阳性率明显低于低分化、浸润性的膀胱癌。MMP9的表达随BUC的分级和分期的升高而升高,在不同的病理分级和临床分期间,其表达有显著性差异(P<0.05或0.01)。随着近几年对COX2研究的深入,发现COX2在多种肿瘤中表达。国内外部分学者在膀胱肿瘤中的研究发现COX2呈现高表达,但就其与肿瘤的分期、分级、转移等关系文献报道存在分歧,多数学者研究报道示COX2表达的强度与肿瘤的分化程度和浸润深度成正相关。COX2表达程度和肿瘤浸润到肌层阶段有关,并与膀胱移行细胞癌的分级、分期和预后具有显著相关性,在高级别、易复发的病例中其表达强度相对较高,提示COX2与膀胱癌的恶化程度有关[6]。本研究发现COX2在正常黏膜与不同病理分级和临床分期中的阳性率均有显著性差异。COX2的阳性率随病理分级和临床分期的上升而显著升高,提示在膀胱肿瘤中COX2呈现高表达,与肿瘤的发生发展有密切的关系。
, 百拇医药
本研究还发现相同的BUC分级和分期上,COX2的阳性表达率高于MMP9。笔者认为可能存在COX2对MMP9的表达调控,因为肿瘤转移调控是一个复杂的机制过程,有待进一步研究。无论如何COX2和MMP9的表达都存在随着BUC恶性程度加剧进一步升高的趋势。
为准确地判断肿瘤的恶性程度,尽早的了解膀胱癌侵袭、转移以及血管生成情况,通过检测膀胱组织中COX2和MMP9的表达是很有必要的。为治疗膀胱尿路上皮癌,预防肿瘤的复法、转移、提高生存期提供有效的帮助[7]。
参考文献
[1]Pieras E.Management and prognosis of urothelial carcinoma superficial recurrence in muscle-invasive bladder cancer after bladder preservation[J].Eur Urol,2003,44(2):222-225.
, 百拇医药
[2]EbleJ N,Sauter G,Epstein JI,et al.World Health Organization Classification of tuors of the urinary system and male genital organs[M].IARC,2004,32(5):90-123.
[3]杜春辉,廖洪利,田 刚,等.银屑病皮损ICAM1,MMP9表达的研究[J].右江医学,2007,35(6):631-632.
[4]孟庆泽,赵守元,高建光,等.膀胱移行细胞癌中COX2的表达及其预后价值[J].临床泌尿外科杂志,2005,20(3):171-173.
[5]范志强,姜佑三,徐 勇,等.PCNA、MMP9和Ecd在膀胱移行上皮癌中表达及意义[J].天津医药,2005,33(7):405-407.
, http://www.100md.com
[6]Kurt JS,Arieh AK,Bruce H,et al.Cyclooxygenase1 is up-regulated in cervical carcinomas: Autocrine/paracrine regulation of cyclooxygenase-2, prostagland in E receptors and angiogenic factors by cyclooxygenase1[J].CancerRes,2002,15(62): 424-432.
[7]赵 斌,黄云超.MMP9、CD34与膀胱癌的研究进展[J].现代肿瘤医学,2008,16(7):1250-1253.
(收稿日期:2009-04-15 修回日期:2009-08-07)
(编辑:崔群飞), http://www.100md.com(阿布力米提．木合塔尔 杜春辉 地力夏提．吾买尔等)