(浙江省湖州市疾病预防控制中心， 浙江 湖州313000)

    摘要 [目的] 利用特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量PCR技术，建立大肠杆菌O157:H7污染的快速敏感特异的检测方法。[方法] 以大肠杆菌O157H7的rfbE基因作为靶序列，设计一对引物和探针，以大肠杆菌O157H7菌株提取核酸DNA作为模板，优化引物和探针的浓度比和Mg2+浓度，以大肠杆菌O157:H7和10种相7关细菌考核检测体系的灵敏性、稳定性和特异性。[结果] 本研究建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.6μmoL/L、0.8μmoL/L；Mg2+浓度为4 mmoL/L时，具有良好的特异性和敏感性。在10株相关菌株的检测中，除大肠杆菌O157:H7出现很好的阳性外，其余菌株均为阴性。在纯菌条件下，定量检测低限17cfu/mL。稳定性分析表明：同一样品重复检测3次Ct值的变异系数均小于5%。检测样品结果显示Real-time PCR方法较传统方法敏感、快捷、简便。[结论] 该方法特异性强，稳定性高 ......