肝细胞性肝癌AFP-mRNA检测外周血癌细胞的价值(2)
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图2 HpG2细胞在不同浓度下AFP cDNA电泳图
A：1×106； B：1×105； C：1×104； D：1×103；
E：1×102； F：1×101； G：1×100
3 讨论
AFP存在于胚胎早期，大部分由胚胎期肝细胞和卵黄囊产生，到胚胎wk 7出现在母体血清中，wk 14达到最高水平，出生后浓度迅速下降直至消失. 肝脏的其他细胞如Kupffer细胞、胆管上皮、储脂细胞、血管内皮细胞并不合成AFP. 如果AFP浓度增高重现于成人血清，往往提示与胚胎发生有关的HCC或生殖腺胚胎癌. 因此，HCC的诊断必须排除活动性肝病、妊娠、生殖腺胚胎癌等. 虽然如此，AFP在HCC的诊断中，仍然不失为非常有价值的生化指标，尤其是HCC的早期动态观察与诊断[1].
肝脏位于体循环与门静脉系统的交汇处，血液供应相当丰富，HCC细胞在早期即可侵袭血管进入外周循环，HCC的这一特点使在外周血中检测HCC细胞成为可能. AFPmRNA在细胞质内是翻译、合成AFP的物质基础，游离在外周血中的mRNA非常不稳定，易被RNA酶降解. 因此，AFP mRNA只能存在于尚具活性的HCC细胞中[2]. 在排除包括生殖器肿瘤在内的其他有关因素干扰的前提下，只要在外周血中检测到AFP mRNA就能肯定HCC细胞在原发部位已经突破血管壁并侵袭到外周血中. 本结果证实，外周血癌细胞中AFP mRNA的出现与肝癌转移、门静脉癌栓形成密切相关. 肝内转移与门静脉癌栓形成均表明HCC已经侵袭到了血循环. 因此可以认为，外周血AFP mRNA是HCC细胞存在于外周血的直接证据，是HCC发生血管浸润并形成或可能形成转移的重要标志.
PCR扩增效率高，其产物以2n-2n的形式堆积. 理论上认为25～30个循环后产物可达到最大值，目的基因的拷贝可超过4×108. 套式PCR的特点在于对同一模板使用两对引物分别进行两次扩增，对于RNA模板拷贝数少的目的基因具有明显的扩增效果；而且目的基因的特异性也得到增强. 据文献报道，采用Nested RT-PCR检测乳腺癌、黑素瘤、结肠癌等外周血癌细胞mRNA的灵敏度最高可达全血200个/ L[3，4]. 本实验的结果也表明，应用Nested RT-PCR对HCC AFP mRNA的检测也具有较高灵敏度和较强的特异性. 运用Nested RT-PCR方法检测外周血AFP mRNA有其自身特点，它与血清AFP浓度无关，可在血清AFP<500/ mL的HCC病例中检测出AFP mRNA以证实外周血中存在的肝癌细胞. 因此，AFP mRNA可以在肝癌影像检查不典型、血清AFP浓度低下的情况下作为肝癌诊断以及判断转移的又一辅助指标.
参考文献
[1]吴孟超. 1000例肝细胞癌的临床病理研究. 肿瘤防治，1993；20(1)：137-139
[2]Niwa Y, Matsumura M, Shiratori Y ......
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