ELISA法检测HIV抗体的几点体会
中图分类号：R446.6文献标识码：B文章编号：1005-0515(2011)12-363-02
进入20世纪90年代，HIV在我国迅速传播，感染人数成倍增长，就中国的情况而言，截止2005年底，中国感染艾滋病病毒的人数为65万，其中3.1万人死于艾滋病，HIV感染的诊断以HIV抗体的检测为金标准，为了达到早诊断、早治疗、早管理的目的，全国先后建立了大量的HIV抗体初筛实验室。出于实验条件的限制，大部分实验室仅能做常规的HIV抗体初筛工作，很少对HIV病毒做深层次的研究。现简述我室用ELISA法检测HIV抗体的几点体会。
1 试剂方面 《全国艾滋病检测技术规范》(2004版)批准的初筛试剂有酶联免疫、颗粒凝集和其它快速诊断试剂。对于试剂本身的质量问题，试剂的稳定性、敏感性和特异性等指标，由于基层实验室不能得到血清转化酶和大量的阳性标本，不可能进行自己测定，只能看试剂厂家的批验报告和每年国家有关部门的临床评估报告，所以在购买试剂时索取和审查厂家提供的批验报告至关重要。在操作中，试剂在测定前一定在室温下恒温30min，如果不经过恒温过程，储存温度和室温的差异会使酶标版上凝集一些小水珠，也使开始反应的温度不恒定，影响到抗原抗体的结合与反应的速度。在储存上，一般在2-8℃，特别注意试剂盒不能贴冰箱储存室后壁摆放，否则试剂会被冰冻，复融后试剂的总体效价将严重偏低，不能使用，并在试剂有效期内使用。
2 样品方面 ELISA试剂对于样本要求不高，我们曾做了许多溶血、脂肪血和黄疸性血清以及加了EDTA抗凝剂的血浆样本，结果均为阴性，没有假阳性出现，说明一些生物因素和抗凝剂对阴性结果不产生影响，但所做均为阴性样品，而无阳性样品，各类因素是否会对阳性样品产生影响还有待探讨。值得注意的是，反复冻融的样品会使抗体的有效价降低很多，甚至出现假阴性结果。我们曾经用同一批号的试剂对同一阳性样品反复冻融后测定，第1、2、3次冻融之间OD值下降很快，第4次测定已将至灰区，成为一个不确定样品。
3 所用仪器方面 ELISA方法所用仪器相对简单。洗板机的使用出现了这样的问题：洗板机的吸液针头要接触酶标板的板底才能吸干净，而触碰板底将会包被物产生影响；手工洗板容易。溢液和污染。我们做了手工洗板和机洗板的比较，除了手工洗板比机洗板空白值略低外，其他没有区别，用洗板机有3个地方要注意；⑴在洗两个不同厂家的酶标板时，应注意调整洗液头的下降深度，以免因高低不适冲洗针头卡住酶标板；⑵当吸液针头有破损时，吸液断由平端变为尖锐，板底包被物被破坏的可能性增加，对结果影响较大，应及时更换；⑶溢液的问题，洗液不足洗不干净(特别是边缘残留的酶标物)，容易出现假阳性结果。洗液大多容易溢出，造成孔间交叉污染，这就要求不断调整洗液量，洗不同厂家试剂的酶标板洗液量可以不同，移液器要按时校准；酶标仪效果将更好。
总的来说，ELISA试剂发展已相对成熟，对样本要求不高，只要注意其中的诸多影响因素，注意试剂的储存和仪器的保养，严格按照试剂盒操作说明书操作，就可以避免出现假阳性和假阴性结果。, 百拇医药(李真 李勤)
进入20世纪90年代，HIV在我国迅速传播，感染人数成倍增长，就中国的情况而言，截止2005年底，中国感染艾滋病病毒的人数为65万，其中3.1万人死于艾滋病，HIV感染的诊断以HIV抗体的检测为金标准，为了达到早诊断、早治疗、早管理的目的，全国先后建立了大量的HIV抗体初筛实验室。出于实验条件的限制，大部分实验室仅能做常规的HIV抗体初筛工作，很少对HIV病毒做深层次的研究。现简述我室用ELISA法检测HIV抗体的几点体会。
1 试剂方面 《全国艾滋病检测技术规范》(2004版)批准的初筛试剂有酶联免疫、颗粒凝集和其它快速诊断试剂。对于试剂本身的质量问题，试剂的稳定性、敏感性和特异性等指标，由于基层实验室不能得到血清转化酶和大量的阳性标本，不可能进行自己测定，只能看试剂厂家的批验报告和每年国家有关部门的临床评估报告，所以在购买试剂时索取和审查厂家提供的批验报告至关重要。在操作中，试剂在测定前一定在室温下恒温30min，如果不经过恒温过程，储存温度和室温的差异会使酶标版上凝集一些小水珠，也使开始反应的温度不恒定，影响到抗原抗体的结合与反应的速度。在储存上，一般在2-8℃，特别注意试剂盒不能贴冰箱储存室后壁摆放，否则试剂会被冰冻，复融后试剂的总体效价将严重偏低，不能使用，并在试剂有效期内使用。
2 样品方面 ELISA试剂对于样本要求不高，我们曾做了许多溶血、脂肪血和黄疸性血清以及加了EDTA抗凝剂的血浆样本，结果均为阴性，没有假阳性出现，说明一些生物因素和抗凝剂对阴性结果不产生影响，但所做均为阴性样品，而无阳性样品，各类因素是否会对阳性样品产生影响还有待探讨。值得注意的是，反复冻融的样品会使抗体的有效价降低很多，甚至出现假阴性结果。我们曾经用同一批号的试剂对同一阳性样品反复冻融后测定，第1、2、3次冻融之间OD值下降很快，第4次测定已将至灰区，成为一个不确定样品。
3 所用仪器方面 ELISA方法所用仪器相对简单。洗板机的使用出现了这样的问题：洗板机的吸液针头要接触酶标板的板底才能吸干净，而触碰板底将会包被物产生影响；手工洗板容易。溢液和污染。我们做了手工洗板和机洗板的比较，除了手工洗板比机洗板空白值略低外，其他没有区别，用洗板机有3个地方要注意；⑴在洗两个不同厂家的酶标板时，应注意调整洗液头的下降深度，以免因高低不适冲洗针头卡住酶标板；⑵当吸液针头有破损时，吸液断由平端变为尖锐，板底包被物被破坏的可能性增加，对结果影响较大，应及时更换；⑶溢液的问题，洗液不足洗不干净(特别是边缘残留的酶标物)，容易出现假阳性结果。洗液大多容易溢出，造成孔间交叉污染，这就要求不断调整洗液量，洗不同厂家试剂的酶标板洗液量可以不同，移液器要按时校准；酶标仪效果将更好。
总的来说，ELISA试剂发展已相对成熟，对样本要求不高，只要注意其中的诸多影响因素，注意试剂的储存和仪器的保养，严格按照试剂盒操作说明书操作，就可以避免出现假阳性和假阴性结果。, 百拇医药(李真 李勤)