高三尖杉酯碱抑制兔LASEK术后haze的实验研究(2)
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2.4 光镜检查结果 术后1w：各组兔眼角膜上皮细胞均已完全覆盖切削区。前三组术区前部基质内角膜细胞溶解、碎裂，呈无细胞区，胶原纤维排列较整齐(图4)。D组术区前部基质有稍多角膜细胞聚集，见少量活化增殖的成纤维细胞，基质层胶原纤维排列轻微紊乱(图5)。
术后2w：各组角膜上皮层数增加，前基质层出现差异： 前三组前基质层成纤维细胞较少，细胞外基质略有增加；D组前基质层有较多成纤维细胞局部聚集，细胞外基质明显增加。
术后1m：A组上皮局限性增厚，基底细胞体积增大，基底细胞高柱状；基底膜尚完整，浅层基质成纤维细胞数量较少，排列整齐，未见明显瘢痕组织。B组基底膜欠连续，厚薄不均；其余情况同A组(图6)。C组上皮增厚且不均；基底细胞呈高柱状；基底膜不完整，波纹状弯曲，其余情况同A组。D组上皮层明显增厚且排列紊乱，实质层有瘢痕样组织处上皮表面部分向下凹陷，使表面呈波浪状。基底细胞形态各异；基底膜不连续，厚薄不均；浅层基质成纤维细胞数量较多，排列紊乱(图7)。
术后2m：A组上皮较厚，基底细胞排列基本规则；基底膜较薄；前基质成纤维细胞数量较少，排列较规整(图8)。B、C组基底膜稍厚，呈波浪状；其余情况同A组。D组角膜上皮较厚，基底细胞形态各异；基底膜厚薄不均且不连续；前基质成纤维细胞数量增多，胶原纤维排列不规则(图9)。
术后3m：A组角膜上皮厚度、细胞层数趋于正常，基底膜、基质浅层纤维未见异常改变，B、C两组切削区角膜上皮仍较厚，细胞肿胀较前明显减轻，基底细胞恢复高柱状；基底膜完整，厚薄不均；基质浅层成纤维细胞数量开始减少，形态及排列较前稍规则；局部浅实质层可见瘢痕样改变。D组上皮层仍增厚，水肿，切削区显著，基底细胞排列不规则，胶原排列疏松、紊乱，基质细胞增殖明显。
术后6m：前三组上皮细胞体积略大，基底细胞排列规则，角膜厚度、胶原排列及基质细胞数目已基本恢复正常(图10)。D组上皮厚度仍比正常者厚，细胞排列较乱，个别基底细胞可见核深染，胶原排列仍较紊乱(图11)。
2.5 透射电镜检查结果 术后1m：前三组基质内胶原纤维排列轻微紊乱，前部基质内见少量体积增大的成纤维细胞，细胞内有较多扩张的粗面内质网，线粒体、高尔基体数量增加(图12)。D组基底细胞半桥粒密度较正常少，基底膜厚薄不均匀，不连续，可见灶状缺损(图13)。基质浅层胶原纤维排列紊乱；前部基质内见大量成纤维细胞，细胞肥大，其内充满丰富的粗面内质网、高尔基体、游离核糖体及肿胀的线粒体，并可见空泡。
术后6m：前三组上皮细胞体积比正常细胞略大，基底膜薄且均匀一致，基质排列基本恢复正常(图14)。D组半桥粒密度基本恢复正常，但基底膜仍可见不连续状。基质浅层胶原纤维排列仍较紊乱，成纤维细胞数量及形态逐渐接近正常(图15)。
3 讨论
haze是LASEK术后出现的主要并发症，严重影响其手术效果。目前，临床上haze的防治以类固醇激素为主，0.1%FML是术后常用药物，已证实它能够减少新生上皮下胶原层的厚度及Ⅲ型胶原的沉积，对haze有显著的抑制作用。但LASEK术后常规需用药3-6个月，而长时间应用可导致激素性青光眼等[1]不可逆性视功能损害。
高三尖杉酯碱是从我国三尖杉植物——海南粗榧中提取的四种活性成分之一，是一种生物碱，属于新型抗代谢药。临床上已被局部应用于眼科手术部位，以防治如青光眼滤过性手术[3，4]和翼状胬肉切除术[5]术后复发。体外细胞培养表明HHT对纤维细胞和视网膜色素上皮细胞具有强大的抗增生能力，动物实验也证实HHT能明显的抑制眼内纤维增生，降低视网膜脱离的发生率[6，7]，且动物实验[8]和临床实践[9]显示HHT有效抑制PRK术后haze。
本研究发现LASEK术后1月、2月时前三组haze 程度明显轻于D组，而术后各个时间点，前三组haze程度的差异不明显。光镜发现前三组术区角膜前部基质内成纤维细胞的生长明显受到抑制。电镜发现前三组术区前基质成纤维细胞数量较少，与D组比较，胶原纤维排列明显整齐；D组术区前基质细胞增生明显，成纤维细胞功能活跃，粗面内质网增加，合成及分泌大量细胞外基质成分，角膜基质浅层胶原纤维排列紊乱。表明1mg/mL浓度HHT贴覆给药、术后0.1mg/mL浓度HHT局部点药与0.1%氟米龙眼液点眼抑制兔LASEK术后haze的效果相似，且未见明显的毒副作用。有望HHT将来应用于临床防治LASEK术后haze,既可大大减轻患者的经济负担，也避免了术后长期滴用激素产生的严重并发症。
参考文献
[1]Singh G,Kaur J .Iatrogenic dry eye :Late effect of topical steroid formulations. J Indian Med Assoc ,1999;34:235-7.
[2] Sundar Raj N,et al. Healing of excimer laser ablated monkey corneas. An immunohistoche mical evaluation.Arch Ophthalmol.1990；108(11)：1604-10.
[3]史丰等.低剂量高三尖杉酯碱防治青光眼滤过术后瘢痕化.中华眼科杂志. 1995;31(5): 45-6.
[4]Cheng AC,etal. Late traumatic flap dislocations after LASIK. J Refract Surg. 2006;22(5):500-4.
[5]彭超等.高三尖杉酯碱防治外伤性增生性玻璃体视网膜病变的临床研究 ......
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