石斛对胃热证大鼠胃粘膜组织形态学的影响
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2010年8月1日
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作者简介:黄雪群(1977年2月),女,讲师,硕士,从事生理学研究。
【摘要】目的:探讨中药石斛对胃热证大鼠胃粘膜组织形态学的影响。方法:用干姜水煎剂连续15天灌胃大鼠,造成胃热证模型,观察石斛大、小剂量(剂量分别为1.5g/kg、0.75g/kg)水煎剂对大鼠胃粘膜病理组织学变化情况。结果:胃热证大鼠胃粘膜呈现出弥漫性充血、粘膜层粘液细胞分泌减少、主细胞、壁细胞数减少、粘膜下层可见中性粒细胞浸润等现象。经石斛水煎剂治疗后,胃热证大鼠的胃粘膜充血减轻、粘膜层粘液细胞分泌增加、主细胞和壁细胞数增加、粘膜下层中性粒细胞减少,其中石斛大剂量组的胃粘膜组织形态学表现与空白对照组接近,石斛小剂量组的胃粘膜组织形态学表现也有明显改善。结论:胃粘膜组织受损是胃热证重要表现之一,石斛水煎剂对此有改善作用,可使其恢复到接近正常水平。
【关键词】石斛;胃热证;胃粘膜组织;大鼠
doi:10.3969/j.issn.1006-1959.2010.08.235文章编号:1006-1959(2010)-08-2206-02
中药石斛(Herba Dendrobii Nobilis)性甘、味微寒,归胃、肾经,具有益胃生津、滋阴清热、明目的功能,用于阴伤津亏、口干烦渴、食少干呕、病后虚热、目暗不明等证状[1]。陈少夫等研究表明,经胃镜及病理检查确诊的浅表性胃炎患者,用胃管注入金钗石斛水煎剂(1g/ml,20ml/15min),胃液检测显示1h和2h的胃排酸量比对照组明显增高,血液检测显示30min和90min的血清胃泌素浓度比对照组明显增高,血浆生长抑素与对照组无明显差异[2];程少斌研究胃康汤(沙参、麦冬、石斛、党参、白术、茯苓、白术等)治疗慢性萎缩性胃炎84例,总有效率为92.8%[3]。本文将探讨石斛对胃热证大鼠胃粘膜组织形态学的影响。
1.材料与方法
1.1动物及分组:SD大鼠90只,SPF级,雄性,体重220~280g,2~3月龄,由广州中医药大学实验动物中心提供(合格证号:粤监证字2005A031号),按体重质量随机分成6组(每组15只):空白对照组Ⅰ,空白对照组Ⅱ,模型对照组Ⅰ,模型对照组Ⅱ,石斛大剂量组;石斛小剂量组。
1.2中药制剂及剂量:干姜、石斛均购自广州寿生堂大药房,由广东药学院药用植物教研室鉴定后分别制成1.0kg/L、0.5kg/L水煎剂。石斛大、小剂量分别按人用剂量(《中华人民共和国药典》2005版第一部中的平均用量)的10倍和5倍计,即:石斛大剂量1.5g/kg,小剂量0.75g/kg。
1.3动物处理:①造模组:用1kg/L的干姜水煎剂以5g/kg剂量灌胃,连续15天[4]。②空白对照组:灌等量的蒸馏水,连续15天。空白对照组Ⅰ和模型对照组Ⅰ于造模完毕处死大鼠,剖腹取出全胃,沿胃大弯侧切开胃壁使粘膜外翻,用生理盐水冲洗去胃内容物,然后将胃置入体积分数为10%的中性甲醛溶液中固定,备用。③治疗组:造模方法同上,造模结束后第2天,分别按设定的大、小剂量灌胃治疗(空白对照组Ⅱ和模型对照组Ⅱ灌胃等量蒸馏水),连续治疗10天后处死大鼠,剖腹取出全胃,沿胃大弯侧切开胃壁使粘膜外翻,用生理盐水冲洗去胃内容物,然后将胃置入体积分数为10%的中性甲醛溶液中固定,备用。
1.4组织病理学观察:将已固定的大鼠胃组织标本用酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,制成石蜡切片,苏木素-伊红(HE)染色,于光镜下观察胃粘膜组织学特点。在荧光显微镜下(HE×400),每张切片取胃窦部5个视野,通过Leica Qwin图像分析系统(每视野图像实际面积为33547.8μm2)读取主、壁细胞数,由计算机软件系统分别统计每视野图中主、壁细胞阳性细胞均数。
1.5统计方法:采用DPS数据处理系统。
2.结果
2.1肉眼观察。空白对照Ⅰ、Ⅱ组的大鼠胃粘膜均色泽淡红,表面光滑有弹性,被覆的粘液无颗粒感,粘膜皱襞完整。模型对照Ⅰ、Ⅱ组的大鼠胃粘膜多呈潮红充血状态,表面有少量斑点状糜烂、出血,部分大鼠胃粘膜表面有苔状分泌物或皱襞明显受损。石斛大剂量组大鼠胃粘膜呈淡红色,与空白对照组相近,剂量组大鼠胃粘膜有半数以上达到空白对照组状态。
2.2光镜观察。各组大鼠胃粘膜组织病理学观察结果显示,空白组的大鼠胃粘膜上皮细胞呈单层柱状、排列整齐,基本无缺损或脱落,胃底腺形状规则,固有层细胞密度正常,粘膜固有层无炎细胞浸润,主细胞、壁细胞数目无明显变化。表明灌胃蒸馏水对大鼠胃粘膜没有造成损伤。造模组的大鼠胃粘膜显著充血、水肿,偶见网状小凹上皮或肠化,表层粘液分泌减少,粘液固有层有中性粒细胞和大单核细胞浸润,但以中性粒细胞为主,上皮细胞有不同程度丧失或破损,部分腺体形状不规则,主细胞和壁细胞数目明显减少。
石斛大剂量组的大鼠胃粘膜上皮细胞完整,基本无充血、水肿,粘液分泌量增加,未见中性粒细胞浸润,主细胞和壁细胞数明显增多,石斛小剂量组治疗的大鼠胃粘膜也有改善,但不及大剂量治疗组明显(结果见表1、图1)。
表1各组大鼠胃粘膜病理变化比较
注:与空白对照组II比较,﹡P<0.05,﹡﹡P<0.01;与模型对照组II比较,⊿P<0.05,⊿⊿P<0.01。
图1各组大鼠胃粘膜组织病理学图片
3.讨论
3.1干姜水煎剂复制胃热证大鼠模型的选择。本实验用5g/kg剂量灌胃1kg/L的干姜水煎剂复制胃热证大鼠模型。造模后大鼠出现胃粘膜充血水肿,表面有少量斑点状糜烂、出血,部分大鼠胃粘膜表面有苔状分泌物或皱壁明显受损,表层粘液分泌减少,粘液固有层有中性粒细胞浸润,上皮细胞有不同程度丧失或破损,部分腺体形状不规则,主细胞和壁细胞数目明显减少。
3.2石斛改善胃粘膜屏障。根据上述动物实验的结果,我们进行了石斛对胃热证大鼠胃粘膜组织疗效的观察,进一步证实了石斛确实具有改善胃粘膜屏障的作用,从肉眼观察石斛大剂量组胃粘膜的修复达到空白对照组水平,而且光镜下观察,石斛大剂量治疗组的大鼠胃粘膜基本无充血、水肿,粘液分泌量增加(P<0.05),这对胃粘膜表面形成“粘液-碳酸氢盐屏障”这一凝胶层保护胃粘膜非常重要。
3.3石斛改善胃的消化功能。胃的消化功能与胃液的成分有关,其中胃蛋白酶原和盐酸是胃液的重要成分,分别主要由主细胞和壁细胞分泌。胃热证大鼠胃粘膜的主细胞和壁细胞都明显减少(P<0.05),石斛大剂量治疗对胃粘膜细胞的修复主要表现在使正常的主细胞、壁细胞增多(P<0.05),因此能改善胃的消化功能。
3.4石斛减轻炎细胞的浸润。炎细胞浸润是胃粘膜受损的重要组织学特征,炎证细胞聚集有助于清除病原体和坏死物质,但由于中性粒细胞产生的活性氧自由基和阳离子蛋白会损伤组织,因此,过多炎证细胞的浸润说明胃粘膜的受到一定程度的损伤[5]。胃热证大鼠胃粘膜粘液固有层有中性粒细胞和大单核细胞浸润,以中性粒细胞为主,石斛大剂量治疗结果表明,使胃粘膜的炎细胞浸润减少(P<0.05),因此,说明石斛可以修复受损胃粘膜 ......
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