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编号:13079235
大鼠阴道上皮细胞体外培养研究进展(2)
http://www.100md.com 2017年10月8日 《医学信息》 2017年第19期
     酶消化法最常用的消化酶有胶原酶,胰酶和中性蛋白酶(Dispase),这些酶既有单独使用,又有联合使用:①胶原酶:培养阴道上皮细胞常用的胶原酶包括Ⅰ型胶原酶、Ⅱ型胶原酶和Ⅳ型胶原酶。胶原酶的消化作用针对性较强,Ⅰ型型胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大,可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损。故胶原酶应与其他酶联合消化细胞,不宜单独使用。②胰酶:胰酶可分解细胞膜表面蛋白质,增加细胞通透性,而且细胞粘附相关的蛋白质也可能被消化,从而达到分离效果,获得单个细胞或细胞团。但若消化时间过长容易造成细胞损伤。对此,刘方方[5]将胰酶消化方法改进为3步消化法,加0.25%胰酶,37 ℃消化10 min,吸管吹打,吸出的悬液用含10% FBS的DMEM/F12 终止消化,剩余组织再加0.25%胰酶消化,重复3次。结果该法获得的细胞数高于一步消化法(直接消化20~30 min),但无显著性差异。在首次换液时贴壁细胞数三步法高于一步法,有显著性差异,结果提示减少酶对细胞的消化作用时间,可以保持细胞的完整性和活性。因此,采用胰酶短时间多次消化终止的方法,可以避免胰酶对细胞的过度消化,从而降低对细胞的损伤 ......
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