1.2方法 两组患者均于清晨采集外周静脉血2 ml，EDTA-Na抗凝，用于PCR檢测，采用PCR-RFLP技术检测Cyclin A2基因型。

    1.2.1 DNA提取 采用DNA提取试剂盒(北京全式金生物技术公司)，提取每份抗凝外周血的总DNA，操作均按说明书进行，将提取好的DNA溶解于pH8.0 TE中，-20 ℃保存备用。

    1.2.2 PCR扩增 PCR(PCR试剂购自TAKARA公司)扩增含有rs769236(G/A)位点的片段：上游引物5'-CGCTCACTAGGTGGCTCAG-3'和下游5'-CCGAGGAGGTTGCGAAAGG-3'(南京金斯瑞生物科技有限公司合成)。PCR反应在20 μl体系中进行， PCR反应条件：95 ℃预变性5 min，然后95 ℃变性30 sec，60 ℃退火30 sec，72 ℃延伸30 sec，共30个循环，最后72 ℃延伸10 min。

    1.2.3 PCR产物凝胶回收 将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，然后切胶回收，操作均按琼脂糖凝胶回收试剂盒(promega公司)说明书进行操作 ......