免疫荧光法检测FSHR与GnRHR在胃癌组织中的分布及其共定位研究(1)
摘 要：目的 研究卵泡刺激素受体与促性腺激素释放激素受体在胃癌组织中的定位、分布及共存性。方法 选取我院胃肠外科经手术和病理证实的48例胃癌患者的病理组织石蜡包块标本，采用免疫荧光双标记定位方法检测胃癌标本中FSHR及GnRHR的定位及分布。结果 FSHR和GnRHR在胃癌组织细胞胞浆中均有分布，免疫荧光反应阳性物质分布于细胞质，细胞核呈阴性反应，二者分布模式相同。结论 FSHR与GnRHR在胃癌组织中分布具有共存性，提示其可能对胃癌的病理发生机制具有重要的影响。
关键词：卵泡刺激素受体；促性腺激素释放激素受体；免疫荧光；胃癌
中图分类号：R329；R735.2 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.23.022
文章编号：1006-1959(2018)23-0079-03
, 百拇医药 Abstract：Objective To investigate the distribution of follicle-stimulating hormone receptor(FSHR) and gonadotropin releasing horm- one receptor (GnRHR) colocalization with at the gastric cancer. Methods Using the immunity fluorescence double mark localization method to examine in 48 example stomach cancer specimen FSHR and the GnRHR localization and the distribution.Results FSHR and GnRHR organize in the cell cytoblastema at the stomach cancer to have the distribution，the immunity fluorescence responded the masculine material distributes in the cytoplasm， the cell nucleus assumes the negative reaction，the two distributed pattern is same. Conclusion FSHR and GnRHR organize the distribution at the stomach cancer to have the coexistence，it is suggested that it may have an important effect on the pathogenesis of gastric cancer.
, http://www.100md.com
Key words：Follicle-stimulating hormone receptor；Gonadotropin releasing hormone receptor；Immune fluorescence；Gastric cancer
卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，FSH)是由腺垂体分泌的性激素，属于G蛋白偶联受体超家族的跨膜糖蛋白，通过与其受体卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor，FSHR)结合后具有促进排卵和精子的生成作用。FSHR是一种跨膜糖蛋白，属于G蛋白偶联受体家族成员，近年实验研究表明，FSHR 存在于人和动物睾丸的支持细胞或卵巢颗粒细胞中，通过与FSH 特异性结合来调节雄性青春期生精细胞的启动、成年期生精过程的维持及雌性卵细胞各阶段的发育[1]。FSHR在多种肿瘤新生血管内皮细胞表面呈高表达，提示FSHR可能是一种潜在的肿瘤标志物。而作为卵泡刺激素上游激素的促性腺激素释放激素(GnRH)，通过其受体(GnRHR)调控着FSH的分泌，我们近期实验研究中发现FSH及其受体也存在于胃癌组织中[2]，但作为其上游激素的GnRH是否存在于胃癌组织中以及GnRH对胃癌组织中存在的FSH的分泌调节影响是自分泌还是旁分泌，目前尚未有形态学依据。为此，我们对FSHR、GnRHR在胃癌组织中的分布及其是否存在共定位关系进行了实验分析研究，为探讨胃癌发生发展的病理机制提供形态学依据。
, http://www.100md.com
1材料與方法
1.1材料 选取2015年1月～2018年1月山东省德州市人民医院胃肠外科经手术和病理证实的48例胃癌患者的病理组织石蜡包块标本，年龄41～77岁，平均年龄(49.00±4.72)岁，性别不限。参考世界卫生组织(WHO)消化系统肿瘤(胃癌)分类，其中高分化18例，中分化7例，低分化23例。所有患者均为第1次手术，且术前未接受任何形式的放疗和化疗。并选48例癌旁组织作为对照。
1.2试剂及仪器
1.2.1试剂 FITC山羊抗小鼠及TRITC山羊抗兔抗体均为北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司提供。兔抗FSHR抗体为上海酶联生物科技有限公司提供(货号：ML 120641；规格 0.3 mg/ml)，羊抗兔GnRHR抗体为空军军医大学黄威权教授提供(规格：0.5 mg/ml)。丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物(BAS)及(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷(APES)(规格：100 ml/瓶；货号：KH550)购自博士德生物工程公司(分装规格：100 ml/瓶)。选用荧光试剂原料为异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)与四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethyl rhodamine isothiocyanate，TRITC)。
1.2.2仪器 电热恒温培养箱(DNP-9162)购于上海精宏实验设备有限公司；恒温水浴锅(HWS12)购于上海一恒科技有限公司；石蜡切片机(SYD-S2010)沈阳誉德电子仪器有限公司；显微镜(BX43)、摄像装置(Moticam Pro 252)及成像软件系统(Motic Images PFSus 2.0)均购于奥林巴斯斯公司。, 百拇医药(马玉涛 石文娜 李晓林)
关键词：卵泡刺激素受体；促性腺激素释放激素受体；免疫荧光；胃癌
中图分类号：R329；R735.2 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.23.022
文章编号：1006-1959(2018)23-0079-03
, 百拇医药 Abstract：Objective To investigate the distribution of follicle-stimulating hormone receptor(FSHR) and gonadotropin releasing horm- one receptor (GnRHR) colocalization with at the gastric cancer. Methods Using the immunity fluorescence double mark localization method to examine in 48 example stomach cancer specimen FSHR and the GnRHR localization and the distribution.Results FSHR and GnRHR organize in the cell cytoblastema at the stomach cancer to have the distribution，the immunity fluorescence responded the masculine material distributes in the cytoplasm， the cell nucleus assumes the negative reaction，the two distributed pattern is same. Conclusion FSHR and GnRHR organize the distribution at the stomach cancer to have the coexistence，it is suggested that it may have an important effect on the pathogenesis of gastric cancer.
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Key words：Follicle-stimulating hormone receptor；Gonadotropin releasing hormone receptor；Immune fluorescence；Gastric cancer
卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，FSH)是由腺垂体分泌的性激素，属于G蛋白偶联受体超家族的跨膜糖蛋白，通过与其受体卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor，FSHR)结合后具有促进排卵和精子的生成作用。FSHR是一种跨膜糖蛋白，属于G蛋白偶联受体家族成员，近年实验研究表明，FSHR 存在于人和动物睾丸的支持细胞或卵巢颗粒细胞中，通过与FSH 特异性结合来调节雄性青春期生精细胞的启动、成年期生精过程的维持及雌性卵细胞各阶段的发育[1]。FSHR在多种肿瘤新生血管内皮细胞表面呈高表达，提示FSHR可能是一种潜在的肿瘤标志物。而作为卵泡刺激素上游激素的促性腺激素释放激素(GnRH)，通过其受体(GnRHR)调控着FSH的分泌，我们近期实验研究中发现FSH及其受体也存在于胃癌组织中[2]，但作为其上游激素的GnRH是否存在于胃癌组织中以及GnRH对胃癌组织中存在的FSH的分泌调节影响是自分泌还是旁分泌，目前尚未有形态学依据。为此，我们对FSHR、GnRHR在胃癌组织中的分布及其是否存在共定位关系进行了实验分析研究，为探讨胃癌发生发展的病理机制提供形态学依据。
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1材料與方法
1.1材料 选取2015年1月～2018年1月山东省德州市人民医院胃肠外科经手术和病理证实的48例胃癌患者的病理组织石蜡包块标本，年龄41～77岁，平均年龄(49.00±4.72)岁，性别不限。参考世界卫生组织(WHO)消化系统肿瘤(胃癌)分类，其中高分化18例，中分化7例，低分化23例。所有患者均为第1次手术，且术前未接受任何形式的放疗和化疗。并选48例癌旁组织作为对照。
1.2试剂及仪器
1.2.1试剂 FITC山羊抗小鼠及TRITC山羊抗兔抗体均为北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司提供。兔抗FSHR抗体为上海酶联生物科技有限公司提供(货号：ML 120641；规格 0.3 mg/ml)，羊抗兔GnRHR抗体为空军军医大学黄威权教授提供(规格：0.5 mg/ml)。丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物(BAS)及(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷(APES)(规格：100 ml/瓶；货号：KH550)购自博士德生物工程公司(分装规格：100 ml/瓶)。选用荧光试剂原料为异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)与四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethyl rhodamine isothiocyanate，TRITC)。
1.2.2仪器 电热恒温培养箱(DNP-9162)购于上海精宏实验设备有限公司；恒温水浴锅(HWS12)购于上海一恒科技有限公司；石蜡切片机(SYD-S2010)沈阳誉德电子仪器有限公司；显微镜(BX43)、摄像装置(Moticam Pro 252)及成像软件系统(Motic Images PFSus 2.0)均购于奥林巴斯斯公司。, 百拇医药(马玉涛 石文娜 李晓林)