尾悬吊模拟失重对大鼠肺组织细胞凋亡的影响及其干预(2)
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1.2 肺组织病理学检查
悬吊组、对照组和地塞米松干预组分别于7 d、21 d悬吊结束时用10%水合氯醛30 ml/kg将大鼠腹腔注射麻醉后，打开胸腔取出肺组织，用10%甲醛磷酸缓冲液固定，按常规脱水、石蜡包埋，用切片机切成3 μm厚的切片贴在载玻片上，做HE染色，用光学显微镜观察细胞凋亡情况。
1.3 肺组织原位细胞凋亡检测
切片常规脱蜡至水；用3% H2O2封闭10 min，蒸馏水洗涤3×2 min；加TBS 1 : 100稀释的Proteinase K 37 ℃消化15 min，TBS洗涤3×2 min；加TdT和DIG-d-UTP各1 ml，37 ℃标记2 h，TBS洗涤3×2 min；加封闭液50 μl室温30 min后，用封闭液1 : 100稀释的生物素化抗地高辛抗体50 μl 37 ℃反应30 min，TBS洗涤3×2 min；用TBS 1 : 100稀释的SABC 1 m1 37 ℃反应10 min，TBS洗涤4×5 min；DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，封片，用显微镜观察细胞凋亡情况[5]。凋亡阳性细胞的细胞核中有棕黄色颗粒 ......
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