RNAi抑制肝星状细胞TIMP-I基因表达及对细胞生物学行为的影响(2)
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别于12、24、48 h后进行检测。
1.2.7 RT-PCR检测TIMP-I基因表达
去除转染后的培养液，加入1mL Trizol试剂，提取总RNA，RT-PCR扩增目的基因，具体方法同前。
1.2.8 MTT法检测CFSC增殖
CFSC细胞按每孔1×104个接种于96孔板，于37℃、CO2条件下培养24h，每组设6个复孔，分组为：①空白细胞对照组；②转染试剂对照组；③siRNA转染组，操作按试剂书说明进行，每孔加脂质体1μL，其中第③组加入TIMP-I siRNA lμg比例，以转染结束的时间点定为0h，各组继续常规培养，分别于12、24、48 h终止培养，每孔中加MTT 20μL(10g/L)，同样条件下保温4h，弃上清，每孔加入200μL二甲基亚矾(DM-SO)，混匀，在酶标仪上测定波长570nm处吸光度(A)值，计算各时间点CFSC的存活抑制率，实验重复2次。
1.2.9 流式细胞仪检测细胞调亡
参照AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒说明书 ......
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