青蛤多糖提取的条件优化及其抗肿瘤活性研究(2)
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2010年5月1日
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11000.32323.5696
21200.57977.6718
31400.48016.0789
3.1.2酸解条件
当加入盐酸的量为100mL、120mL和140mL时,酸解后所测得的吸光值为0.3232、0.5797和0.4801,由标准曲线可得相对应的糖含量分别是3.5696 mg/L、7.6718mg/L和6.0789mg/L(图1,表2),各组数据差异性均显著(P<0.05),且当加酸量为120mL时,糖的提取率最高,每100g青蛤组织可得1.8048g多糖。
3.2重复性实验
3次平行测定,青蛤多糖的平均含量为每100g青蛤组织可得1.8232g多糖,RSD为0.407%(n=3),表明重现性良好。
3.3青蛤多糖对DU145细胞增殖的作用
不同浓度青蛤多糖作用于前列腺癌细胞48h后,癌细胞出现明显的增殖抑制现象,且随着浓度的增加抑制率逐渐增大,当浓度为6.5mg/mL时,抑制率达到67.90%(表3)。
表3 青蛤多糖对前列腺癌细胞的增殖抑制率
Groupcontent(mg/ml)OD (x±s)Inhibit rate(%)
control0.00.471±0.045*—
11.50.369±0.022*21.26
22.50.327±0.017*30.57
33.50.289±0.007*38.51
44.50.244±0.009*48.21
55.50.187±0.004*60.23
66.50.151±0.011*67.90
* P<0.05vs control group
4讨论
由于青蛤肉中含有大量的蛋白质、脂肪等成分,对实验结果产生干扰,因此需进行除蛋白等处理。对动物多糖除蛋白、脱脂等去除杂质的方法有酶降解法、碱处理法、酸降解法等[12-14],而多糖含量的测定通常采用滴定分析法、苯酚一硫酸显色法、蒽酮显色法等方法,其中以苯酚一硫酸显色法较为可靠,现被作为测定多糖的首选方法[15]。本研究采用水提和酸解相结合的方法,通过单因素实验确定了青蛤多糖提取的最佳工艺。当料液比为1:5,经盐酸除杂后,糖的提取率最高,经重复性试验再现性很好。在最佳工艺条件下提取的多糖经体外抗肿瘤实验表明,该糖具有显著的抗肿瘤活性,对肿瘤细胞的半数抑制率约为4.6mg/mL,且多糖浓度与增长抑制率呈量效关系。
参考文献
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[6] 欧阳高亮,李棋福,田长海.海洋生物抗肿瘤活性物质及其作用机理研究进展[J].海洋科学,2003,27(7):21-24.
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[8] Leung MYK,Liu C,Koon JCM,et al.Polysaccharide biological response modifiers[J] ......
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