小儿肌性斜颈动物模型研制(2)
要足以影响到肌肉中轴(心)，或整个节段。而对于其病理特征，同空白组相比，三种造模方法都不同程度地引发了局部纤维化，满足了肌性斜颈的基本病理改变。其实，动物模型和其要模拟的人类的真实状态总是有所差别的，如氢化考的松塑造阳虚和阴虚模型、频繁断尾塑造单纯性消化功能不良模型，和限制活动与冷水冲淋塑造慢性疲劳综合征模型等都与真实疾病有很大差别。造成差别的原因可能因为动物和人有本质区别，因为动物和人类疾病不完全互通，因为不少疾病的原因还未知(不知道其真实原因，当然就只有模拟其表象了)，还因为症状和体征本身并不具有特异性等。所以，在模型的研制过程中，人们更注重病理特征而不是症状和体征的塑造。从这一点上说，我们的造模是成功的。
6.2 三种造模方法比较 颈外静脉结扎法是目前所能见到的唯一报导的CMT造模方法。其机理在于结扎颈外静脉后SCM局部静脉回流障碍，最终使局部组织变性与坏死，并纤维化。但在预试中，我们发现这种方法造模效果并不理想，有些幼兔甚至完全无纤维增生。为此，我们探讨了新方法，而只将其设为对照组。从结果可见，它的造模效果确实较注射无水酒精差。无水酒精是临床常用的传统硬化剂，多用于肝癌、肾囊肿等疾病的治疗。其作用机理为无水酒精进入瘤体内，一方面直接使肿瘤细胞脱水，蛋白凝固，瘤体细胞变性坏死；另一方面血管内皮细胞脱水，血管闭塞，血供停止，也致肿瘤缺血坏死，最终局部纤维化。事实上，在任何组织内注入高浓度乙醇都可以发生类似现象。我们正是基于以上认识而选择无水酒精局部注射的。根据本研究结果，这种方法应该是可行的。消痔灵注射液为脏肠科治疗痔疮的硬化剂，其主要成分为明矾、三氯叔丁醇、甘油、鞣酸、低右等，具有收敛、止血、抗炎、修复等作用。其作用机理也在于注射后局部组织无菌性炎症，蛋白质凝固、血管腔闭塞，继发纤维组织增生。
, http://www.100md.com
三种造模方法比较，B组纤维增生程度较A、C两组明显，出现时间也较A、c两组早。其可能原因为：A属于机械原理造模。A组在结扎颈外静脉后，将要经历由静脉瘀血、组织间毛细血管淤血，发展至动脉供血障碍的过程；这一过程需要时间，同时由于静脉和动脉的侧枝循环，使结扎单一血管最终能否形成整个肌肉细胞的变性、坏死和纤维组织增生存在不确定性。这应该是最主要原因。本实验A组30天后的标本较15天后的阳性率高与谢宝珊等报导的第1个月病理改变不如第3个月相一致，说明这种方法复制CMT动物模型需要较长时间，且其病理变化复杂，不会在短期内呈现明显的纤维化特征。而B、C属于化学原理造模。因直接在局部注入化学药品，其对局部的腐蚀、烧灼、脱水等立即发生，组织细胞变性和坏死也很快发生(有人报导注入无水酒精5分钟内就可见到组织细胞蛋白凝固变性和坏死)，损伤组织的自我修复也相继进行，故其形成纤维化的时间短且明显。这是B、C两组15天模型阳性率高于A组的原因。无水酒精和消痔灵虽然同为硬化剂，其药理作用基本一致，即均导致局部组织脱水、变性、坏死和纤维组织增生，但因为消痔灵为混合物，其浓度远低于无水酒精，其对局部组织的刺激(损伤)强度较无水酒精小，局部肉芽组织增生不典型，成纤维细胞含量较少，故其病理变化不如B组明显。
, 百拇医药
综上所述，运用无水酒精造模具有时间短，纤维增生明显等特点，是一种简便可靠的塑造CMT病理模型的方法，值得推广。
6.3 病理检测指标的意义
6.3.1 HE病理检测：早在1893年，Taylor解剖了SCM肿块，发现正常肌肉组织被肌束间的纤维组织所替代而变成了白色(纤维组织的颜色)。Apple对SCM肿块进行针吸病理活检，发现肌纤维萎缩，部分细胞变性，被分隔成小岛状，其间被增生的纤维母细胞，纤维细胞及胶原纤维浸及，提出了间质增生及纤维化是该病的病理特征。Gonzales观察到在纤维增生的过程中，有时可见较多血管或增生的母细胞，个别区域有炎性浸润，表明纤维增生来自肉芽组织，是肌肉组织退变之后的一种修复反应。所以，HE病理检测是直观了解纤维化程度的指标。
6.3.2 α-SMA免疫组化检测：α-SMA是肌纤维母细胞细胞表型的标志性蛋白㈣。它反应了纤维母细胞的存在和含量。Kischerml等发现在局部缺血缺氧时，纤维母细胞将转化为肌纤维母细胞，并合成和释放大量胶原，从而引发局部纤维化发生。唐氏发现α-SMA在CMT中呈高表达率，而正常人的α-SMA却呈阴性表达，提示该指标对判断纤维化有意义。, 百拇医药(廖品东 冯 跃 李 敏)
6.2 三种造模方法比较 颈外静脉结扎法是目前所能见到的唯一报导的CMT造模方法。其机理在于结扎颈外静脉后SCM局部静脉回流障碍，最终使局部组织变性与坏死，并纤维化。但在预试中，我们发现这种方法造模效果并不理想，有些幼兔甚至完全无纤维增生。为此，我们探讨了新方法，而只将其设为对照组。从结果可见，它的造模效果确实较注射无水酒精差。无水酒精是临床常用的传统硬化剂，多用于肝癌、肾囊肿等疾病的治疗。其作用机理为无水酒精进入瘤体内，一方面直接使肿瘤细胞脱水，蛋白凝固，瘤体细胞变性坏死；另一方面血管内皮细胞脱水，血管闭塞，血供停止，也致肿瘤缺血坏死，最终局部纤维化。事实上，在任何组织内注入高浓度乙醇都可以发生类似现象。我们正是基于以上认识而选择无水酒精局部注射的。根据本研究结果，这种方法应该是可行的。消痔灵注射液为脏肠科治疗痔疮的硬化剂，其主要成分为明矾、三氯叔丁醇、甘油、鞣酸、低右等，具有收敛、止血、抗炎、修复等作用。其作用机理也在于注射后局部组织无菌性炎症，蛋白质凝固、血管腔闭塞，继发纤维组织增生。
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三种造模方法比较，B组纤维增生程度较A、C两组明显，出现时间也较A、c两组早。其可能原因为：A属于机械原理造模。A组在结扎颈外静脉后，将要经历由静脉瘀血、组织间毛细血管淤血，发展至动脉供血障碍的过程；这一过程需要时间，同时由于静脉和动脉的侧枝循环，使结扎单一血管最终能否形成整个肌肉细胞的变性、坏死和纤维组织增生存在不确定性。这应该是最主要原因。本实验A组30天后的标本较15天后的阳性率高与谢宝珊等报导的第1个月病理改变不如第3个月相一致，说明这种方法复制CMT动物模型需要较长时间，且其病理变化复杂，不会在短期内呈现明显的纤维化特征。而B、C属于化学原理造模。因直接在局部注入化学药品，其对局部的腐蚀、烧灼、脱水等立即发生，组织细胞变性和坏死也很快发生(有人报导注入无水酒精5分钟内就可见到组织细胞蛋白凝固变性和坏死)，损伤组织的自我修复也相继进行，故其形成纤维化的时间短且明显。这是B、C两组15天模型阳性率高于A组的原因。无水酒精和消痔灵虽然同为硬化剂，其药理作用基本一致，即均导致局部组织脱水、变性、坏死和纤维组织增生，但因为消痔灵为混合物，其浓度远低于无水酒精，其对局部组织的刺激(损伤)强度较无水酒精小，局部肉芽组织增生不典型，成纤维细胞含量较少，故其病理变化不如B组明显。
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综上所述，运用无水酒精造模具有时间短，纤维增生明显等特点，是一种简便可靠的塑造CMT病理模型的方法，值得推广。
6.3 病理检测指标的意义
6.3.1 HE病理检测：早在1893年，Taylor解剖了SCM肿块，发现正常肌肉组织被肌束间的纤维组织所替代而变成了白色(纤维组织的颜色)。Apple对SCM肿块进行针吸病理活检，发现肌纤维萎缩，部分细胞变性，被分隔成小岛状，其间被增生的纤维母细胞，纤维细胞及胶原纤维浸及，提出了间质增生及纤维化是该病的病理特征。Gonzales观察到在纤维增生的过程中，有时可见较多血管或增生的母细胞，个别区域有炎性浸润，表明纤维增生来自肉芽组织，是肌肉组织退变之后的一种修复反应。所以，HE病理检测是直观了解纤维化程度的指标。
6.3.2 α-SMA免疫组化检测：α-SMA是肌纤维母细胞细胞表型的标志性蛋白㈣。它反应了纤维母细胞的存在和含量。Kischerml等发现在局部缺血缺氧时，纤维母细胞将转化为肌纤维母细胞，并合成和释放大量胶原，从而引发局部纤维化发生。唐氏发现α-SMA在CMT中呈高表达率，而正常人的α-SMA却呈阴性表达，提示该指标对判断纤维化有意义。, 百拇医药(廖品东 冯 跃 李 敏)