基于Ｓｍａｄ3的抗瘢痕增生药物高通量筛选体系的构建及效果评价
基于Smad3的抗瘢痕增生药物高通量筛选体系的构建及效果评价,COLA基序,不稳定增强型绿色荧光蛋白,圈套
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唐辉 梁晚益 刘旭盛 李金玺 黄跃生 第三军医大学西南医院烧伤科创伤烧伤与复合伤国家重点实验室 第三军医大学西南医院烧伤科创伤烧伤与复合伤国家重点实验室 第三军医大学西南医院烧伤科创伤烧伤与复合伤国家重点实验室 第三军医大学西南医院烧伤科创伤烧伤与复合伤国家重点实验室 第三军医大学西南医院烧伤科创伤烧伤与复合伤国家重点实验室
【摘要】目的:构建Smad3反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2EGFP)报告系统,作为抗瘢痕增生药物高通量筛选体系。方法:分别以EGFP、d2EGFP为报告基因,neor为筛选基因,构建以4×成纤维细胞α2Ⅰ型前胶原(COL1A2)基序为增强子、SV40为启动子的报告基因载体p4COL1A2-EGFP和p4COL1A2-d2EGFP,并分别稳定转染NIH3T3细胞,获得Smad3反应性报告细胞株NIH3T3-d2EGFP和NIH3T3-EGFP。分别向两种细胞株中加入TGF-β1,比较不同时相点d2EGFP和EGFP的表达。应用Smad3“圈套”寡核苷酸(TFD)转染NIH3T3-d2EGFP,加入TGF-β1,观察TFD对TGF-β1诱导d2EGFP表达的拮抗作用。结果:NIH3T3-d2EGFP是较理想的Smad3反应性报告细胞株,Smad3TFD对TGF-β1诱导调控d2EGFP的表达具有明显的拮抗作用。结论:Smad3反应性d2EGFP报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测Smad3的活性变化。
【关键词】 Smad COLA基序 不稳定增强型绿色荧光蛋白 圈套
【基金】国家自然科学基金资助项目(30371471)
【分类号】R965.1
烧伤创面愈合后常出现明显的瘢痕增生,严重损害烧伤部位的功能和外观,降低患者的愈后生活质量。瘢痕增生防治已成为烧伤外科亟待解决的问题。但迄今为止,人们尚未找到一种十分有效的抗瘢痕增生药物,其中一个重要的原因是缺乏抗瘢痕增生药物的高效筛选体系。TGF-β1在瘢痕增生
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[摘要]目的：构建Smad3反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2EGFP)报告系统，作为抗瘢痕增生药物高通量筛选体系。方法：分别以EGFP、d2EGFP为报告基因，neor为筛选基因，构建以4x成纤维细胞a 2 Ⅰ型前胶原(COLlA2)基序为增强子、SV40为启动子的报告基因载体p4COLlA2-EGFP和p4COLlA2-d2EGFP，并分别稳定转染NIH3T3细胞，获得Smad3反应性报告细胞株NIH3T3—d2EGFP和NIH3T3-EGFP。分别向两种细胞株中加入TGF-β1，比较不同时相点d2EGFP和EGFP的表达。应用Smad3“圈套；寡核苷酸(TFD)转染NIH3T3-d2EGFP，加入TGF-β1，观察TFD对TGF-β1诱导d2EGFP表达的拮抗作用。结果：NIH3T3—d2EGFP是较理想的Smad3反应性报告细胞株，Smad3 TFD对TGF-β1诱导调控d2EGFP的表达具有明显的拮抗作用。结论：Smad3反应性d2EGFP报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测Smad3的活性变化。
[关键词]Smad3；COLlA2基序；不稳定增强型绿色荧光蛋白；圈套
[中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1008-645 5(2006)05—0521—04
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