压应力对增生性瘢痕成纤维细胞生长特性的影响(2)
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参见附件(3439KB，6页)。
1材料和方法
1.1 试剂与设备：DMEM培养基(Hyclone 公司)；HANK'S(Hyclone 公司)；PBS(迈新)；胎牛血清(Euroclone)；四甲基偶氮唑盐(MTT，Sigma公司)；二甲基亚砜(Amersco公司，美国)；胰蛋白酶(Sigma公司)；倒置相差显微镜(Olympus CK40)；酶联免疫检测仪(DG3022A型，华东电子管厂)；Annexin-V-PI试剂盒(JingMei)；PCNA试剂盒，DAB显色剂(迈新公司)；细胞加压装置(自行改装简易气控加压细胞培养仪，专利申请已公示，见图1)。
1.2 增生性瘢痕的来源：增生性瘢痕组织取自2006年2月本院烧伤科患者(女性，20岁，全身大面积热烧伤愈合后3月，颈胸部形成大片瘢痕，取材部位为前胸壁，术后病理诊断为增生性瘢痕组织)手术后志愿捐赠。
1.3 方法
1.3.1 增生性瘢痕成纤维细胞的培养：采用组织块培养法。取新鲜瘢痕组织，去除表皮和皮下组织，在少量胎牛血清(FCS)中剪碎，组织块(0.5～3mm)接种于培养瓶，在体积分数为5%的CO2、37℃条件下培养4h，然后加入含体积分数为20%FCS的DMEM8ml，继续培养，每3天换液1次，待原代培养细胞生长融合成片，以2.5g/L胰蛋白酶消化，传代培养，取第4～8代细胞备用。
1.3.2 压应力对增生性瘢痕成纤维细胞形态的影响：将HSFb以每孔1×105个细胞分别接种于两块6孔培养板，均置入常规CO2培养箱12h贴壁后，一块以常规CO2培养箱培养细胞，一块移入简易气控加压细胞培养仪培养细胞，均培养4天后取出，倒置相差显微镜观察细胞形态。
1.3.3 压应力对增生性瘢痕成纤维细胞增殖活性的影响将HSFb以每孔1×104个细胞接种于96孔培养板，每孔体积200μl。以常规CO2培养箱分别培养2、4、6、8天后检测指标为对照组；细胞贴壁后移入简易气控加压细胞培养仪 ......
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